陈艳
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属儿科医院呼吸科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建及其在DC2.4的表达
- 2010年
- 目的构建含有小鼠趋化因子受体-7（CCR7）基因的重组腺病毒（AdCCR7）,观察其体外感染DC2.4细胞效率。方法将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5l83菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞,获得含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7;TCID50方法检测病毒滴度,PCR法鉴定病毒DNA。带绿色荧光蛋白腺病毒（AdGFP）和AdCCR7分别感染DC2.4（GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4）,同时设未处理DC2.4为空白对照。流式细胞术（FCM）检测各组细胞表面分子CD11c,MHCⅡ,CD86及CCR7表达,趋化实验检测CCR7的功能。结果获得滴度约为l.4×1010pfu/ml重组腺病毒AdCCR7。AdCCR7感染DC2.4后,CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较CD11c、MHCⅡ及CD86的表达均无明显差异,但CCR7表达升高;其对趋化因子CCL19的趋化率可达44.7%~60.0%,明显高于其它两组。结论成功构建含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7,该病毒可感染细胞株DC2.4,增加细胞表面CCR7表达以及细胞对CCL19的趋化性,为进一步体内实验研究携带CCR7基因的未成熟DCs功能提供了工作基础。
- 应林燕符州罗健陈艳王莉佳李欣
- 关键词：CCR7DC2.4腺病毒
- 哮喘患儿DC源性IL-12对T细胞GATA-3和T-bet的影响被引量：4
- 2008年
- 目的了解哮喘中树突状细胞(DC)分泌的细胞因子IL-12与转录因子T-bet和GATA-3的相互关系。方法用rhGM-CSF和rhIL-4诱导培养外周血来源的DC并予鉴定,ELISA法检测其分泌的细胞因子IL-12以及与自身T细胞反应后,RT-PCR检测T-bet和GATA-3mRNA含量,流式细胞术检测T细胞分泌的胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平。结果DC诱导培养第8天,哮喘组DC分泌的IL-12水平低于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.01);混合培养第7天,哮喘组IFN-γ和T-betmR-NA水平均低于正常对照组(P<0.05),而IL-4、GATA-3水平和比值IL-4/IFN-γ、GATA-3/T-bet均高于正常对照组,有显著性差异(P<0.01);IL-12与T-bet呈显著正相关,与GATA-3和GATA-3/T-bet呈显著负相关。结论转录因子T-bet、GATA-3调控Th0细胞分化受DC分泌的细胞因子IL-12的影响。IL-12如何影响T-bet、GATA-3的表达有待进一步研究。
- 陈艳符州陈坤华杨锡强刘恩梅王莉佳李欣
- 关键词：白介素-12T-BETGATA-3
- 人外周血单核巨噬细胞诱导、培养及鉴定被引量：8
- 2008年
- 在重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用下体外诱导培养人外周血单核巨噬细胞,并进行鉴定和功能检测。Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),含10%胎牛血清的RPMI1640培养基和rhGM-CSF培养7d。光镜、扫描电镜及透射电镜观察细胞形态,鸡红细胞吞噬试验检测吞噬功能,流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14等生物学技术鉴定贴壁细胞性质。获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型,有吞噬功能,纯度较高。人外周血单核细胞在rhGM-CSF诱导下向巨噬细胞分化,具有生物学活性,纯度较高,是一种简单易行的体外诱导培养巨噬细胞的方法。
- 杨志梅符州王莉佳陈艳
- 关键词：巨噬细胞
