何丽鸿
- 作品数：5 被引量：33H指数：4
- 供职机构：南京农业大学生命科学学院微生物学系更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 采用ARDRA研究双孢蘑菇培养料后发酵过程中的细菌群落结构(Ⅰ)——细菌16S rDNA全长文库的建立被引量：5
- 2008年
- 采用化学裂解和酶解相结合的方法,以加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解反应体系,用PEG- 8000进行DNA沉淀.从双孢蘑菇堆肥后发酵的4个代表时期培养料样品中提取微生物总DNA,再以总DNA为模板,以专用引物F27和R1498进行PCR扩增,获得16S rDNA片段,经纯化后构建4个时期样品的细菌16S rDNA文库。试验结果表明,本试验获得的总DNA质量较好。采用PCR扩增可获得多个细菌、放线菌和真菌特异片段;细菌16S rDNA文库的目的片段插入效率在90%以上。
- 何丽鸿于荣利陈明杰潘迎捷
- 关键词：双孢蘑菇
- 采用扩增核糖体DNA限制性分析(ARDRA)研究双孢蘑菇培养料后发酵过程中的细菌群落结构(Ⅱ)-细菌群落结构ARDRA分析被引量：2
- 2009年
- 采用ARDRA对双孢蘑菇[Agaricus bisporus(Large)Sing.]培养料后发酵过程中的细菌群落结构进行研究。细菌16S rDNA文库ARDRA分析结果表明,细菌群落在后发酵过程中发生了明显变化,4个时期文库的16S rDNA组成分别以各自独有酶切类型为主。ARDRA文库优势类群的序列分析结果显示,培养料中的细菌组成远多于传统分离方法所获得的类群:在"空气调节"时期培养料(C6)中发现了一些未曾报道的Bacilli门成员,如Trichococcus属、Planococcus属和Caryophanon属,以及γ-Proteobacteria亚纲;而在"后发酵"开始和结束的培养料(C1和C7)中分别检测到了Ther mus ther mophilus和α-Proteobacteria亚纲的细菌,这些是近年来利用分子生物学方法在高温堆肥中发现的新类群;同时,在整个"后发酵"过程中还发现了大量目前尚未获得培养的细菌类群。
- 何丽鸿于荣利陈明杰潘迎捷
- 关键词：双孢蘑菇RDNA细菌群落结构ARDRA
- 双孢蘑菇培养料二次发酵过程中的细菌群落结构研究
- “后发酵”是双孢蘑菇(Agaricusbisporus)培养料制备工艺中的关键技术，通过室内控温的堆肥过程，可以进一步促进培养料成为有利于蘑菇菌丝吸收、利用的“选择性”栽培基质。在这一过程中，各种嗜热微生物的生理代谢和群...
- 何丽鸿
- 关键词：双孢蘑菇培养料二次发酵细菌群落结构
- 文献传递
- 采用变性梯度凝胶电泳研究双孢蘑菇培养料后发酵过程中的细菌群落结构被引量：14
- 2009年
- 【目的】对双孢蘑菇培养料"后发酵"期间内的细菌群落结构进行了初步的研究,希望利用现代分子生态学的方法能快速、准确地对培养料发酵过程中的微生物群落结构进行动态的检测。【方法】采用变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE),对取自双孢蘑菇培养料"后发酵"不同时期的七份样品的特异性扩增细菌16S rDNA的V3可变区进行分析。【结果】双孢蘑菇培养料中的细菌组成要远远丰富于人们用传统的分离方法所获得的类群,"空气调节"时期的培养料中不仅检测到了前人用经典培养方法获得的Bacillus属嗜热细菌,还发现了一些未曾报道的Bacilli门的成员,如Trichococcus属、Planococcus属和Caryophanon属,以及γ-Proteobacteria亚纲。而在"后发酵"刚开始和即将结束的培养料中分别检测到了Thermus thermophilus和α-Proteobacteria亚纲的细菌,这些是近年来利用分子生物学方法在各类高温堆肥中发现的新类群;【结论】发现双孢蘑菇培养料"后发酵"过程中细菌的群落结构发生了明显的变化,在双孢蘑菇培养料"后发酵"过程中还发现了大量目前尚未获得培养的细菌类群。
- 何丽鸿陈明杰潘迎捷
- 关键词：细菌群落结构PCR-DGGE
- 堆肥中微生物总DNA的高效提取被引量：10
- 2006年
- 采用化学裂解和酶解相结合的方法,选择加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解的反应体系,并以PEG-8000进行DNA沉淀,从高有机含量的堆肥样品中进行微生物总DNA的提取。结果表明,从4种性质不同的堆肥中均获得了高质量的微生物总DNA,所得的DNA分子片段在23kb左右;每克干重堆肥的总DNA提取量为63.54±12.08μg^106.50±28.36μg,A260/A280大于1.6,A260/A230大于1.8,不用经过纯化可以直接进行PCR扩增和限制性酶切;以该DNA为模板进行微生物区系的DGGE分析,显示了丰富的微生物多样性。该方法减少了通常环境样品DNA提取过程中的纯化步骤,减少了DNA的损失,为从事微生物分子生态学,尤其是那些针对高有机含量以及获取极为不易的环境样品的研究而言是十分有益的。
- 何丽鸿赵勇陈明杰潘迎捷
- 关键词：堆肥DGGE
