化冰
- 作品数：27 被引量：171H指数：9
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人Fab金属螯合层析法纯化条件的研究被引量：8
- 1997年
- 在重组人Fab (rhFab)表达载体的羧基端插入六个组氨酸 ,使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附 ,可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化 .采用自制金属 (铜、锌金属离子 )螯合层析介质 ,以 pH和咪唑两种洗脱方法 ,对rhFab段的纯化效果进行了探讨 .结果显示 :铜离子螯合层析介质比锌离子螯合层析介质对rhFab的亲和能力更强 ;pH洗脱方法的重复性优于咪唑法 ;金属铜离子螯合层析法对rhFab进行一步纯化可得到纯度大于
- 朱迎春王琰刘群英化冰高荣凯
- 关键词：组氨酸金属螯合层析
- 抗乙肝病毒表面抗原单链抗体在大肠杆菌中的高效表达被引量：2
- 1999年
- 目的：在大肠杆菌中高效表达抗乙肝表面抗原的单链抗体。方法：通过ＰＣＲ将单链抗体基因重组到原核细胞表达载体ｐＴ７中，构建单链抗体高效表达载体ｐＴ７ＳＣ。将ｐＴ７ＳＣ质粒转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导进行表达。结果：获得了ＳｃＦｖ的高效表达，表达产物占菌体总蛋白的２８％以上。竞争抑制性ＥＬＩＳＡ检测诱导后的细菌培养上清，证明所表达的ＳｃＦｖ具有抗体活性。进一步将ｃＭｙｃ十肽连接在ＳｃＦｖ的羧基端，使所表达的ＳｃＦｖ易于检测。结论：在大肠杆菌高效表达抗乙肝ＳｃＦｖ。
- 高荣凯王琰刘群英朱迎春化冰陈宇萍
- 关键词：单链抗体HBSAG乙型肝炎大肠杆菌
- 心脏手术病儿血浆铜、锌代谢及在围术期的变化
- 1995年
- 报告18例心脏病儿体外循环心内直视手术期间血浆铜、锌变化的结果。正常对照组的血铜、锌含量分别为16.65±3.59×10^(-3)mmol/L和13.54±4.62×10^(-3)mmol/L。体外循环组的铜、锌含量非常显著低于正常对照组(P<0.01);血浆铜和锌的含量在心肺转流开始后下降,术后缓慢上升,但是,术后锌的含量低于术前水平;Cu/Zn比值术中无明显变化,术后较术前明显增高。文章对上述变化的原因及临床意义进行了简要讨论。
- 解水本姚松朝化冰卢妙茹贾群
- 关键词：体外循环血铜血锌
- 抗HBS-碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用
- 1998年
- 抗ＨＢＳ－碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用①１０００３７北京海军总医院高荣凯王琰刘克金化冰朱迎春刘群英陈宇萍关键词肝炎表面抗原，乙型；碱性磷酸酶；双功能抗体中国图书资料分类号Ｒ４４６．６１酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）在对微量抗原或抗体的检测中具有重...
- 高荣凯王琰刘克金化冰朱迎春刘群英陈宇萍
- 关键词：乙型肝炎表面抗原碱性磷酸酶双功能抗体
- 用噬菌体蛋白Ⅸ展示抗HBsAg分子Fab段被引量：7
- 2004年
- 目的 用丝状噬菌体外壳蛋白Ⅸ (pⅨ )展示抗体Fab段 ,并与外壳蛋白Ⅲ (pⅢ )展示效果进行比较。方法 采用PCR方法钓取噬菌体蛋白Ⅸ基因 ,构建pⅨ展示抗乙肝表面抗原Fab的表达载体 ,制备噬菌体抗体 ,鉴定其抗原结合活性和Fab呈现水平 ,观察了噬菌体洗脱回收效率 ,并与pⅢ展示进行比较。结果 噬菌体pⅨ可以展示有功能活性的抗体Fab段 ,但对Fab的展示率低于pⅢ ,展示率的高低可能与pⅨ展示的外源蛋白分子量大小有关。“结合 洗脱 回收”实验显示 ,酸洗脱法回收的Fab pⅢ噬菌体的感染活性大为下降 ,而对Fab pⅨ噬菌体无影响。结论 pⅨ成功展示Fab段 。
- 张达矜王琰化冰刘晓琳
- 关键词：基因表达载体噬菌体抗体噬菌体抗体库技术
- 从半合成抗体库克隆抗TNF-α人单链抗体被引量：14
- 1999年
- 通过噬菌体抗体库技术，不经免疫克隆抗ＴＮＦ－α人单链抗体，用固相化的人重组ＴＮＦ－α抗原对半合成噬菌体抗体库进行了４轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，可见到明显富集，从第３轮和第４轮洗脱下来的克隆中获得两株可特异结合ＴＮＦ－α的克隆，其可变区分别属于ＶＨ１、ＶＨ３和Ｖλ１亚群。