- CTLA4-Ig基因修饰的树突状细胞体外对Th1/Th2平衡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4 Ig)基因修饰的树突状细胞(CTLA4 Ig-DCs)体外对Th1/Th2平衡的影响。方法:通过腺病毒载体将目的基因(CTLA4 Ig)转染至小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)。采用流式细胞术(FCM)检测DC表面分子和胞内CTLA4 Ig的表达;采用混合淋巴细胞反应检测DC刺激同种异体T细胞的能力,ELISA法检测DC抗原提呈反应中Th1和Th2类细胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平。结果:CTLA4 Ig基因成功转染至DC,转染率约为80%,制备的CTLA4 Ig-DCs稳定表达CTLA4Ig,表面分子CD86呈现低表达;CTLA4 Ig-DCs可有效抑制T细胞增殖,降低抗原提呈反应上清中IFN-γ和IL-4的分泌,并增加IFN-γ/IL-4比值。结论:通过腺病毒将CTLA4 Ig转染DC并且高效表达,可有效降低DC表面CD86分子,抑制同种异体T细胞反应,并能影响体外Th1/Th2水平。
- 应林燕符州罗健陈艳刘恩梅王莉佳
- 关键词：CTLA4IGTH1/TH2平衡
- 新生期小鼠CTLA4Ig基因修饰的树突细胞对其成年期哮喘免疫耐受的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨腺病毒重组CTLA4Ig基因修饰的树突细胞疫苗（AdCTLA4Ig-DC）在Th2细胞占主导地位的过敏性哮喘中的免疫调节机制。方法新生BALB／c雌性小鼠20只，抽签法随机分成AdCTLA4Ig．DC干预组和空载腺病毒转染DC（AdGFP—DC）干预组，各10只，分别回输AdCTLA4Ig-DC和AdGFP—DC，无特定病原体（SPF）环境下饲养至6～8周；另相同环境生长6—8周龄BALB／c雌性小鼠20只，抽签法随机分为空白对照组、哮喘组，各10只。空白对照组小鼠以生理盐水腹腔注射，并以雾化吸入，其余3组小鼠以卵白蛋白腹腔注射致敏，并以雾化吸入激发，通过观察各组小鼠激发时的症状表现、肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞比例和肺部病理切片改变了解小鼠气道炎症情况；酶联免疫吸附（ELISA）方法测定血清及BALF中IgE、白细胞介素（IL）-4、IL-10及干扰素（IFN）-1水平。结果哮喘组小鼠致敏后出现呼吸加快等哮喘表现、肺部病理表现为炎性浸润。AdCTLA4Ig．DC干预组小鼠成年期哮喘发作的症状明显减轻，且支气管黏膜下和周围肺组织的炎性细胞浸润减少；血清和BALF中IgE、IL_4水平均明显低于哮喘组[IgE：（3．9±1．3）×10^5比（5．34-1．7）×10^5pg／ml和（22．9±11．8）×10^3比（122．0±59．6）×10^3pg／ml，IL-4：（70．5±7．0）比（88．7±9．2）pg／ml和（46．9±2．9）比（73．3±8．7）pg／ml，均P〈0．05]，IL一10水平则均明显高于哮喘组[（442±8）比（227．4-11）pg／ml和（83±42）比（27±11）pg／ml，均P〈0．05]，IFN-γ水平与哮喘组差异无统计学意义（均P〉0．05）；BALF中嗜酸性细胞明显低于哮喘组[（18．5±1．9）×10^4／ml比（62．3±6．7）×10^4／ml，P〈0．05]。结论新生小鼠给予CTLA4Ig基因修饰的未成熟DC，能够抑制成年期卵白蛋白致敏、激发引起的Th2细胞活化，可诱导哮喘免疫耐受的发生。
- 张瑾陈超陈艳王立波张晓波张明智
- 关键词：小鼠哮喘树突细胞免疫耐受
- 巨噬细胞对儿童哮喘T_H1/T_H2细胞因子的影响及茶碱的干预作用研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨巨噬细胞在哮喘儿童TH细胞亚群(TH1/TH2)功能中的影响以及茶碱的调节作用。方法分离2007年8月至11月重庆医大附属儿童医院收治的40例哮喘缓解期患儿外周血单核细胞,在重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用下诱导培养成单核源性巨噬细胞。分为抗原提呈组和茶碱干预组。茶碱干预组在培养过程中加入茶碱。两组巨噬细胞体外抗原活化后再与自体淋巴细胞共同培养3d,另设不参与反应的自身淋巴细胞对照组。透射电镜和扫描电镜鉴定培养的巨噬细胞,流式细胞仪检测3组CD+4T淋巴细胞胞内细胞因子γ-干扰素(IFNγ-)和白细胞介素4(IL-4)的表达。结果茶碱干预组与自身对照组相比,IL-4表达显著降低(P<0.01),IFNγ-/IL-4的比例显著升高(P<0.05),各组间IFNγ-表达无显著变化。结论茶碱可通过调节巨噬细胞功能,抑制TH2分泌IL-4,从而抑制TH2功能以改善哮喘TH1/TH2失衡状态。
