陈杰
- 作品数：26 被引量：41H指数：4
- 供职机构：海南大学更多>>
- 发文基金：国家社会科学基金海南省自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学经济管理生物学医药卫生更多>>
- 林氏扇头蜱Kunitz型蛋白酶抑制剂Boophilin-H2原核表达及抗凝活性
- 2024年
- 目的克隆林氏扇头蜱Boophilin-H2基因,构建重组表达载体,在大肠埃希菌中表达Boophilin-H2重组蛋白,并检测其抗凝活性。方法通过设计特异性引物,以林氏扇头蜱饱血成蜱RNA反转为cDNA为模板,PCR扩增Bo⁃ophilin-H2基因片段,克隆、连接到质粒pSmart-I,构建重组表达载体pSmart-I/Boophilin-H2,BamHⅠ和XhoⅠ双酶切验证重组表达载体,将表达载体转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷低温诱导表达,Ni-NTA Resin纯化重组蛋白,12.5%SDS-PAGE检测重组蛋白表达及纯化情况,使用3.8%枸橼酸钠采血管收集新西兰大白兔股静脉血,离心分离吸取上层血浆,利用体外凝血四项检测盘检测重组蛋白抗凝活性。结果扩增并克隆出林氏扇头蜱Boophilin-H2基因片段387 bp,构建出原核表达载体pSmart-I/Boophilin-H2,双酶切验证载体构建成功,转入大肠埃希菌中经0.8 mmol/L IPTG诱导表达16 h,SDS-PAGE检测表明重组蛋白表达在上清液中,主要以可溶形式存在,编码的Boophilin-H2重组蛋白大小在35000左右,纯化Boophilin-H2重组蛋白进行抗凝活性检测表明,重组蛋白能显著延长活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT),并具有浓度依赖性,重组蛋白对凝血酶时间、凝血酶原时间、纤维蛋白原凝血时长的影响差异无统计学意义。结论本研究构建Boophilin-H2表达载体,其表达产物具有很强的APTT抗凝活性,揭示了重组蛋白发挥作用在内源凝血途径,可能作用于内源性凝血因子Ⅷ、Ⅺ、Ⅻ从而阻止血液凝固,为进一步蜱类防控疫苗和抗凝血药物的研发提供了参考依据和理论基础。
- 赵培真李尧余玲玲谢子芳陈杰彭维祺黎明成赵建国管庆丰
- 关键词：原核表达抗凝活性
- 基于PLUS模型的海口市生态系统服务价值时空变化与情景模拟分析
- 2024年
- 以海口市为研究对象,分析2010—2020年土地利用/土地覆盖(LULC)数据和生态系统服务价值的变化,采用PLUS模型和当量因子法模拟2035年自然发展(BAU)、生态保护(EC)和经济发展(ED)3种情景下生态系统服务价值的时空变化特征,探究不同土地利用模式对生态系统服务价值的影响。结果表明:海口市土地利用类型以林地和旱地占比最高,生态系统服务结构相对稳定;受建设用地增加影响,水文调节和水资源供给服务功能下降幅度最大,表明LULC变化与生态系统服务价值变化密切相关;EC情景下,各项生态系统服务均得到改善,LULC的结构调整尤其是提高湿地占比,显著改善区域整体生态系统服务。
- 付晖陈杰黎淑翎
- 关键词：土地利用模式生态系统服务价值
- 布鲁氏菌脂多糖刺激山羊支气管上皮细胞的全转录组分析
- 2022年
- 布鲁氏菌(Brucella)的细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是布鲁氏菌逃避宿主免疫的主要毒力因子之一,由于LPS具有较低的免疫原性,因而不会激活宿主Toll样受体。本研究采用猪布鲁氏菌S2株(Brucella suis S2,B.suis S2)的LPS刺激山羊(Capra hircus)支气管上皮细胞,通过全转录组测序技术筛选响应B.suis S2 LPS刺激的宿主差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)和差异表达miRNA。