蒋毅 作品数:29 被引量:87 H指数:6 供职机构: 山西医科大学第一医院 更多>> 发文基金: 山西省回国留学人员科研经费资助项目 山西省科技攻关计划项目 山西省卫生厅科技攻关计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 环境科学与工程 更多>>
大鼠Clara细胞分泌蛋白CC16基因的克隆和原核表达及纯化 被引量:1 2013年 目的克隆大鼠Clara细胞分泌蛋白(CC16)基因,原核表达并纯化重组的CC16蛋白,为进一步研究CC16蛋白的功能及对炎症性气道疾病的治疗作用奠定基础。方法制备大鼠肺组织总RNA,根据大鼠CC16基因全长编码序列(GenBank登录号:NM_013051)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli DH5α),阳性菌落经PCR和双酶切鉴定并测序。将重组质粒pET30a(+)-rCC16转化至E.coli Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,重组融合蛋白经Ni2+琼脂糖凝胶亲和纯化。分别以抗His标签抗体和山羊抗CC16抗体进行免疫印迹(Western blotting)分析并鉴定重组蛋白。结果 RT-PCR扩增产物约为290 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-rCC16构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量约16 kDa的可溶性重组蛋白。Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带His标签的重组融合蛋白,且能被山羊抗CC16抗体识别。结论成功构建基因重组体pET30a(+)-rCC16,并制备出可溶性大鼠重组CC16蛋白。 庞敏 杜永成 蒋毅 刘志宏 张彩苹 陈丽丽 王海龙关键词:原核表达 免疫印迹 香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的影响 被引量:2 2009年 目的通过观察香烟烟雾暴露后支气管哮喘(简称哮喘)大鼠Th1/Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的变化,探讨吸烟加重哮喘的免疫学机制。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾暴露组、哮喘组、哮喘+烟雾暴露组;建立慢性哮喘大鼠模型和哮喘大鼠香烟烟雾暴露模型,普通病理观察气道壁厚度的变化,酶联免疫吸附试验检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)和白介素4(IL-4)含量;免疫印迹检测肺组织GATA-3蛋白表达水平。结果①哮喘+烟雾暴露组气道壁厚度[(18.34±0.87)μm^3/μm]较哮喘组[(15.72±0.82)μm^2/μm]和对照组[(8.52±0.58)μm^2/μm]均明显增加,差异有统计学意义(P值均〈0.01);②哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织IL~4含量[(34.07±6.11)ng/L]、[(1.41士0.31)ng/L]较哮喘组[(22.57±4.32)ng/L3、[(0.80±0.14)ng/L]和对照组[(11.38±2.90)ng/L]、[0.27±0.08)ng/L]均增高,差异有统计学意义(P值均〈0.05);哮喘+烟雾暴露组血浆INF-γ含量[(9.53±3.28)ng/L]较哮喘组[(58.83±19.57)ng/L]和对照组[(150.87±55.54)ng/L]均降低,差异有统计学意义(P值均〈0.05),肺组织INF-γ含量[(0.48士0.10)ng/L]较哮喘组[(0.58士0.23)ng/L3差异无统计学意义;③哮喘+烟雾暴露组GATA-3蛋白表达(1.29±0.08)较哮喘组(0.87±o.04)和对照组(0.45±0.06)均增加,差异有统计学意义(P值均〈0.01)。结论香烟烟雾暴露可以通过上调转录因子GATA-3蛋白表达,进而调控Th1/Th2偏移,在哮喘气道炎症及气道重塑的形成中扮演重要角色,为吸烟加重哮喘的免疫学机制之一。 蒋毅 杜永成 许建英关键词:辅助性T细胞 GATA-3 武汉地区重型及危重型2019新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者D-二聚体、炎症指标、细胞因子与疾病严重程度的关系 被引量:6 2020年 目的分析2019新型冠状病毒肺炎(COVID-19)重型及危重型患者D-二聚体、炎症指标、细胞因子水平与疾病严重程度的关系。