顾恒伟
- 作品数：6 被引量：48H指数：4
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- 当归多糖对衰老模型小鼠造血干细胞Wnt／β-catenin信号通路的影响被引量：21
- 2015年
- 目的探讨当归多糖（ASP）对衰老小鼠造血干细胞（HSCs）Wnt／β-catenin信号通路的影响。方法6～8周雄性C57BL／6J小鼠30只，随机分为对照组、模型组和ASP组，每组10只。小鼠scD-半乳糖（D-Gal，120mg／kg），每天1次，连续42d，复制衰老小鼠模型；ASP（200mg／kg）组ip给药，连续35d。给药结束后第2天，免疫磁珠分离HSCs，衰老β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察衰老HSCs百分率：造血祖细胞混合集落（CFU—Mix）培养检测HSCs形成集落能力：流式细胞术和激光共聚焦检测HSCs中活性氧（ROS）水平；Westemblotting检测HSCs胞质β-catenin、胞核β-catenin、GSK-3B、Phospho．GSK-3p和TCF-4蛋白表达。结果与对照组比较，模型组HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平显著增加；胞质β-catenin、胞核βcatenin、Phospho-GSK-3β和TCF-4蛋白表达上调；CFU—Mix形成能力降低；GSK-3β蛋白表达下调。与模型组比较，ASP能显著降低衰老HSCs的SA—β—Ga1染色阳性百分率和ROS水平；下调胞质13-catenin、胞核β-catenin、Phospho—GSK-36和TCF-4蛋白表达；提高CFU—Mix形成能力；上调GSK-3β蛋白表达。结论ASP能延缓或拮抗D-Gal致小鼠HSCs衰老，其机制可能与ASP抑制Wnt／β-catenin信号通路过度激活有关。
- 张岩岩李静贾道勇张梦思夏婕妤景鹏伟宋小英王璐王亚平顾恒伟
- 关键词：当归多糖造血干细胞衰老WNT/Β-CATENIN信号通路D-半乳糖
- 人参皂苷Rb1、Rg1、Re对白血病细胞株KG1α增殖的影响被引量：11
- 2010年
- 目的:探讨人参皂苷Rb1、Rg1、Re对急性髓系白血病细胞株(KG1α)增殖的影响。方法:取对数生长期KG1α细胞,分设人参皂苷Rb1、Rg1、Re组和常规培养组,以MTT比色法检测作用24h、48h、72h时对KGIα细胞增殖抑制作用,并计算Rb1的IC50值,以此浓度为工作浓度,设常规培养组和处理组,台盼蓝计数法观察对KG1α细胞增殖的影响;流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果:MTT、台盼蓝计数显示人参皂苷单体Rb1、Rg1可抑制KG1α细胞增殖,呈浓度依赖性,以Rb1抑制效应最佳,于作用48h抑制率最高。台盼蓝计数显示人参皂苷单体Rb1-120μmol/L作用48h时抑制率达50.22%;流式细胞术结果提示,与对照组比较,Rbl-120μmol/L组G2/M期KG1α细胞比例增加(P<0.05)。结论:Rb1可抑制KG1α细胞体外增殖,其增殖抑制作用与将KG1α细胞阻滞于G2/M期有关。
- 王红宁左国伟陈地龙官涛李春莉姜蓉李静雷翠蓉顾恒伟王建伟
- 关键词：G2/M期阻滞增殖抑制
- 人参皂苷Rg1抑制白血病细胞K562增殖并诱导分化的分子机制被引量：7
- 2014年
- 目的研究人参皂苷的重要单体Rg1对人白血病细胞K562的增殖抑制作用并诱导其向成熟分化的分子机制。方法取对数生长期K562细胞,分设人参皂苷Rg1组和常规培养组,以流式细胞仪检测24、48、72 h Rg1对K562细胞增殖的影响;Wright’s染色测定细胞形态和酶标仪测定血红蛋白合成来观察Rg1作用24、48、72 h后K562细胞向成熟细胞分化的特征;激光共聚焦显微镜检测Rg1作用48 h对K562细胞STAT5蛋白分布的影响;Western blot法检测Rg1作用24、48、72 h对K562细胞STAT5蛋白表达的影响。结果流式细胞仪检测提示Rg1作用后K562细胞S期比例增加,48 h达高峰(P<0.05);酶标仪测定显示Rg1作用后,K562细胞合成血红蛋白(Hb)的量与对照组相比具有显著性提高(P<0.05);Wright’s染色显示经Rg1诱导后,K562细胞体积缩小,细胞核直径减小,细胞核和细胞质的比例降低,细胞向成熟方向分化;激光共聚焦显微镜观察显示经Rg1诱导后,K562细胞细胞质内的STAT5荧光强度增加,而细胞核内STAT5荧光强度减弱;Western blot法检测显示Rg1作用K562细胞后,细胞质内STAT5的表达水平增加,细胞核内STAT5的表达水平减少,作用48 h变化最明显。