周松峰
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广西壮族自治区科技攻关计划农业部农业科技跨越计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测被引量：3
- 2012年
- 目的为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白。方法本研究利用特异性引物从重组质粒pMD-2E8scFv和pMD-G中以PCR方法扩增2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和Kg基因(狂犬病毒G基因主要抗原表位区),采用重叠延伸(SOE)PCR法拼接成融合基因2E8Kg,构建原核表达质粒pET-Trx-2E8Kg并将其转化至BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达并对诱导菌液进行SDS-PAGE分析。结果 2E8Kg融合基因获得了高效表达并主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的23.5%左右,分子量约为77.7kD,与预期的大小一致。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达到98.9%。结论经Western-blot检测和红细胞凝集试验证明,2E8kg融合蛋白既能够与狂犬病毒(RV)高免血清发生特异性反应,又能够与人红细胞结合,具有双功能特性。
- 周松峰廖文军覃绍敏袁书智白安斌吴健敏
- 关键词：狂犬病毒G基因单链抗体原核表达
- 1986--2011年广西猪瘟流行监测及遗传变异分析被引量：7
- 2013年
- 采用Nested-PCR方法对采自广西各地1986-2011年间,199个猪场(养殖户)的1 521份样品进行CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、HPS等病原的检测及流行病学调查,结果发现广西猪瘟以混合感染为主,病性复杂。尽管保育猪发病仍占第1位,但近年来母猪繁殖障碍、无症状带毒感染的发病率已明显提高。通过对25年来收集的77株广西CSFV流行株E2基因的比较分析,发现广西猪瘟流行株分为基因I群和II群,目前仍未发现基因III群。起源于欧洲大陆的S2.1亚型毒株已经成为广西的优势流行株,多引起临床的急性和亚急性感染;以SHIMEN株为代表的中国经典毒株S1.1亚型是造成母猪繁殖障碍、隐性带毒感染的主要毒株。流行于20世纪80-90年代间的基因S2.2及S2.3亚型毒株已经基本消失,值得进一步研究。广西CSFV流行株E2蛋白部分关键氨基酸位点已经发生变异,可能会导致疫苗的不完全保护。
- 谭颖翌毛燕吴健敏覃绍敏马玲白安斌廖文军欧阳康周松峰
- 关键词：CSFVE2
- 红细胞凝集试验检测狂犬病毒G抗体方法的建立及应用
- 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus，RV)引发的一种人兽共患传染病，几乎感染所有的温血动物和人，能引起急性致死性脑脊髓炎，一旦发病，病死率几乎100％，是迄今为止，病死率最高的急性传染病，已经成为严重危害公共...
- 周松峰
- 关键词：狂犬病毒
- 狂犬病毒G抗体新型红细胞凝集试验检测方法的建立
- 目的 疫苗免疫是有效控制狂犬病传播的重要手段,本研究建立一种简便、快速、直观、可现场操作的定量检测狂犬病毒G抗体的新型红细胞凝集试验方法,为农村等基层单位开展狂犬病监测及疫苗免疫效果评估提供一种简便、快速、可现场操作的检...
- 周松峰廖文军白安斌覃绍敏袁书智袁洁林俊赵武吴健敏
- 抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及检测狂犬病毒G抗体红细胞凝集试验方法的建立
- 为建立一种简便、快速、直观检测狂犬病毒抗体的红细胞凝集试验方法,本研究采用重叠延伸(SOE)PCR法将抗人红细胞H抗原单链抗体基因(2E8ScFv)和狂犬病毒G基因主要抗原表位区(KG基因)拼接成融合基因2E8KG,进而...
- 周松峰廖文军白安斌覃绍敏袁书智林俊袁洁赵武闭炳芬吴健敏
- 关键词：狂犬病毒G基因
- 文献传递
- 猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达
- 2010年
- 根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。
- 黄百花刘文娟李志勇谭春萍周松峰谭颖翌罗佳陆芹章
- 关键词：毒素基因原核表达
- 伪狂犬病病毒主要抗原表位基因KgE的表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 从伪狂犬病病毒(PRV)基因组中克隆出KgE抗原表位基因,并将其插入到原核表达载体pET-Trx中,构建了原核表达质粒pET-Trx-KgE,将pET-Trx-KgE转化至BL21(DE3)plysS中,在IPTG诱导下进行表达。SDS-PAGE分析表明,KgE基因在BL21(DE3)plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的32.8%,主要以包涵体形式存在,分子质量约为36ku。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达到99.2%。Western blot检测发现,表达的KgE蛋白能够与PRV高免血清发生特异反应,但与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等阳性血清不发生反应,表明KgE蛋白具有良好的抗原性。
- 周松峰吴健敏关忠宜廖文军白安斌
- 关键词：伪狂犬病病毒原核表达
- 狂犬病毒G基因主要抗原表位区(Rmg)的表达及纯化被引量：2
- 2011年
- 【目的】对狂犬病毒Rmg基因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础。【方法】用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg,将pET-Trx-Rmg转化BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下进行表达。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Rmg基因在BL21(DE3)plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的30.5%左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为51.7kDa。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达99.1%。经Western blotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)阳性血清不发生反应。【结论】Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条。
- 周松峰廖文军袁书智覃绍敏白安斌吴健敏陆芹章
- 关键词：狂犬病病毒原核表达
