马骊
- 作品数：26 被引量：107H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划高等学校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 病毒性疾病的免疫基因治疗研究进展被引量：1
- 1999年
- 病毒性疾病尤其是慢性病毒性感染，严重危害人们的生命和健康，甚至诱发恶性肿瘤。对病毒性疾病，目前尚无特效药物。免疫治疗和基因治疗技术的出现，为ＨＢＶ、ＨＩＶ等难治性病毒感染的治疗提供了新的途径。
- 马骊
- 关键词：病毒性疾病免疫治疗基因治疗
- 红色毛癣菌部分表达序列标签的分析被引量：9
- 2004年
- 红色毛癣菌是最常见和流行范围最广的一种浅部致病真菌.在构建红色毛癣菌cDNA文库的基础上,获得4002条ESTs.与GenBank数据库中的序列同源性比较表明,其中30%(1226条)与其他生物已知功能的基因产物具有不同程度的同源性,24.81%(989条)仅得到简单的功能提示,45.19%(1787条)与目前已知的任何蛋白质都没有显著同源性,为全新的未知功能基因.对一些与红色毛癣菌生长代谢、信号传导、致病和耐药相关的重要功能基因做了初步分析,阐明了红色毛癣菌的部分重要代谢途径,为进一步探索其生理过程、致病和耐药机理,寻找新的药物靶标提供了重要的分子基础和线索.
- 马骊王玲玲冷文川杨剑朱俊萍董杰薛颖万哲李若瑜金奇
- 关键词：红色毛癣菌功能基因组CDNA文库表达序列标签药物靶标致病真菌
- 肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichia pastoris酵母中的表达被引量：17
- 2003年
- 利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大小一致。凝胶薄层扫描分析显示:目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60%以上。ELISA实验表明,重组蛋白VP1具有较好的抗原性。使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物,能够较特异性地与EV71感染者血清中的抗体产生反应,而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应。通过利用表达产物作为抗原,对156份血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的的检测用抗原。
- 杨国威何雅清薛颖周世力马骊金奇
- 关键词：肠道病毒71型逆转录聚合酶链式反应
- VEGF_(165)cDNA在酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究被引量：7
- 2001年
- 目的研究人 ＶＥＧＦ１６５基因在 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母中的表达，获得高效表达、具有生物学活性的重组ｈＶＥＧＦ１６５。方法采用ＰＣＲ扩增ｈＶＥＧＦ１６５基因，经ＤＮＡ序列分析后，插入含ＡＯＸ１启动子和α分泌信号肽序列的Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母表达载体中，构建重组质粒ｐＰＩＣ９Ｋ／ｈＶＥＧＦ１６５。经转化酵母宿主菌ＫＭ７１，筛选多拷贝整合转化子，摇瓶培养，用 １０ ｍＬ／Ｌ甲醇诱导表达。表达产物经Ｈｅｐａｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ６Ｂ亲和层析纯化后，以人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）测定其生物学活性。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示，表达产物以可溶性分子的形式存在于上清中，诱导４ｄ的表达量达上清中总蛋白的６０％以上。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。经Ｈｅｐ－ａｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ６Ｂ亲和层析纯化， ｒｈＶＥＧＦ１６５的纯度可达到９０％以上。生物学活性检测证实，其具有刺激脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）增殖的活性。结论在 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统中，实现了ｈＶＥＧＦ１６５的高效分泌性表达。
- 马骊王小宁张智清陈爱君姚立红姜忠良
- 关键词：血管内皮生长因子
- 基因重组人粒细胞集落刺激因子对实验性动物白细胞减少症的治疗作用被引量：1
- 1997年
- 为了证明我们研究的基因重组人粒细胞集落刺激因子（rhG－CSF）的效力，本实验用自产rhG－CSF和日本生产rhG－CSF产品惠尔血对放疗小鼠、化疗大鼠粒细胞减少症的治疗进行对比观察．结果表明，自产rhG－CSF可加快粒细胞减少症动物外周血粒细胞数量的恢复，且效力与进口产品相当。
- 张亚莉周明乾黄树其方向东马骊王晓光王小宁
- 关键词：白细胞减少症RHG-CSF药物疗法
- 人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区2-3loop在Pichia.pastoris酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究被引量：6
- 2001年