通过筛选结果中|log2fold change|>1且P<0.05的基因和miRNA,在LPS刺激组和对照组间共产生97个差异基因和3条差异miRNA,其中包括58个上调基因和39个下调基因,3条差异miRNA均为下调。通过基因本体论(gene ontology,GO)注释和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集发现,DEGs主要富集于ATP代谢、RAGE受体结合、IL-12受体活性、趋化因子信号通路、细胞凋亡、细胞黏附分子、白细胞跨内皮迁移、B细胞受体信号通路、FcγR介导的吞噬作用等通路。蛋白质互作网络图可以将DEGs编码的蛋白质分为4个聚类,分别代表神经内分泌相关蛋白、核糖体相关蛋白、呼吸作用相关蛋白和免疫系统相关蛋白。此外,筛选到的chi-miR-1与INPP5D在B细胞受体信号通路上存在潜在相互调控作用。经RT-qPCR验证,基因表达量变化趋势和测序结果一致。该结果为进一步研究布鲁氏菌LPS在布鲁氏菌免疫逃逸以及宿主免疫应答中的功能奠定基础。
- 吴昊天张振兴陈思刘志勇安琪陈杰程逸文刘昂何美荣蒋俊明陈巧玲王凤阳杜丽满初日嘎
- 关键词：布鲁氏菌脂多糖转录组免疫逃避
- 基于分布式高能脉冲激光的橡胶树割胶方法
- 本发明的目的是针对现有技术的不足，提出一种分布式高能脉冲激光的橡胶树割胶方法，通过激光器产生高能的激光源，并使用光纤作为激光传输的介质，通过光纤开关导出光纤中的激光，然后利用振镜来调节激光切割的位移和速度，通过使用双通道...
- 蔡夫鸿唐荣年陈杰
- 文献传递
- 产学研合作、资源整合与人才培养机制研究
- 产学研合作教育是全面实施素质教育,提高人才素质中最有效的培养路径之一。本研究基于资源整合视角构建了多元交流、校外实践基地、校企研合办企业以及项目合作开发等人才培养机制,指出产学研合作教育通过全面有效的整合企业、高校与科研...
- 李伟铭陈杰余英
- 关键词：产学研资源整合合作教育
- 文献传递
- 多杀性巴氏杆菌攻毒小鼠肺脏的转录组分析被引量：1
- 2022年
- 多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)可感染多种动物宿主并引发败血症和呼吸道疾病,危害动物健康,给养殖业带来严重经济损失。本研究为探究多杀性巴氏杆菌感染期间对宿主肺脏基因表达的影响,选取羊源A型多杀性巴氏杆菌对小鼠(Mus musculus)进行攻毒实验,攻毒后72 h采集小鼠肺脏组织并提取总RNA。基于转录组测序,与对照组相比,攻毒组获得2443个差异表达基因,其中有1437个基因上调,1006个基因下调。对2443个差异表达基因进行GO富集分析,结果显示,差异基因显著富集的GO terms主要有B细胞稳态、T细胞迁移的正调控、整合素复合物和胶原蛋白结合;KEGG富集分析结果显示,差异基因显著富集于11条免疫炎症信号通路,包括细胞因子与细胞因子受体互作、趋化因子信号通路等;免疫炎症相关信号通路中,差异基因经蛋白质-蛋白质互作分析,结果显示,C3、C3ar1、C5ar1、Cxcl10、Cxcr2和Gng11基因处于网络中心,说明这些基因在多杀性巴氏杆菌感染过程中发挥了重要作用;从11条免疫炎症通路的基因中挑选10个进行实时荧光定量PCR验证,发现有8个基因表达趋势与测序结果相符,说明测序数据可靠。本研究展示了小鼠在多杀性巴氏杆菌感染过程中参与免疫反应的关键基因,为探索宿主抗多杀性巴氏杆菌感染分子机制提供了理论依据。
- 陈杰陈巧玲陈思程逸文刘志勇李彬刘昂满初日嘎王凤阳杜丽李昌金宁一
- 关键词：多杀性巴氏杆菌小鼠肺脏转录组实时荧光定量PCR
- 创业企业资源整合与企业创新绩效的实证研究
- 当前创业活跃度不断提升,创业已然成为我国经济发展的新兴动力。由于创业企业风险较大、生存能力较小,创业企业在对国民经济健康发展起着关键作用的同时,也面临巨大的挑战。随着研究的不断深入,创新在企业创业过程中发挥出提升新创企业...
