周映云 作品数:17 被引量:55 H指数:5 供职机构: 广州中医药大学热带医学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国博士后科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
猴免疫缺陷病毒荧光定量聚合酶链反应检测标准品的体外合成 被引量:2 2007年 【目的】合成猴免疫缺陷病毒(SIV)荧光定量检测标准品,并总结出核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则。【方法】首先寻找到SIV保守序列,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,然后在所测得的SIV序列中进一步寻找保守序列,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所获得的PCR产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,再用PCR和电泳检测验证。【结果】通过数次引物调整,最终成功合成了SIV荧光定量PCR标准品。【结论】SIV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①必须选择保守序列;②在选择保守序列之后还需要搜索是否含有较多潜在的终止密码或者起始密码,设计引物使这些中止或起始密码排除在PCR目标产物之外;③必须注意将启动子(如T7启动子)挂在适当的引物上,以保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成好RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完毕的DNA。 何金洋 符林春 陈媛 邓文娣 周映云 周利平关键词:RNA病毒 逆转录聚合酶链反应 中药注射液“喘可治”通过TGF-β通路改善慢性猴艾滋病的淋巴组织纤维化(英文) 被引量:4 2014年 目的:探讨中药注射液"喘可治"改善猴免疫缺陷病毒(SIV)感染的淋巴组织纤维化的作用机制及治疗价值。方法:将12只SIV感染的中国恒河猴随机分为2组,分别给予喘可治和生理盐水,持续给药2个月,定期采集血样和淋巴结,通过免疫组化、流式等技术检测相关指标变化。结果:喘可治可保护和重建感染SIV猴的淋巴结滤泡和T细胞区,使胶原沉积减少,网状组织结构增加并趋于有序,且此变化与TGF-β通路相关。结论:"喘可治"可重建淋巴组织网状结构,据此有望研发出靶向于免疫重建的新治疗方案。 陈滢宇 陈颂 符林春 卢葳 郭卫中 赖春辉 邓文娣 周映云 于靓关键词:猴免疫缺陷病毒 纤维化 巴戟天 中药注射液喘可治对艾滋病猴模型Th17和Treg平衡的影响 被引量:4 2014年 【目的】研究温阳补肾中药注射液喘可治对艾滋病模型猴辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡的影响。【方法】选用12只猴免疫缺陷病毒(SIV)慢性感染的中国恒河猴,分别连续给予肌肉注射喘可治(治疗组,剂量为0.4 mg·kg-1·d-1)及生理盐水(对照组)2个月;于治疗前、治疗第4周和第8周分别检测SIV病毒载量,采用流式细胞仪分析外周血CD4、CD8、Th17(CD4+IL-17A+)和Treg(CD25+FoxP3+)细胞动态变化。【结果】喘可治对病毒载量,CD4、CD8细胞数无明显影响,可使CD25+FoxP3+和CD25+FoxP3-细胞显著减少(P<0.05),CD4+IL-17A+显著减少(P<0.05),Th17/Treg比值略降低。【结论】喘可治可同时降低SIV慢性感染猴外周血的Th17和Treg细胞水平。 