刘波
- 作品数：70 被引量：85H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 一种具有甘露糖化修饰的溶菌酶及其应用
- 本发明涉及一种具有甘露糖化修饰溶菌酶及其应用，所述溶菌酶经过N-糖基化修饰，具体这种糖化为甘露糖化修饰，修饰位点为N-X-S/T，其中X为除脯氨酸外的氨基酸。本发明还提供了所述甘露糖化修饰溶菌酶的制备方法，其是通过人工添...
- 吴军刘波巩新唱韶红左小虎马清钧
- 文献传递
- 一种在酵母中高效表达sTNFR/Fc融合蛋白的方法及其应用
- 本发明公开了一种在酵母中高效表达sTNFR/Fc融合蛋白的方法及其应用，属于医药领域。一种用酵母制备肿瘤坏死因子可溶型受体和抗体IgG Fc片段融合蛋白的方法：(1)培养含编码该融合蛋白的基因的酵母，(2)从培养物中纯化...
- 巩新唱韶红刘波吴军
- 文献传递
- 一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用
- 本发明公开了一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用。该方法包括如下步骤：灭活甲型副伤寒沙门氏菌的O抗原链长控制酶基因cld，得到O‑抗原链长控制酶基因cld缺陷的甲型副伤寒沙门氏菌；使鼠伤寒沙门氏菌O抗原链长控制...
- 吴军孙鹏刘波唱韶红巩新王恒樑朱力潘超冯尔玲
- 文献传递
- Man_5GlcNAc_2哺乳动物甘露糖型糖蛋白的毕赤酵母表达系统构建被引量：8
- 2011年
- 蛋白的糖基化对蛋白的活性、高级结构及功能都有重要的影响。酵母表达的糖蛋白不同于哺乳动物表达的杂合型或复杂型糖蛋白,而是高甘露糖型或过度甘露糖化糖蛋白。在前期成功敲除毕赤酵母α-1,6-甘露糖转移酶(Och1p)基因、阻断毕赤酵母过度糖基化,获得毕赤酵母过度糖基化缺陷菌株GJK01(ura3、och1)的基础上,通过表达不同物种来源的α-1,2-甘露糖苷酶I(MDSI)的活性区与酵母自身定位信号的融合蛋白,并通过DSA-FACE(基于DNA测序仪的荧光辅助糖电泳)分析筛选报告蛋白HSA/GM-CSF(人血清白蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白)的糖基结构,发现当编码酿酒酵母α-1,2-甘露糖苷酶(MnsI)基因的内质网定位信号与带有完整C-端催化区的拟南芥MDSI基因融合表达时,毕赤酵母工程菌株能够合成Man5GlcNAc2哺乳动物甘露糖型糖蛋白。这为在酵母体内合成类似于哺乳动物杂合型或复杂型糖基化修饰的糖蛋白奠定了基础。
- 杨晓鹏刘波宋淼巩新唱韶红薛奎晶吴军
- 关键词：糖基化毕赤酵母
- 抗HER2人源化单克隆抗体在乳酸克鲁维酵母中的高效表达及其产物分析被引量：3
- 2009年
- 目的:在乳酸克鲁维酵母中实现抗HER2人源化单克隆抗体的表达。方法:应用PCR扩增抗HER2人源化单克隆抗体的轻、重链基因,将扩增产物分别克隆入酵母表达载体pYES2/ochI和pPICZαA/ura3,经限制性内切酶以及DNA序列测定分析插入片段正确后,将重组质粒转化乳酸克鲁维酵母(Δura3)。转化子用半乳糖诱导,经间接ELISA和Western blot鉴定所表达产物的产量以及和抗原结合的活性。结果:构建了抗HER2人源化单克隆抗体轻、重链表达载体pYES2/ochI+αL和pPICZαA/ura3+αH,摇瓶培养表达产量可达(120±20)mg/L;经还原和非还原SDS-PAGE分析,抗体的轻、重链能够通过分子间二硫键正确装配;所表达抗体可与HER2胞外域特异性结合。结论:实现抗HER2人源化单克隆抗体在乳酸克鲁维酵母中的表达,具有与其抗原特异性结合的能力。
- 汪丽娜刘波巩新唱韶红王凌雪宋淼徐威吴军
- 关键词：乳酸克鲁维酵母高效分泌表达
- 乳酸克鲁维酵母糖基工程研究
- 包括基因工程抗体在内的糖蛋白药物,是今后基因工程药物发展的主体,但与其快速增长的需要相比,糖蛋白的生产能力却明显不足。至今,哺乳动物细胞还是唯一能完成类似于人的复杂型糖基修饰的糖蛋白药物表达系统,但该表达系统存在的高成本...
