刘晓冬
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 供职机构：卫生部更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 人肝再生增强因子融合蛋白表达载体的构建被引量：3
- 2002年
- 目的 :克隆人肝再生增强因子的cDNA并构建谷胱甘肽巯基转移酶 -人肝再生增强因子 (GST -hALR)融合蛋白表达载体。方法 :根据人肝再生增强因子核苷酸序列 ,从人胎肝cDNA文库中扩增到hALRcDNA ,亚克隆于pUC18载体 ,核苷酸序列测定证实为hALR ;将hALRcDNA亚克隆于 pGEX - 4T质粒 ,转化大肠杆菌JM10 9,筛选阳性克隆酶切鉴定。结果 :重组阳性克隆经酶切鉴定证实重组片段已正确插入相应酶切位点 ,片段与PCR扩增片段大小相同 ,碱基序列正确。结论 :GST -hALR融合蛋白表达载体的成功构建 。
- 杨林张阳德刘晓冬黄秋林贾晓巍刘勤
- 关键词：肝再生人肝再生增强因子肝功能衰竭
- 微囊化和基因修饰的肝细胞移植——人肝再生增强因子(hALR)的原核表达、纯化及生物活性研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建人肝再生增强因子原核融合表达载体 ,并对表达产物进行生物活性研究 ,从而为hALR基因修饰的肝细胞移植的细胞来源研究提供实验依据 ,并为人肝再生增强因子的临床应用奠定基础。方法 :以pGEM -T -hALR为模板 ,应用PCR技术扩增出hALRcDNA ,克隆入原核融合表达载体pGEX - 4T - 2 ,限制性内切酶酶切及测序证实序列正确 ;转化大肠杆菌JM10 9:挑取阳性克隆以IPTG诱导表达融合蛋白GST -hALR ,融合蛋白通过谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化后进行凝血酶酶切获得hALR单体 ;采用3 H -thymidine渗入法检测hALR单体的生物学活性。结果 :以 pGEM -T -hALR为模板 ,行PCR扩增后 ,产物于1.5 %琼脂糖凝胶电泳分析 ,可见 380bp特异性条带 ,符合hALRcDNA阅读框架的大小。构建融合蛋白GST-hALR的重组表达质粒pGEX - 4T - 2 -hALR ,经限制性内切酶酶切分析 ,与理论值相符 ,测序证明序列正确 ,片段为正向插入。重组表达质粒转化人肠杆菌JM 10 9。SDS -PAGE电泳分析显示重组菌在约 4 1KD处出现一蛋白条带。纯化、酶切后融合蛋白前体谷胱甘肽S -转移酶约 2 6KD ,hALR约 15KD。薄层扫描蛋白电泳结果表明 ,表达的融合蛋白占细菌可溶性蛋白总量的 31%。纯化hALR加入原代鼠肝细胞、HepG2 细胞培基 。
- 张阳德赵劲风杨林刘晓冬陈伟
- 关键词：人肝再生增强因子基因重组纯化
- 生物医学工程与医学结合的途径与突破口被引量：4
- 2001年
- 刘晓冬任力锋贺达仁张阳德
- 关键词：生物医学工程
- 生物传感器研究孕育着革命被引量：2
- 2002年
- 任力锋贺达仁李螺丝刘晓冬
- 关键词：生物传感器传感器技术生物芯片
- 人肝细胞再生增强因子克隆及序列分析
- 2002年
- 申海菊张阳德刘晓冬杨林黄秋林贾晓魏
- 关键词：真核表达克隆