- 杨志梅符州陈坤华王莉佳陈艳
- 关键词：巨噬细胞茶碱Γ-干扰素白细胞介素4
- 哮喘患者外周血DC参与Th2型偏移被引量：3
- 2008年
- 体外诱导和扩增树突状细胞(DC)并从形态学、细胞超微结构、特异性表面标志、分泌的细胞因子和混合淋巴细胞反应等五方面予以鉴定并研究其在哮喘中的生物学功能。采用正常人外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子(IL-4、GM-CSF)培养7 d后,LPS刺激其成熟。通过形态学观察、特异性表面标志、分泌细胞因子IL-12的能力及混合淋巴细胞反应予以鉴定,ELISA法检测DC分泌的细胞因子IL-12以及与自身T细胞反应后,流式细胞术检测T细胞分泌的胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平。结果显示正常人外周血诱导的DC具有典型的树突状突起和超微结构,高表达特异性表面标志物CD1a和CD83,分泌细胞因子IL-12以及很强的促进T细胞增殖功能。DC诱导培养第8天,哮喘组DC分泌的IL-12水平低于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.01);混合培养第7天,哮喘组IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.05),而IL-4和IL-4/IFN-γ比值均高于正常对照组,有显著性差异(P<0.01)。因而PBMC经细胞因子的序贯培养,可获得高纯度、功能性的DC,且该DC能通过调节IL-12的分泌在哮喘发病机制中发挥重要作用,为DC在肿瘤免疫、感染免疫、抗移植排斥等方面的研究奠定了基础。
- 陈艳符州陈坤华杨锡强刘恩梅王莉佳李欣
- 关键词：树突状细胞CD1ACD83IL-12哮喘
- 黄芪在树突状细胞水平对哮喘TH1／TH2平衡的调节作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨黄苠在树突状细胞（DC）水平对过敏性哮喘TH1／TH2平衡的调节作用。方法用rhGM-CSF和rhIL-4诱导培养外周血来源的DC并予鉴定，ELISA法检测其分泌的细胞因子IL-12、IL-10以及与自身T细胞反应后，RT-PCR检测T-bet和GATA-3 mRNA含最，流式细胞术检测T细胞分泌的胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平。结果哮喘患儿外周血DC分泌IL-10高于对照组（P〈0．05）；黄芪干预后DC分泌IL-10降低，与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。哮喘患儿外周血DC分泌IL-12低于对照组（P〈0．05）；黄芪干预后DC分泌IL-12增加，但与哮喘组比较差异无统计学意义。混合培养第7天哮喘组T细胞内IL-4水平显著高于正常对照组（P〈0．01）；而IFN-γ水平则屁著低于正常对照组（P〈0．05）；哮喘组IL4／IFN-γ比值高于正常对照组（P〈0．01）。黄芪于预后T细胞内IL-4水平与哮喘组比较差异无统计学意义，而IFN-γ水平增加，与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0．05），IL-4／IFN-γ比值降低，与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。哮喘组T-bet mRNA的表达强度明显低于正常对照组（P〈0．01）；而哮喘组GATA-3 mRNA的表达强度则明显高于正常对照组（P〈0．05）；哮喘组GATA-3／T-bet比值高于正常对照组（P〈0．05）。黄芪干预后T细胞GATA-3 mRNA的表达强度与哮喘组比较差异无统计学意义，而T-bet mRNA水平增加，与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0．05），GATA-3／T-bet比值降低，与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论哮喘患儿DC功能缺陷，产生IL-12减少、IL-10增加导致TH2优势分化，从而使TH1／TH2平衡向TH2倾斜，合成IFN-γ减少，进而造成气道慢性炎症、气道高反应性而致哮喘发作。黄芪对DC的调节主要通过降低IL-10的分泌水平，从而降低其抑制TH0细胞向TH1分化的功能，即间接抑制了TH0�
- 陈艳符州陈坤华杨锡强刘恩梅王莉佳李欣
- 关键词：哮喘树突状细胞细胞因子