结论人参皂苷单体Rg1可抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其向成熟方向分化;Rg1改变K562细胞内STAT5的分布和减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是Rg1抑制K562细胞增殖并诱导其分化的作用机制之一。
- 柯大智王红宁陈地龙顾恒伟王亚平王建伟龙轩李春莉罗春燕
- 关键词：增殖抑制诱导分化STAT5
- 人参皂苷单体Rb1对人慢性粒白血病细胞K562增殖和分化的影响及其信号转导机制被引量：3
- 2013年
- 目的 探讨人参皂苷单体Rb1对人慢性粒白血病细胞K562增殖和分化的影响及其细胞内信号转导机制。方法 取对数生长期的K562细胞,分别加入不同浓度（20、40、80、160、320μmol/L）的Rb1,MTT法检测其对K562细胞增殖的影响;加入浓度为160μmol/L Rb1,收集培养24、48和72 h的细胞,经Wright染色后,镜下观察Rb1诱导K562细胞成熟分化情况;Western blot法检测培养12、24、48和72 h的细胞中JAK2、STAT5、p-JAK2及p-STAT5的表达水平。结果 浓度为20～160μmol/L的Rb1对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈剂量±赖性,作用48 h时抑制率达最高;经Rb1诱导后,K562细胞体积缩小,核直径减小,核和浆的比例降低,细胞向成熟方向分化;JAK2的表达水平随Rb1作用时间的延长而提高,p-JAK2的表达随着作用时间的延长而降低;各组间STAT5蛋白的表达水平无明显变化（P〉0.05）,但p-STAT5表达于作用48 h时开始降低,并持续至72 h。结论 人参皂苷单体Rb1可抑制人慢性粒白血病细胞K562增殖并诱导其向成熟方向分化,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化在细胞增殖及诱导分化的信号转导过程中发挥重要作用。本实验为治疗白血病天然中药的研发提供了实验依据。
- 柯大智王建伟王红宁顾恒伟陈地龙龙轩王亚平李春莉
- 关键词：K562细胞细胞增殖细胞分化信号转导
- 讨论式教学在《组织学与胚胎学》教学中的实践与思考被引量：5
- 2014年
- 在重庆医科大学临床医学类本科生《组织学与胚胎学》课程中实践讨论式教学，从设疑、小组学习、课堂讨论、总结与梳理等方面开展教学，并进行随堂测试以评价教学效果。测试表明讨论式教学效果良好，92.36%的学生答题正确率大于或等于60%。学生不但较好地掌握了课程知识点，也提高了综合能力。而教师精心拟定讨论题目、学生积极参与和教师及时梳理是讨论式教学的实施要点。
- 穆欣艺王亚平王建伟郑敏林雪梅李静顾恒伟吴宏
- 关键词：讨论式教学组织学与胚胎学主观能动性医学教育
- 人参皂苷Rg_1诱导人白血病K562细胞复制性衰老的机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老。流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测复制性衰老信号通路相关P21、P53与Rb蛋白表达;透射电镜观察人白血病K562细胞衰老超微形态学改变。结果 Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度为20μmol/L,时间为48h;诱导后的K562细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加(P<0.05);复制性衰老通路相关蛋白P21、P53和Rb表达上调(P<0.05);端粒长度缩短加速(P<0.05);经诱导细胞呈现胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大等衰老形态学变化。结论 Rg1可能经由p53-p21-Rb信号通路诱导K562细胞呈现复制性衰老特征。
- 李建平蔡世忠刘俊周玥刘典锋王亚平顾恒伟
- 关键词：人参皂苷RG1白血病K562细胞株盐法
