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一种猪蓝耳病重组疫苗: 本发明公开了一种猪蓝耳病重组疫苗，将猪蓝耳病病毒ORF3基因和ORF5基因串联，构建了融合基因<i>ORF3-ORF5</i>，插入真菌特异性双T-DNA安全表达载体pCB130NG中，获得一种表...; 李海燕李晓薇李玉王法微赵竟男李校堃王琦刘秀明姚娜孙天旭董园园王南王秀然卢天成王岩孙喆; 文献传递

KGF-2单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立被引量：3: 2010年; 目的建立KGF-2单克隆抗体间接ELISA的筛选方法 ,制备KGF-2单克隆抗体.方法以KGF-2为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清.通过棋盘滴定方法确定间接ELISA的抗原包被浓度及一抗、二抗最佳工作浓度;利用建立特异性好的间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞株.结果通过棋盘滴定最终确定了500μg/L的抗原包被浓度、1∶1 000的一抗血清稀释倍数及1∶2 000的二抗血清稀释倍数;筛选到两株可稳定分泌抗体、效价较高的杂交瘤细胞株.结论该研究建立了灵敏度高、特异性好的间接ELISA筛选体系,可用于KGF-2单克隆抗体的制备及检测.; 朱佳男姚娜官丽莉车莹李校堃; 关键词：杂交瘤细胞

高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂: 本发明公开了高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂，通过构建真菌特异性表达植酸酶phyA基因的安全表达载体pCB130NG‑phyA，并转入蛹虫草原生质体，再生获得转基因蛹虫草子实体后，以子实体为母种，培养制得转基因蛹虫...; 李海燕陈欢李晓薇李玉王法微李晰亮刘秀明姚娜董园园王南王琦王秀然卢天成王岩孙喆孙天旭; 文献传递

一种植物干旱诱导型人工合成启动子SP2及应用: 本发明公开了一种大豆诱导启动子SP2，属于人工合成启动子构建，它是以G‑box、ABRE、ABF、SORLIP1、CCA1、E2F为基本顺式元件，每个元件串联重复4次，两元件中间以7‑9个碱基的随机序列间隔，将以上设计片...; 李海燕李晓薇王法微刘伟灿王南董园园刘秀明姚娜刘欣肖洪庆戢舒涵

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：9: 2011年; 目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。; 车莹李校堃胡培声颜江华姚娜蔡琳林绍强王生育朱佳男; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体夹心ELISA

红花花青素合成酶基因的克隆及表达分析被引量：3: 2014年; 根据红花转录物测序结果中得到的中间序列,采用RT-PCR和RACE方法从红花花瓣中克隆到1个ANS基因的全长cDNA,该基因全长序列1 226 bp,具有完整的开放阅读框(ORF),共1 050 bp,编码349个氨基酸。生物信息学软件分析显示,该基因编码的蛋白理论分子量约为82.27 kDa,等电点为5.09,序列里含有典型的加尾信号序列AATAA和Poly(A)。保守结构域预测表明,该基因编码的蛋白具有典型的ANS蛋白功能结构域,其保守结构域中含有铁离子及2-O-酮戊二酸结合位点。结合其他物种的ANS基因构建系统树表明,红花ANS基因与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其中与芍药的亲缘关系最近。应用实时荧光定量PCR分析表明,ANS基因在红花的初花期和盛花期的表达量最高。; 刘秀明杨文婷赵利旦董园园姚娜王南官丽莉李海燕李校堃; 关键词：红花 REAL-TIME PCR

红花天冬氨酸激酶基因片段的分离及表达分析被引量：3: 2015年; 目的克隆红花种子中的天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)基因并研究其在种子不同发育时期的表达量。方法根据红花转录组文库注释信息筛选与红花天冬氨酸激酶(Ct AK)基因相关的Unigenes,设计引物,以红花种子总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增Ct AK基因片段并连接到克隆载体上,经PCR及酶切鉴定,筛选阳性克隆进行测序。同时利用荧光定量PCR技术对其进行基因表达量的分析。结果克隆了红花Ct AK基因的核心片段,分离到486 bp的基因序列。根据Ct AK基因片段设计引物,对不同品种不同发育时期红花种子进行荧光定量PCR分析,Ct AK基因在红花品种川红1号初花后13 d表达量最高。结论系统发育树分析表明,该基因与其他物种的AK基因具有较高的同源性。; 王艳芳张娜张玲张伟李喜明刘伟灿杨晶姚娜李海燕李校堃; 关键词：红花天冬氨酸激酶基因克隆同源性基因表达

红花CYP75A1基因及其应用: 本发明公开了红花CYP75A1基因，是以红花花瓣的RNA反转录的cDNA为模板进行编码区序列的扩增，获得序列为1287bp的基因，命名为CtCYP75A1；利用红花CYP75A1基因构建载体转化烟草叶片，经实验表明，Ct...; 刘秀明李海燕姚娜董园园王南李晓薇王法微刘欣高延妍刘伟灿

高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂: 本发明公开了高表达植酸酶的食药用真菌菌丝饲料添加剂，通过构建真菌特异性表达植酸酶phyA基因的安全表达载体pCB130NG-phyA，并转入蛹虫草原生质体，再生获得转基因蛹虫草子实体后，以子实体为母种，培养制得转基因蛹虫...; 李海燕陈欢李晓薇李玉王法微李晰亮刘秀明姚娜董园园王南王琦王秀然卢天成王岩孙喆孙天旭; 文献传递

红花ERF1转录因子的克隆及植物表达载体的构建: 2019年; 目的克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列,并构建植物表达载体。方法在红花转录组测序基础上,利用RT-PCR方法克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列(Ct ERF1)并进行生物信息学分析,利用ClustalW 1.83软件构建系统进化树,在Ct ERF1基因序列两端引入SpeI和XbaI酶切位点,构建含有35S启动子的植物超表达载体p BASTA-Ct ERF1。结果 CtERF1基因编码297个氨基酸,且具有典型的AP2/ERF基因的功能结构域,含有1个AP2区域,为ERF亚族蛋白,亚细胞定位分析推测其定位在细胞质和细胞核上。系统进化分析表明,Ct ERF1基因编码氨基酸与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其中与杨树和人参的亲缘关系最近。通过分子生物学方法,成功构建p BASTA-CtERF1植物表达载体。结论成功克隆了1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区基因Ct ERF1,并构建了植物表达载体p BASTA-Ct ERF1。; 刘秀明吕彦曦杨龙宇杜卫红宫彦红刘建雨董园园姚娜李海燕; 关键词：红花基因克隆植物表达载体

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姚娜