丁皓 作品数:17 被引量:18 H指数:2 供职机构: 上海医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定 被引量:1 1994年 以人IgG为抗原,采用杂交瘤技术获得6株不同性质的抗人IgG单克隆抗体(McAb)(AI2、AI3、AI4、AI5、AI6、和AI)。AI2McAb具有抗IgG1亚类的特异性,可识别IgGγ链和F(ab')2片段,作用位点可能在人IgG1铰链区。AI3AI、McAb分别为IgG3、IgG4亚类限制性McAb,可能作用于IgGCH1区。AI4McAb可识别χ和λ型IgG四个亚类以及F(ab')2片段,不识别游离χ、λ链。AI5McAb特异地抗IgG1结合型χ,作用于IgG独特型位点。AI6McAb只抗λ型IgG,可能作用于IgGCL区。6种抗人IgGMcAb除了AI5外,均能用于人血清中IgG的检测。 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:单克隆抗体 免疫球蛋白G 测定尿激酶含量夹心法 ELISA 的建立 被引量:1 1992年 采用两种识别不同抗原决定簇的抗尿激酶(UK)单克隆抗体建立了测定人 UK 含量的夹心法ELISA.本法灵敏度为0.15ng/ml,批内 CV4.3%,批间 CV8.7%,平均回收率98%.应用本法测定了部分正常细胞和肿瘤细胞株培养上清中的 UK 含量,肿瘤细胞培养上清 UK 量明显高于正常细胞.测定82名正常人血浆中 UK 含量,其结果为1.31±0.6ng/ml. 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:尿激酶 夹心法 ELISA 单克隆抗体 杂交瘤技术的进展(文献综述) 1991年 自从1975年Kohler和Milstein建立杂交瘤技术以来,单克隆抗体(McAb)的研制及应用迅猛发展。McAb的应用主要集中在体内诊断、理论性研究以及纯化和鉴定抗原等方面,临床应用尚有一定困难。近年来杂交瘤技术又有进展。 丁皓 宋后燕关键词:杂交瘤技术 免疫方法 培养基 抗纤维蛋白和t-PA/UK双特异性单克隆抗体的制备和应用 被引量:1 1992年 目前常用于溶解血栓的药物有组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogenactivator,t-PA)、尿激酶(urokinase,UK,u-PA)、单链型尿激酶(single-chainu-PA,Scu-PA)以及甲氧苯甲酰纤溶酶原—链激酶复合物(APSAC)等。t-PA因能与纤维蛋白结合而激活。 丁皓 宋后燕关键词:抗纤维蛋白 单克隆抗体 亲和层析纯化HepG_2细胞分泌的PAI-1 被引量:2 1994年 本文报道用抗PAI-1单克隆抗体(McAb)亲和层析建立了纯化PAI-1的简便方法。经免疫亲和层析,SephacrylS200凝胶过滤,从HepG2细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的PAI-1,回收率为84%,PAI-1比活性6.1×104IU/mg。糖基化PAI-1分子量为50kD,比活性5.8×104IU/mg。非糖基化PAI-1分子量43kD,占总PAI-130%,仍具有PAI-1活性。用ConA-Sepharose亲和层析进一步纯化得到SDS-PAGE纯的糖基化PAI-1。 丁皓 吴晓俐 孙幼华 周兴华 朱运松 宋后燕关键词:PAI-1 纤溶酶原 抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定 被引量:3 1992年 用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M^(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1~135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M^(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:尿激酶 单克隆抗体 抗人PAI-1单克隆抗体制备、鉴定和应用 1994年 以重组PAI-(rPAI-1)为抗原,通过杂交瘤技术获得6株阳性杂交瘤细胞(AP1、AP2、AP3、AP4、AP5和AP6),并用SPA亲和层析纯化了抗PAI-1单克隆抗体(McAb)。所有McAb均能识别rPAI和天然PAI-1,腹水滴度均为106 以上。6种McAb对PAI-1亲和常数在3.45×107 —1.05×109 mol/L之间。AP2、AP3 McAb能完全抑制PAI-1活性,AP4、AP和AP6只能部分抑制PAI-1活性,AP1则不抑制PAI-1活性。6种McAb中只有AP1、AP4和AP5能识别PAI-1/t-PA复合物。利用AP1、AP3、和AP4 McAb制备免疫亲和柱一步纯化HepG2 细胞分泌的PAI-1,纯度大于98%,回收率92%,纯化倍数51倍。利用抗PAI-1 McAb建立了夹心法ELISA,测定了人血浆PAI-1水平,正常人血浆PAI-1平均含量(±D)为24.7±7.75ng/ml。 丁皓 吴晓俐 周兴华 朱运松 宋后燕关键词:纤溶酶原 单克隆抗体 抗组织型纤溶酶原激活剂(tPA)单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:2 1990年 用从人黑色素瘤细胞培液中提纯的tPA为抗原,通过杂交瘤技术获得TA_1、TA_2、TA_3和TA_4 4株阳性杂交瘤细胞。经葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析纯化抗tPA单克隆抗体(tPA McAb)。固相酶联免疫吸附测定(ELISA)诱生含McAb的小鼠腹水,其效价达1:10~5。这些tPA McAb均属IgG_1亚型,特异地作用于tPA(包括基因工程生产的rtPA),与尿激酶(UK)无反应。用底物显色法测定表明所有tPA McAb均可抑制tPA的活性。 丁皓 王结义 宋后燕关键词:TPA Smads与肿瘤的关系 被引量:1 2000年 SMADs是细胞内信号传递通路中的胞浆递质 ,调节细胞生长、分化。SMADs在癌细胞中常发生突变 ,可能与癌发生发展有关 ,尤其是SMAD4在胰腺癌、直肠结肠癌中突变率较高 ,可能是有效的肿瘤抑制信号。 周波 洪汝建 胡志英 钱嘉琳 张玉娟 丁皓 路建平关键词:SMADS 肿瘤 信号传递 抗D-双聚体单抗轻链可变区基因的克隆 1996年 以分泌小鼠抗人纤维蛋白降解产物D-双聚体单克隆抗体杂交瘤细胞株的mRNA为模板,用小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因的通用引物,通过RT-PCR扩增基因,与载体重组后,经酶切鉴定和核苷酸序列分析,证明克隆含抗D-双聚体单抗的轻链可变区基因,长度为330bp. 官孝群 张艳玲 李勇 丁皓 朱运松 宋后燕关键词:单克隆抗体 轻链可变区 基因克隆