- 刘波
- 关键词：乳酸克鲁维酵母糖蛋白
- 文献传递
- 一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用
- 本发明公开了一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用。本发明公开一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法，是将重组融合蛋白和脑膜炎奈瑟球菌O‑寡糖转移酶PglL在O‑抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表达，脑膜炎奈瑟球...
- 吴军潘超孙鹏王恒樑刘波彭哲慧朱力唱韶红巩新冯尔玲王斌曾明
- 文献传递
- 一种重组克鲁维酵母菌及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种重组克鲁维酵母菌及其构建方法和应用。本发明是将乳酸克鲁维酵母菌中的α-1，6-甘露糖转移酶基因和/或α-1，3-甘露糖转移酶基因灭活得到乳酸克鲁维酵母菌株。本发明首先构建重组载体，然后将重组载体导入克鲁维...
- 刘波吴军马清钧巩新唱韶红
- 文献传递
- 毕赤酵母表达重组人凝血酶原2及活性分析
- 2016年
- 目的通过毕赤酵母(Pichia pastoris)表达制备重组人凝血酶原2(prothrombin-2),并利用锯鳞蝰(Echis carinatus)凝血酶原激活剂ecarin将其活化为凝血酶,分析凝血酶的活性。方法根据Gen Bank公布的人凝血酶原2和ecarin的cDNA序列,设计并优化合成凝血酶原2和ecarin基因。将凝血酶原2基因构建至表达载体p PICZαA中,转化并筛选重组凝血酶原2的糖基工程酵母菌,诱导工程酵母分泌表达凝血酶原2,培养上清中的目的蛋白经两步阳离子层析纯化制备,并利用酶切N-糖链和肽指纹图谱分析鉴定目的蛋白。将ecarin基因构建到表达载体pcDNA3.1(+),瞬转HEK 293T细胞,收集培养上清。将HEK 293T工程细胞培养上清与纯化的凝血酶原2反应,利用凝血酶发色底物S-2238,测反应产物的酶促活性;利用血浆纤维蛋白原测反应产物的血凝时间、分析血凝活性。结果酵母表达凝血酶原2的培养上清经纯化获得37×103的目的蛋白,去除N-糖链的蛋白相对分子质量降为35×103,与凝血酶原2理论分子量一致。经肽指纹图谱鉴定,纯化得到的蛋白为凝血酶原2。制备的凝血酶原2经HEK 293T细胞表达ecarin的培养上清处理后,可催化S-2238解离产生黄色的对硝基苯胺(pNA),且pNA产生的光密度值随着处理的凝血酶原2的增加而升高;经ecarin处理的凝血酶原2能促进血浆凝结,与凝血酶试剂的血凝时间接近,且血凝时间随着处理的凝血酶原2的量减少而延长。结论利用毕赤酵母制备了重组人凝血酶原2,被ecarin活化为具有活性的凝血酶,有望替代从血浆中提取的凝血酶原,用于战伤救治和临床研究。
- 樊宇唱韶红巩新刘波吴军
- 关键词：毕赤酵母
- 糖基工程酵母表达RSV疫苗研究
- 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是造成婴幼儿、老年人、免疫抑制者等免疫功能低下的人群呼吸道感染的最常见原因之一,目前,全球范围内无相应疫苗上市。作为侯选苗的减毒活疫苗已发展...
- 张乐王甜甜刘波吴军
