郑启军
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
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- 携带Pyk2基因的shRNA质粒构建及其在Lovo结肠癌细胞系中的表达
- 2010年
- 目的:构建重组质粒PGCsi-Pyk2shRNA,并检测所引起的Pyk2mRNA和蛋白在Lovo结肠癌细胞系中的表达.方法:设计合成3对Pky2基因shRNA序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子并含有潮霉素B的pGCsi空载体,构建成能产生Pyk2短发卡RNA的质粒;采用双酶切和测序分析鉴定插入基因的序列;脂质体介导重组质粒pGCsi-Pyk2shRNA稳定转染Lovo细胞系并通过潮霉素B筛选,获得比较单一的转染细胞;分别采用RT-PCR、Westernblot等检测转染前后Pyk2的水平表达.结果:酶切鉴定和测序分析表明重组表达质粒pGCsi-Pyk2shRNA构建无误;绿色荧光照相及PCR表明质粒转染成功;RT-PCR和Westernblot均表明,与转染空质粒PGCsi组和转染仅含免疫荧光基因组细胞相比,转染重组表达质粒pGCsi-Pyk2shRNA细胞中Pyk2mRNA及蛋白表达水平均明显降低.结论:成功构建重组质粒pGCsi-Pyk2shRNA,并证明他能降低Pyk2在Lovo细胞株系中的表达,为进一步研究Pyk2如何调控Hic-5/ARA55,Paxillion等下游靶基因的表达和参与结肠癌表观遗传学发生机制奠定了基础.
- 胡刚汪欣郑启军万远廉刘玉村朱静
- 关键词：PYK2结肠癌小发夹RNA
- 蛋白酪氨酸激酶2对人大肠癌细胞生长和肺转移能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2（Pyk2）对人大肠癌细胞生长和肺转移能力的影响。方法利崩人大肠癌细胞株SW480，通过止义及反义eDNA稳定转染技术，分别构建Pyk2高表达和低表达的细胞SW480-Pyk2-和SW480-Pyk2-，并以未转染质粒和转染空质粒的SW480细胞作为对照。分别建辽裸鼠皮下种植瘤和肺转移模型。6周后，切取皮下种植瘤体并称重；切取肺转移标本，在显微镜下计数转移灶数目。结果Westernblot法证实Pyk2高表达、低表达及宅质粒细胞构建成功；SW480-Pyk2’组（MeanRank=6．19）皮下种植瘤质量明显低于SW480组（MeanRank=18．69）和SW480-Vector组（MeanRank=14．12），而SW480-PI，k2-组（MeanRank=27．00）日月显高于SW480组和SW480-vector组，差异有统计学意义（x2=20．646，P〈0．05）；SW480-Pyk2’组（MeanRank=6．62）肺转移灶数目明显少于SW480组（MeanRank=16．06）和SW480-veetor组（MeanRank=14．94），SW480-Pyk2组（MeanRank=28．38）肺转移灶数目明显多于SW480组和SW480-vector组，差异有统计学意义（x2=21．948，P〈0．05）；并且种植瘤质量和肺转移灶数与Pyk2的表达量均旱明显负相关（r=-0．776，-0．777，P〈0．05）。结论Pyk2在裸鼠体内能够抑制大肠痈细胞的生长和肺转移能力。
- 武颖超郑启军汪欣刘玉村万远廉朱静
- 关键词：结直肠肿瘤血行转移
- Pyk2对人类结肠癌细胞肝转移能力及超微结构的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:研究在裸鼠结肠癌肝转移模型中,富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)对人结肠癌细胞肝转移能力和超微结构的影响。方法:利用正义及反义cDNA技术,在人结肠癌细胞系SW480基础上,构建Pyk2高表达的细胞系SW480-Pyk2+及低表达的细胞系SW480-Pyk2-作为实验组,并以转染空载体的细胞系SW480-vector和原细胞系SW480作为对照组。4组共32只4周龄的Babl/c nu/nu雄性裸鼠,用脾注射保留脾脏法构建裸鼠肝转移瘤模型。6周后处死裸鼠,用Western blot检测瘤细胞中Pyk2蛋白的表达,计数肝转移瘤数目,电子显微镜下观察肝转移瘤细胞的超微结构。结果:6周后裸鼠肝转移模型建立成功,Western blot显示SW480-Pyk2+组的蛋白表达量明显高于空载体组(SW480-vector)和SW480组,SW480-Pyk2-组的蛋白表达量明显低于SW480组和SW480-vector组;肝转移瘤计数显示SW480-Pyk2+组明显少于SW480-vector组及SW480组,SW480-Pyk2-组明显多于SW480-vector组及SW480组(P<0.05),而SW480-vector组与SW480组之间无明显差异;电子显微镜下观察发现,SW480-Pyk2+组细胞连接发育较成熟,有形成腺腔趋势,微绒毛较多,细胞器较多,粗面内质网较多,细胞异型性较轻;而SW480-Pyk2-组细胞连接发育不良,细胞器少,微绒毛短小而稀疏,细胞核异形明显,有核沟。结论:Pyk2能减少结肠癌肝转移灶的数量,改善细胞的异型性和细胞连接发育,并可能通过此机制抑制肿瘤转移。
- 郑启军汪欣胡刚万远廉刘玉村朱静
- 关键词：结肠肿瘤肝转移超微结构
- 空芯针穿刺活检对乳腺癌患者远期预后的影响
- 郑启军何英剑李金锋王天峰解云涛范照青欧阳涛
- 关键词：乳腺癌无复发生存率
