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抗肿瘤免疫毒素的研究: 该研究主要运用基因工程的方法,以抗肿瘤基因工程单链抗体与不同形式的假单胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin,PE)分子为基础,通过基因融合的方式构建了一系列抗肿瘤重组免疫毒素.这些免疫毒素对肿瘤细胞表现出...; 何丹; 关键词：免疫毒素单链抗体噬菌体展示蜂毒肽细胞毒作用

抗肿瘤免疫毒素稳定性的研究进展被引量：3: 2002年; 免疫毒素 (immunotoxins)是由某些细菌和植物产生的毒素蛋白与抗体或生长因子等靶向分子连接而成 ,用于杀伤表面带有特定抗原或受体的细胞。在试验中 ,免疫毒素在肿瘤周围环境中的稳定性是影响其抗肿瘤效果的主要因素之一。本文主要对几种由不同形式的抗体Fv段构建的免疫毒素的稳定性进行了比较。; 何丹任永明张明生黄华樑; 关键词：免疫毒素抗肿瘤稳定性抗体

相容性溶质支持下重组免疫毒素的周质腔可溶表达及葡萄糖对其表达的影响被引量：5: 2003年; 在基因工程的实践中,包含体的形成是人们利用大肠杆菌表达外源蛋白的一大难题。本文报道了利用山梨醇、甜菜碱等相容性溶质,在高盐胁迫下,实现了重组免疫毒素在大肠杆菌周质腔中的可溶性表达。同时发现葡萄糖的加入时机对重组免疫毒素的表达量有重要的影响。; 任永明张明生何丹晁开罗耀武黄华樑; 关键词：相容性溶质重组免疫毒素可溶表达葡萄糖

抗癌胚抗原免疫毒素生物学功能的研究: 2004年; 为了研究免疫毒素发挥生物学作用的全过程 ,构建了两种不同形式的基于假单胞菌外毒素 (PseudomonasexotoxinA ,PE)的抗癌胚抗原 (carcinoembryonicantigen ,CEA)免疫毒素CEA (Fv) /PE38/KDEL和PE35 /CEA(Fv) /KDEL .用流式细胞术经间接免疫荧光法测定免疫毒素的抗原结合活性 .免疫毒素的内化 (internalization)通过间接免疫荧光标记的方法在激光共聚焦显微镜下进行检测 ,采用流式细胞术进行免疫毒素内化的定量分析 .细胞凋亡采用FITC annexinV/PI双荧光染色方法进行分析 .用噻唑蓝 (MTT)法测定免疫毒素的靶细胞杀伤功能 .对两种形式的免疫毒素在各个功能阶段的性质进行研究和比较 ,全面展现了免疫毒素发挥生物学功能的过程及各个生物作用过程之间的相互影响 ,为详尽的机制研究和免疫毒素的进一步优化改造提供了重要的依据 .; 何丹杨慧晁开林晴黄华樑; 关键词：癌胚抗原 CEA 免疫毒素内吞作用

抗CEA免疫毒素的表达、纯化、复性与生物学活性的研究被引量：2: 2004年; 以抗癌胚抗原 (Carcinoembryonicantigen ,CEA)单链抗体与假单胞菌外毒素 (PseudomonasexotoxinA ,PEA)的截短和修饰形式PE38 KDEL构建重组免疫毒素CEA PE38 KDEL ,并在大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)_star中表达。采用镍离子螯合层析法纯化变性的包涵体样品 ,并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体进行复性。采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性 ,结果表明免疫毒素CEA PE38 KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性。以MTT法检测免疫毒素对肿瘤细胞的体外杀伤活性 ,结果表明该免疫毒素对SW1116和CNE_2细胞具有特异性杀伤活性。证明了经包涵体复性的抗CEA免疫毒素CEA PE38 KDEL对表达CEA抗原的肿瘤细胞具有良好的结合和杀伤活性。; 杨慧何丹晁开林晴游松黄华樑; 关键词：重组免疫毒素蛋白复性体外杀伤活性

抗癌胚抗原免疫毒素的生物学活性研究: 目的:研究抗肿瘤免疫毒素对肿瘤细胞的结合、内化、促肿瘤细胞凋亡和杀伤肿瘤细胞的活性。方法:基于假单胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin A,PE)和抗癌胚抗原(Carcinoembryonic antig...; 何丹杨慧晁开林晴黄华樑; 文献传递

从噬菌体抗体库中筛选出抗原结合活性相近、表达水平不同的单链抗体被引量：1: 2003年; 从抗人膀胱癌改形噬菌体抗体库中筛选出一组相对亲和力常数和细胞结合活性相近的单链抗体 ,而它们的结合活性均明显高于起始的鼠源单链抗体。在亲和力淘选的过程中 ,这一组抗体的表达量存在显著差异 ,这在一定程度上影响到筛选过程中ELISA鉴定的结果 ,使整个筛选过程并不仅仅是对高亲和力抗体的筛选 ,也同时得到了高表达量的抗体。; 何丹晁开杨慧林晴黄华; 关键词：噬菌体抗体库单链抗体肿瘤治疗结合活性

应用全合成噬菌体抗体展示库技术实现抗膀胱癌单链抗体的定向进化被引量：1: 2002年; 单链抗体在肿瘤治疗的临床应用中常会遇到两方面的问题 ,即低亲和力和鼠源性导致的免疫原性。为此 ,我们对鼠源抗膀胱癌单链抗体进行人源化改造 ,并从噬菌体抗体库中筛选具有高亲和力的人源化的单链抗体分子。运用噬菌体展示技术 ,成功构建了库容为 10 6人源化的噬菌体抗体库 ,用膀胱癌细胞系膜抗原进行三轮筛选 ,得到了; 张明生何丹任永明刘晶林晴晁开黄华樑; 关键词：抗体库单链抗体定向进化人源化

抗膀胱癌重组免疫毒素的可溶性表达及其抗肿瘤活性被引量：5: 2004年; 目的 :构建抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的可溶性表达载体 ,并表达、纯化具有抗肿瘤活性的可溶性蛋白。方法 :将抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的基因片段 ,插入含有大肠杆菌脯氨酰顺反异构酶FkpA基因的共表达载体pTMFK中 ,构建重组共表达载体pTMFK IT。以重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3) Star,共表达目的蛋白与FkpA。表达产物以镍离子金属螯合层析柱及抗PE抗体亲和柱层析进行纯化。用ELISA检测免疫毒素的抗原结合活性 ,用噻唑蓝(MTT)法进行体外细胞杀伤实验。结果 :成功地构建了抗膀胱癌免疫毒素基因与FkpA基因的共表达载体 ,并获得纯度较高的目的表达产物。纯化后的表达产物与BIU 87膀胱癌细胞膜抗原具有良好的特异性结合活性 ,对BIU 87膀胱癌细胞有明显的体外特异性杀伤作用。结论 :获得了对膀胱癌细胞具有显著特异性杀伤活性的免疫毒素。; 晁开何丹杨慧张众林晴郭蔼光黄华樑; 关键词：免疫毒素膀胱癌可溶性表达细胞毒性

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何丹