- 陈杰
- 关键词：资源整合创新绩效
- 文献传递
- 创业理论的多层面研究与展望:从个体到环境的演进被引量：5
- 2013年
- 作为多学科交叉的研究领域,创业研究的理论发展一直存在多层面、多视角的观点。文章以研究变量为线索,从个体、组织、网络和环境四个层面对以往创业理论的代表性观点和理论框架进行了梳理、总结和述评,并提出了未来研究展望。旨在通过分层面梳理研究变量在创业理论中的引入、演进以及贡献,厘清创业理论的发展脉络,为后续的创业理论研究提供借鉴与参考。
- 李伟铭杨丹陈杰
- 关键词：创业理论
- 2015—2020年间海南热带雨林国家公园景观格局变化被引量：2
- 2023年
- 海南热带雨林国家公园森林资源富集,探究该地区景观格局时空演变特征,对维护海南岛生态安全屏障具有重要意义。该研究依托2015年和2020年海南热带雨林国家公园地表覆盖数据,建立景观分布格局体系,采用景观格局指数、单一景观动态度和景观转移矩阵的方法,分析海南热带雨林国家公园10类土地覆盖类型的景观格局变化特征,探究其变化的影响因素。结果表明:(1)2015—2020年,海南热带雨林国家公园整体景观破碎度呈现降低趋势,空间集聚性增加,综合动态度较小,景观类型整体较稳定。(2)雨林优势种常绿阔叶林面积不断增加,破碎度减小,呈正向增长态势;针叶林与灌木林面积减少;部分水体转化为湿地等,面积减小;其余景观类型面积占比较小,按自然演替方向发展变化。(3)景观格局演变主要以雨林自然演替为主,其次受政策、气候等因素综合影响。综上所述,自开展海南热带雨林国家公园体制试点以来,其景观格局趋于稳定。政策引导发挥着重要的正向作用,有针对性地开展热带雨林景观保护及修复工作,有助于海南热带雨林国家公园可持续发展。
- 陈圣天付晖杜彦君付广陈杰
- 关键词：影响因素自然保护地
- 林氏扇头蜱几丁质酶基因RLCht 1差异表达分析及酶活性检测
- 2024年
- 【目的】蜱的蜕皮发育过程与几丁质合成和水解紧密相关,而几丁质的降解主要是通过几丁质酶来完成。试验旨在分析林氏扇头蜱(Rhipicephalus linnaei)不同时期及各组织中几丁质酶RLCht 1基因序列表达差异、体外异源表达RLCht1蛋白并验证其几丁质酶活性,为开发安全高效的生物杀蜱剂提供新型靶标思路。【方法】收集不同吸血状态的各时期蜱及雌性饱血成蜱的不同组织样本用于基因差异表达分析,基于血红扇头蜱合神经节转录组中筛选出的推测的几丁质酶(putative chitinase)序列,在林氏扇头蜱中进行扩增并构建重组原核质粒,使用大肠杆菌系统表达林氏扇头蜱几丁质酶蛋白RLCht1,进行包涵体处理后使用镍柱纯化蛋白,预测RLCht1蛋白结构域;通过与3种不同荧光底物发生催化反应,检测纯化的几丁质酶RLCht1的催化活性大小及作用方式。【结果】RLCht 1基因在不同饱血状态下的各个时期及饱血雌成蜱的不同组织中均有表达,饱血若蜱阶段表达量极显著高于卵期(P<0.01),显著高于其他时期(P<0.05),并在饱血雌性成蜱中肠内有较高的表达量;构建了重组质粒RLCht1-pET-28a并成功表达RLCht1蛋白,经包涵体处理后在150 mmol/L咪唑洗脱下得到纯化的RLCht1蛋白,蛋白预测结果显示,RLCht1属于GH18家族几丁质酶;荧光底物酶活性检测表明,RLCht1包涵体溶解液、复性未纯化的原核蛋白、复性纯化浓缩后原核蛋白分别具有0.078与0.350 U/mL的几丁质外切酶活性及0.034 U/mLβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性。【结论】RLCht 1基因与若蜱至成蜱阶段的蜕皮活动相关,影响与免疫、消化、体液调节有关的生命活动过程。本研究在林氏扇头蜱中成功表达几丁质酶蛋白,证明了纯化的RLCht1蛋白具有几丁质催化功能,为林氏扇头蜱几丁质酶RLCht1蛋白在今后杀蜱剂开发中的应用提供了理论基础。
- 李尧赵培真谢子芳彭维祺陈杰赵建国管庆丰
- 关键词：酶活性检测表达谱包涵体