- 目的 :研究人Flt 1胞外区 2 3loopcDNA在Pichia pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组Flt 1(2 3)。方法 :采用PCR扩增Flt 1(2 3)基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母表达载体中 ,构建重组质粒pPIC9K Flt 1(2 3) ,转化酵母宿主菌GS115 ,筛选His+ Muts 表型转化子 ,摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。表达产物经CM SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS 10 0分子筛层析纯化后 ,测定其生物学活性。结果 :SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4d的表达量达上清总蛋白的 6 0 %以上。ELISA及Westernblot实验表明 ,表达产物具有良好的抗原性和特异性。经CM SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS 10 0分子筛层析纯化后 ,Flt 1(2 3)纯度达到 90 %以上。生物学活性检测证实其具有结合hVEGF1 6 5 的能力和抑制hVEGF1 6 5 对HUVEC的促增殖功能。结论 :获得了具有生物学活性的可溶性重组Flt 1受体胞外区 2 3loop小片段 ,为进一步的动物实验和临床应用打下了基础。
- 马骊王小宁张智清周小明曾革非陈爱君
- 关键词：血管内皮生长因子FLT-1
- 人血管内皮生长因子功能域受体的筛选及其生物学活性研究
- 2001年
- 利用ＰＣＲ技术，从人胎盘ｃＤＮＡ文库扩增出４个截短的人血管内皮生长因子受体（Ｆｉｔ－ｌ）ｃＤＮＡ，分别含胞外第２，１－２，２－３，１－３个ｌｏｏｐ，应用酵母双杂交系统对Ｆｌｔ－１的最小配体结合域进行了研究，结果表明，不仅其胞外 １－３ ｌｏｏｐ能与 ｈＶＥＧＦ１６５结合，比其更小的片段 ２－３ ｌｏｏｐ也具有与配体结合的能力．进一步构建了重组表达质粒ｐＰＩＣ９Ｋ／Ｆｌｔ－１（１－３）和 ｐＰＩＣ９Ｋ／Ｆｌｔ－１（２－３），转化 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母菌 ＧＳ１１５，摇瓶培养，经１％甲醇诱导，表达的 Ｆｌｔ－１以可溶性分子形式存在于上清中，诱导４ｄ的表达量占上清总蛋白质的 ６０％以上．表达产物经 ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ阳离子交换层析和 ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析纯化，纯度达９０％以上．体外生物学活性检测表明，表达的可溶性Ｆｌｔ－１（２－３）具有与Ｆｌｔ－１（１３）接近的结合ｈＶＥＧＦ１６５的能力和抑制ｈＶＥＧＦ１６５对ＨＵＶＥＣ的促增殖功能．进一步的动物模型实验证实，可溶性Ｆｌｔ－１（２－３）具有显著的抑制ｈＶＥＧＦ１６５促进新生血管形成的功能．
- 马骊王小宁张智清孙大军周小明陈爱君姚立红
- 关键词：人血管内皮生长因子受体酵母双杂交配体结合域血管形成
- 人血管内皮生长因子受体FLT-1胞外区1-3环cDNA的表达、纯化及鉴定
- 2000年
- 目的 研究人血管内皮生长因子受体FLT 1胞外区 1 3环cDNA在酵母菌中的表达、纯化及生物学活性。方法 将编码 316个氨基酸残基的人FLT 1胞外区 1 3环cDNA插入到含AOX1启动子和d分泌信号肽序列的Pichiapastoris酵母载体中 ,构建了重组表达质粒pPICqk/FLT l(1～ 3) ,转化酵母宿主菌GS115 ,筛选His+ Mut表型转化子 ,经摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。结果 经SDS -PAGE显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4天的表达量达到培养上清总蛋白的 6 0 % ,径Westernblot检测抗原性及特异性良好 ,经CM SepharoseFF阳离子交换层析和Sephacryls 10 0分子筛层析 ,纯度达 90 %以上 ;经生物活性检测具有结合hVEGF16 5的能力和hVEGF16 5促进HUVEC的增殖功能。结论 人血管内皮生长因子受体FLT 1胞外区 1～ 3环cDNA在酵母菌中表达成功。
- 马骊王小宁张智清周小明曾革非陈爱君
- 关键词：血管内皮生长因子受体酵母CDNA
- 人粒细胞集落刺激因子基因重组及在E.coli中的表达和鉴定被引量：6
- 1998年
- 将RT－PCR扩增的人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）结构基因与表达载体pJGW1重组，转化含有pGP1－2质粒的E.coliDH5α，进行温度诱导表达。经SDS－PAGE分析，rhG－CSF表达量占菌体总蛋白量的30％以上。将其复性，经CM－52FF离子交换层析纯化，纯化后的rhG－CSF（纯度＞98％）经SDS－PAGE测定分子量约为19kD；经胰酶裂解、反相HPLC分析肽谱具有8条特异肽段；等电聚焦测定PI值约为5．8；免疫印迹实验证实其与标准hG－CSF具有相同的抗原反应特异性；NH2-末端氨基酸分析与文献报道一致，采用小鼠白血病细胞株NFS－60测定活性为I×108IU／mg。
- 方向东马骊高基民黄树其王小宁
- 关键词：大肠杆菌基因重组肿瘤
- 人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外配体结合域的筛选及其结构分析被引量：1
- 2001年
- 血管内皮生长因子受体 Flt- 1胞外区具有 7个免疫球蛋白样的袢 (Ig- like loop) ,氨基端 3个loop负责与其配体 VEGF的结合 .为了寻求能与配体结合的更小的 Flt- 1片段 ,在对 Flt- 1胞外前3个 loop氨基酸组成和晶体结构分析的基础上 ,应用酵母双杂交系统对 Flt- 1的配体结合域进行筛选 .利用 PCR技术 ,从人胎盘 c DNA文库扩增出 4个截短的 Flt- 1 c DNA,分别含胞外第 2 ,1 - 2 ,2 - 3和 1 - 3个 loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒 ,并将 p GBT9/h VEGF165与 p GAD42 4 /Flt- 1 s两两配对转化酵母菌 SFY52 6,采用滤纸法和液体培养定量检测法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析 .结果显示 ,Flt- 1胞外 loop 2 - 3与 loop 1 - 3的配体结合能力相差不大 ,loop 1 - 2的结合力较弱 ,单独第 2个 loop无配体结合能力 .
- 马骊张智清王小宁陈爱君姚立红姜忠良
- 关键词：血管内皮生长因子受体酵母双杂交肿瘤组织
