黄非
- 作品数：14 被引量：37H指数：5
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省杰出青年科技基金四川省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 盐藻PDS基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2015年
- 【目的】八氢番茄红素脱氢酶PDS为真核膜结合蛋白,我们通过更换不同的表达策略,探索在大肠杆菌中表达真核膜结合蛋白的方式。【方法】利用RACE的方法克隆盐藻PDS的全长c DNA序列。利用原核表达载体p ET-28a构建p ET-28a-PDS表达载体;使用PLtac启动子替换T7启动子构建p ET-PLtacPDS表达载体;合成Mistic序列融合入p ET-28 a中构建了p ET-Mistic-PDS融合表达载体。分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。【结果】获得了盐藻PDS基因的全长c DNA序列2237 bp,开放阅读框为1749 bp,共编码582个氨基酸(NCBI登录号为GQ923693.1)。利用p ET-28a-PDS和p ET-PLtacPDS表达的PDS蛋白表达量低,并以包涵体形式存在;利用p ET-Mistic-PDS载体表达的PDS蛋白表达量明显提高,且大部分以可溶蛋白形式存在,具有脱氢酶活性。【结论】实验结果表明Mistic作为促溶标签能促进膜蛋白的正确折叠,提高蛋白的可溶性。蛋白酶活测定结果证明了Mistic的融合可以保持蛋白的天然活性。
- 周峰黄非白林含
- 关键词：同源克隆原核表达
- 一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达（英文）被引量：5
- 2013年
- 【目的】从环境中分离筛选产蛋白酶、降解蛋白质的菌株,寻找使用价值较高的碱性蛋白酶。【方法】通过酪蛋白平板法分离筛选产蛋白酶菌株,经生理生化方法及16S rDNA基因序列鉴定菌株;利用简并引物及基因组步移克隆蛋白酶完整开放阅读框;蛋白酶前体蛋白及成熟肽序列在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行重组表达;纯化活性蛋白酶后,利用化学合成多肽底物(succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide)检测酶活性质及其催化活力。【结果】分离到的菌株L010被鉴定命名为芽胞杆菌(Bacillus sp.)L010;蛋白酶开放阅读框包含了1149个碱基,编码382个氨基酸,氨基酸序列按其功能分为N端的30个氨基酸残基组成的信号肽,77个氨基酸残基构成的前导肽,C端275个氨基酸残基组成的成熟肽;此蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中枯草杆菌蛋白酶类(Subtilisins)成员,并命名为SprD;SprD的前体蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中重组表达时,在前导肽辅助下自加工为活性蛋白酶;SprD呈现出较高的催化活力,其反应最适条件为温度70℃,pH 9-10。【结论】SprD在碱性(pH 7.0-10.0)、中高温(25℃-60℃)条件下的稳定性及较高的催化能力使其具有一定的研究和潜在利用价值。
- 李丹黄非夏梦芸蒋彦杨毅
- 产绿原酸内生菌细胞色素P450基因的克隆和功能研究被引量：1
- 2016年
- 以一株产绿原酸的内生枯草芽孢杆菌为基础,对其绿原酸途径的关键酶基因进行克隆和功能研究。克隆该内生菌的细胞色素P450基因并进行原核表达,对重组蛋白进行肉桂酸羟基化酶(C4H)酶活测定。结果显示,从内生菌中克隆了4个细胞色素P450酶系基因并进行了原核表达,其中P-4重组蛋白具有C4H活性,产生的香豆酸与LC-MS检测的结果一致,该酶的最适温度范围较宽,产物香豆酸对该酶有抑制作用。该内生菌可能利用其细胞色素P450酶系作为C4H的同工酶从而将产物导入绿原酸合成途径。
- 王川李丽魏丕伟黄非
- 关键词：绿原酸细胞色素P450活性
- 莱茵衣藻玻璃珠法快速转化检测体系的建立被引量：7
- 2008年
- 为了建立在衣藻中快速简便研究外源基因功能的方法,采用玻璃珠转化法将pBI221质粒(35S,Amp,GUS)高效转化至细胞壁缺陷型衣藻品系CW-15(Arg-),通过对转化条件及GUS表达检测条件摸索,发现35S启动子在CW-15中能有效启动GUS表达,且GUS最佳检测时间约为转化后24h,重组细胞先染色后制片更有利于GUS检测.