- 王琰刘群英化冰陈宇萍朱迎春陈晓穗
- 关键词：噬菌体抗体库TNFΑ
- 抗胃癌单抗3H11可变区氨基端序列对抗体活性的影响被引量：5
- 1999年
- 采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 方法， 利用第一骨架区通用引物扩增重链 Ｆｄ 段和κ链的基因， 克隆到 Ｆａｂ 表达载体中， 在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性． 根据已克隆的３ Ｈ１１ Ｖ Ｌ、 Ｖ Ｈ 的真实序列， 重新设计κ链及 Ｆｄ 段５′端引物， 分别将骨架区引物在κ链及 Ｆｄ 段５′端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列， 构建分别含有矫正后κ链或矫正后 Ｆｄ 以及二个链均得到矫正的 Ｆａｂ 表达载体， 这些载体在大肠杆菌中均获得类似水平的表达， 对任何一个链的矫正均可部分恢复 Ｆａｂ 段胃癌细胞的结合活性． 结果说明在构建小分子抗体时， Ｐ Ｃ Ｒ 引物引入的轻。
- 李竞王琰王卓智刘群英化冰陈宇萍朱迎春董志伟
- 关键词：免疫球蛋白可变区基因单克隆抗体
- 金属螯合亲和层析法对抗HBsAg Fab段的纯化被引量：1
- 1996年
- 为了对大肠杆菌表达的Fab段进行简便有效的纯化,我们在Fab段表达载体上插入了一段编码六个组氨酸的DNA片段,使所表达的Fab段在Fd段的羧基端带有六个连续的组氨酸,通过金属螯合亲和层析法对大肠杆菌表达的Fab段进行纯化,利用不同pH梯度缓冲液洗脱,一步即可达到95%以上纯度的纯化.
- 王琰刘群英化冰朱迎春王雅明徐建军
- 从人源性噬菌体抗体库分离出1株含有异常序列的抗HBsAg Fab克隆被引量：11
- 1998年
- 曾从人源性噬菌体抗体库中筛选出１株抗人乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的Ｆａｂ克隆，为了筛选出新的抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段，采用抗原屏蔽法，用已得到的Ｆａｂ段封闭相应的抗原决定基，对该抗体库进行了再次筛选，得到了１株新的人抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段克隆，经序列分析发现其轻链可变区基因来源于Ｖκ１亚群和Ｊκ４基因，重链可变区基因来源于ＶＨ１亚群和ＪＨ４基因，但在ＶＨ第７７位和第７８位氨基酸残基之间出现了７个多余的氨基酸残基，经对基因数据库检索未能查到该序列的来源，但显然这段序列未影响抗体的抗原结合活性。
- 王琰刘群英化冰高荣凯陈宇萍朱迎春
- 关键词：噬菌体抗体库克隆
- 肺癌及慢性阻塞性肺疾病患者的血管紧张素转换酶基因多态性
- 2000年
- 目的 :观察肺癌、慢性阻塞性肺疾病、慢性肺心病及正常人血管紧张素转换酶基因多态性 (ACEGP)的变化及其与血清血管紧张素转换酶 (sACE)水平的关系。方法 :ACEGP测定采用PCR ,sACE采用紫外分光光度法测定。结果 :正常人和肺心病组Ⅰ型基因占优势 (分别为 5 7.9%和 6 0 .7% ) ,而肺癌组和慢喘支组D型占优势 (分别为 6 1.8%和 5 9.5 % )。肺癌组I/D和I等位基因频率均明显低于正常组 (P <0 .0 1) ,而D/D和D等位基因频率却明显高于正常组。慢喘支组I等位基因频率 (4 0 .5 % )明显低于正常组 (5 7.9% ) ,但其所有指标均与肺癌组无明显差异。肺心病组I等位基因频率 (6 0 .7% )显著高于肺癌组 (38.2 % )。各组疾病sACE变化与基因型变化不尽相同。肺心病组各基因频率虽与正常组无明显差异 ,但各型中sACE值却明显低于正常组。肺癌组、慢喘支组与正常组三组间基因型虽有所不同 ,但sACE值却无明显差异。正常组与三组疾病均以D/D型sACE值最高 ,I/I型最低 ,尤以正常组和肺心病组差异最显著。结论 :肺癌、慢喘支发病与ACEGP的D/D型明显有关 ,而正常人和肺心病以I型基因占优势。ACEGP与sACE值有关 ,D/D型 >I/I型 ,但sACE值还受其他因素的影响。
- 王洪武聂舟山段蕴铀刘东东韩志海张新红化冰
- 关键词：基因多态性慢性阻塞性肺疾病肺癌