陈滢宇 陈颂 符林春 郭卫中 邓文娣 赖春辉 周映云 于靓关键词:艾滋病 猴免疫缺陷病毒 喘可治 温阳补肾 中国恒河猴 扶正利湿解毒法体内外逆转肝纤维化 被引量:7 2007年 目的:观察扶正利湿解毒法基本方(简称基本方)对肝纤维化的逆转作用.方法:采用DMN诱导大鼠肝纤维化,造模结束后随机分为模型对照组,秋水仙碱组,基本方高剂量组,基本方中剂量组及基本方低剂量组并分组给药,同时设空白对照组.灌胃3wk后检测肝组织Hyp,ALT水平;HE,Masson染色.采用HSC-T6细胞培养,药物作用24h后光镜下观察拍照,检测药物对细胞的抑制率并在电镜下观察药物浓度为2g/L时细胞的变化.结果:基本方高、中剂量均可使大鼠肝组织Hyp,血清ALT显著下降(Hyp:213.73±58.05μg/g,245.95±67.70μg/g vs 317.37±42.06μg/g,P<0.01,P<0.05;ALT:33.56±8.16 kU/L,42.38±14.99 kU/L vs 58±10.32 kU/L,P<0.01,P<0.05);Masson染色肝纤维化分级评分显示,基本方高,中剂量均可使肝纤维化程度显著降低(2.33±0.87,2.63±0.74 vs 3.70±0.67,P<0.01,P<0.01),同时显著改善肝组织炎症、出血及纤维沉积;光镜观察及抑制率检测显示基本方呈剂量依赖性抑制HSC-T6细胞增值.电镜显示基本方主要导致HSC-T6细胞凋亡.结论:基本方显示了显著的体内外逆转肝纤维化作用. 何金洋 符路娣 邓文娣 周映云关键词:肝纤维化 逆转作用 MASSON染色 猴免疫缺陷病毒特异性免疫复合物沉着与猴AIDS多系统病变关系的探讨 被引量:2 2007年 目的观察猴免疫缺陷病毒(SIV)感染后,病毒特异性免疫复合物(IC)在不同时间、不同组织的沉着情况,初步研究其与AIDS多系统病变的联系。方法对8只不同时间感染SIV的恒河猴及1只未感染SIV的猴进行尸检以获取多系统组织标本,进行连续切片和IgG、C3、SIV p27免疫荧光染色,并对结果进行比较分析。结果IgG、C3、p27在多个猴、多种组织的相同位置出现相同模式的荧光表达,证明存在IC的沉着;其中脑血管周(8/8),心肌间微血管(6/8)、和淋巴结副皮质(6/8)及生发中心(5/8)是阳性率最高的部位,肾小球及肾间质、肠黏膜固有层也有较多IC的沉着,且在感染中、晚期IC出现的比例更高。结论SIV感染后出现广泛的SIV-IC沉积,且随病情的进展而加重;IC可能是SIV导致AIDS多系统病变的主要形式。针对此过程进行研究,可帮助了解AIDS并发多系统器官病变的机制及研究新的治疗方法。 陈颂 卢耀增 吴小闲 符林春 郭卫中 邓文娣 罗红梅 周映云关键词:SIV 免疫复合物 淋巴结 西双版纳傣族自治州2009-2011年HIV分子流行病学分析 被引量:1 2012年 目的对西双版纳傣族自治州的艾滋病病毒(HIV-1)感染者进行流行病学分析、病毒亚型的检测和耐药性突变的分析,为疫情控制提供依据。方法对2009年7月至2011年6月的348例HIV感染者进行流行病学调查及病毒载量和免疫学检测,并从其中随机抽取50例样本进行部分pol基因序列的测定,据此进行基因型别和耐药性突变的分析。结果 348例HIV感染者,性传播占91.4%;以青壮年感染者较多,其中20~49岁占84.4%;确诊时感染者CD4+T细胞绝对数为(381.0±233.6)个/mm3,病毒载量为(3.81±0.98)log10拷贝数/mL。对50例感染者pol基因测序发现,以欧美B亚型(占60.0%)和CRF08_BC亚型(占20.0%)、CRF01_AE亚型(占14.0%)最为多见。仅1例感染者(CRF08_BC型)检出了M461M蛋白酶抑制剂主要耐药性突变。