- 黄非黄秦黄敏易秀丽郑红波乔代蓉曹毅
- 关键词：莱茵衣藻GUS
- 产绿原酸内生菌的分离及其绿原酸合成途径关键基因的克隆和功能研究被引量：5
- 2015年
- 【目的】分离产绿原酸的内生菌并对其绿原酸合成途径的一种关键酶基因进行克隆和功能研究。【方法】采用表面消毒法从金银花中分离内生菌,以高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)筛选确定产绿原酸的内生菌,克隆、表达该内生菌的组氨酸解氨基酶(HAL)并进行酶活测定。【结果】从金银花根中分离到一株产绿原酸的内生细菌RP1,同时在该内生菌发酵液中检测到了绿原酸代谢的中间物肉桂酸。对RP1的分子鉴定表明该内生菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对RP1的HAL基因进行克隆和原核表达,酶活测定表明该酶具有HAL和PAL(苯丙氨酸解氨基酶)双功能,其PAL活性产生的肉桂酸与LC-MS检测的结果一致。【结论】推测该内生菌可能利用其HAL的苯丙氨酸解氨基活性将苯丙氨酸的催化产物肉桂酸导入苯丙烷途径,从而产生绿原酸。
- 王川李丽魏丕伟黄非
- 关键词：绿原酸内生菌活性
- 一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒及其使用方法
- 本发明提供了一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒，它包含：鸡白痢沙门氏菌特异引物、PCR缓冲液、PCR enhancer、dNTP、DNA聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD；所述鸡白痢沙门氏菌特异引物的序列如SEQ ID NO.1...
- 白林含黄非
- 文献传递
- 改造大肠杆菌卟啉代谢途径对重组过氧化物酶活性的影响被引量：3
- 2018年
- 【目的】原核表达某些需辅因子的外源蛋白时往往酶活偏低,为提高酶活和减少外加辅因子的成本,我们尝试在大肠杆菌中表达外源过氧化氢-过氧化物酶的同时提高大肠杆菌中与该酶辅因子相关的合成代谢。【方法】本研究克隆了中度嗜盐菌Halomonas elongata DSM2581的过氧化氢-过氧化物酶CAT-POD(catalase-peroxidase)编码基因kat G的ORF,构建原核表达载体p ET28a-kat G,实现了CAT-POD在大肠杆菌中的重组表达。由于CAT-POD活性依赖其活性中心血红素,而血卟啉是血红素的骨架,通过构建原核表达载体p UC19-tac-hem A,将编码5-氨基乙酰丙酸合成酶的hem A基因在大肠杆菌中过量表达,提高卟啉的含量,从而提高重组蛋白CAT-POD的酶活。【结果】最终的CAT酶活达到了377 U/m L,为对照组的7.5倍。【结论】本研究为工业生产高活性CAT-POD提供了有效的方案,也为体外重组表达含辅因子的蛋白提供可借鉴的思路。
- 黄莘丁涛黄非白林含
- 关键词：中度嗜盐菌卟啉代谢
- 新霉素酶联免疫检测方法的研究——新霉素抗体的制备被引量：5
- 2007年
- 以碳化二亚胺作为偶联剂,分别将新霉素(Neomycin,NEO)和牛血清白蛋白(Bovine serum albu-min,BSA)、血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)进行偶联,得到偶联产物BSA-NEO和KLH-NEO。对BSA、KLH、NEO及其偶联产物BSA-NEO、KLH-NEO进行红外光谱分析,结果显示偶联产物的红外光谱中同时存在载体蛋白和NEO的特征吸收峰,初步证明偶联成功;将偶联产物BSA-NEO和KLH-NEO作为新霉素免疫抗原,分别免疫新西兰大白兔,成功获取新霉素抗血清,间接ELISA法测得抗血清效价可达1.28×105以上。
- 刘沙洲黄非王丽丽吕雪艳阮琨乔代蓉曹毅白林含
- 关键词：新霉素人工抗原红外光谱多克隆抗体
- 不同胁迫下盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因表达及其与甘油合成的响应被引量：8
- 2007年
- 在已克隆的盐藻(Dunaliella salina)3-磷酸甘油脱氢酶GPD基因的基础上,利用实时荧光定量PCR的方法,研究了经高盐、厌氧、磷酸盐以及氧化等不同外界胁迫条件下该基因的表达情况,并同时监测了盐藻细胞甘油合成的动态变化.对比酿酒酵母的GPD基因,发现D.salina GPD基因受高渗诱导,同时D.salina细胞内可能存在多个形式的GPD基因.
- 孙晓菲黄非梁雪张飞伟杨旺桂白林含乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶荧光定量PCR甘油合成
- MK公司PVC助剂业务营销策划
- 黄非