结论西双版纳傣族自治州的HIV-1新发感染人数仍在快速增加,以性传播为主的趋势进一步明显;有可能发生了欧美B亚型的新流行;而耐药性突变株的流行不明显。 郭卫中 范建华 陈颂 康钧 赖春辉 方华 于靓 刀红 邓文娣 周映云 卢葳关键词:艾滋病病毒 流行病学 耐药性突变 艾可清对猴艾滋病模型的治疗作用 被引量:5 2011年 【目的】应用猴艾滋病模型评价艾可清治疗艾滋病的效果。【方法】以猴免疫缺陷病毒SIVmac239感染12只恒河猴,复制猴艾滋病模型后分为3组:SIV对照组,艾可清高、低剂量组(剂量分别为445.5、148.5 mg.kg-1.d-1),感染10周后开始给药。给药8周后停药观察8周。每4周采集外周静脉血,进行外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞计数检测,分离血浆进行外周血SIV病毒载量检测。每8周行浅表淋巴结活检,进行苏木素—伊红(HE)染色,光镜下分析浅表淋巴结病理表现。【结果】艾可清高剂量组对猴艾滋病模型外周血CD4+T细胞具有一定升高作用,但停药后会下降;艾可清高剂量组血浆病毒载量均数在治疗第4、第8周时分别下降0.188 06 log和0.806 60 log,艾可清低剂量组治疗8周时则下降0.8142log;艾可清高、低剂量组均使浅表淋巴结病变保持稳定。【结论】艾可清对猴艾滋病模型外周血CD4+T淋巴细胞计数有一定的升高作用,对病毒载量有一定的抑制作用,使浅表淋巴结病理变化保持稳定。 何金洋 符林春 沈强 刘亚敏 张苗苗 周红艳 周映云 郭卫中关键词:恒河猴 SIVmac251感染中国恒河猴外周血免疫学及病毒学指标动态变化 被引量:1 2012年 目的观察中国恒河猴感染猴免疫缺陷病毒(simianimmunodeficiencyvirus,sIV)后病毒学和免疫学基本指标的变化规律,探讨中国恒河猴用于艾滋病模型时外周血白细胞(WBC)和CD4+T细胞比例的标准。方法以SIVmac251感染36只中国恒河猴,于感染前1天及感染后1—8周每周及感染后第10周分别采集外周静脉血,检测血常规、外周血淋巴细胞亚群和病毒载量。结果除WBC计数变化不显著外,其余检测指标均在感染后第1、2周时变化最为剧烈;WBC计数在(4—10)×10^6个/ml之间结合外周血CD4+T细胞比例高于25%的可作为艾滋病模型的选猴标准。结论为应用中国恒河猴进行艾滋病研究提供了有益的信息。 何金洋 符林春 刘亚敏 沈强 邓文娣 周映云关键词:中国恒河猴 免疫学 病毒学 苦参碱对刀豆蛋白A致小鼠肝损伤的保护作用 被引量:13 2005年 目的探讨苦参碱对刀豆蛋白A(ConA)所致肝损伤的防治作用。方法48只NIH小鼠随机分为正常对照组、模型组、苦参碱25mg/kg组、苦参碱12.5mg/kg组和联苯双酯治疗组。除正常对照组外,其他组于实验首日静脉注射ConA20mg/kg,苦参碱两个剂量组均采用尾静脉注射给药,联苯双酯组按150mg/kg灌胃口服,每天1次,连续3d,末次给药后4h,再次静脉注射ConA20mg/kg,8h后检测血浆ALT活性及IFN-γ和TNF-α含量,观察肝组织病理学变化。结果苦参碱25mg/kg组、12.5mg/kg组小鼠ALT活性及IFN-γ和TNF-α含量均明显低于模型组,有显著性差异(P<0.01);苦参碱两个剂量组肝脏病理改变明显减轻。结论苦参碱对ConA所致小鼠肝损伤具有较好的防治作用,抑制T淋巴细胞活化和IFN-γ、TNF-α的释放可能是其主要的作用机制。 李常青 刘丽丽 莫传伟 赵日方 陈诗慧 周红燕 周映云关键词:苦参碱 刀豆蛋白A 肝损伤 干扰素Γ 猴艾滋病的发病和治疗机制初步研究 被引量:2 2005年 卢耀增 吴小闲 秦川 何伏秋 涂新明 魏强 陈颂 蒋虹 丛喆 佟巍 刘亚莉 朱华 赖春辉 李国桥 符林春 郭卫中 邓文娣 罗红梅 周映云关键词:SIV 病毒血症 淋巴细胞 白细胞