方法收集华中科技大学同济医院中法新城院区山西援鄂国家医疗一队2020年2月8日至3月25日收治的41例COVID-19患者病例资料,重型28例,危重型13例,比较不同临床分型COVID-19患者的基本临床特征,入院时D-二聚体、炎症指标[WBC、ANC、降钙素原(PCT)、超敏C-反应蛋白(hsCRP)]、细胞因子(IL-2R、IL-6、IL-8、TNF-α)水平;比较有无D-二聚体异常患者的细胞因子(IL-2R、IL-6、IL-8、TNF-α)水平;并比较抗凝治疗前后患者D-二聚体、细胞因子指标(IL-2R、IL-6、IL-8、TNF-α)水平变化。结果 41例患者中,男23例(56.1%),女18例(43.9%),平均年龄(55.4±11.9)岁。危重型患者平均年龄[(61.1±10.4)岁]高于重型患者[(52.8±11.7)岁],差异有统计学意义(t=2.264,P=0.032)。危重型患者合并高血压(χ^2=10.420,P=0.001)、心血管疾病(χ^2=6.972,P=0.008)、脑血管疾病(χ^2=6.972,P=0.008)比例高于重型患者。危重型患者出现呼吸困难、盗汗及乏力症状比例均高于重型患者,差异均有统计学意义(χ^2分别为14.898、6.972、7.823,P值分别为<0.001、0.008、0.005)。危重型患者D-二聚体、WBC、ANC、PCT、hsCRP、IL-8水平均高于重型患者,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。D-二聚体异常患者IL-2R、IL-8、TNF-α水平均较D-二聚体正常者增高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。8例预防性抗凝治疗患者D-二聚体、IL-2R、IL-6、IL-8抗凝治疗后比治疗前水平降低。结论 COVID-19危重型患者存在更严重的凝血-免疫功能紊乱,动态监测D-二聚体、细胞因子水平有助于早期识别COVID-19危重型患者,抗凝治疗可能通过纠正凝血-免疫功能紊乱促进疾病好转。 张婕 张婕 高晓玲 李登举 蒋毅 刘燕 许东 杨林花关键词:凝血功能 D-二聚体 细胞因子 不同临床表型哮喘患者咳嗽和气道炎症特点分析 被引量:1 2023年 目的 分析不同临床表型哮喘患者咳嗽和气道炎症特点。方法 回顾性分析2020年1月~2021年9月于山西医科大学第一医院呼吸科门诊新确诊的支气管哮喘患者205例,根据临床症状将其分为典型哮喘伴咳嗽组、典型哮喘不伴咳嗽组、咳嗽变异性哮喘组(CVA),对三组哮喘患者咳嗽特点和气道炎症进行分析。结果 典型哮喘伴咳嗽组与CVA组咳嗽性质、时相、诱发或加重因素无差异,CVA组的咳嗽日间评分为(3.2±1.12)分,高于典型哮喘伴咳嗽组(2.88±1.07)分(P<0.05);CVA组中影响日常生活者占47%,多于典型哮喘伴咳嗽组(27%)(P<0.05)。典型哮喘伴咳嗽组诱导痰嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)为(20.36±51.74)%,高于典型哮喘不伴咳嗽组(8.18±12.76)%和CVA组(1.44±3.88)%(P<0.05);典型哮喘伴咳嗽组FeNO值为(66.9±50.8)ppb,高于典型哮喘不伴咳嗽组(44.40±29.46)ppb和CVA组(39.69±37.97)ppb(P<0.05)。结论 咳嗽严重影响哮喘患者的日常活动,伴有慢性咳嗽的哮喘患者有着更严重的气道炎症。 张亚丽 蒋毅 安若丽 张韩伟关键词:哮喘 呼出气一氧化氮 香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的影响 被引量:4 2009年 目的通过观察香烟烟雾暴露后支气管哮喘(简称哮喘)大鼠Th1/Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的变化,探讨吸烟加重哮喘的免疫学机制。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾暴露组、哮喘组、哮喘+烟雾暴露组;建立慢性哮喘大鼠模型和哮喘大鼠香烟烟雾暴露模型,普通病理观察气道壁厚度的变化,酶联免疫吸附试验检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)和白介素4(IL-4)含量;免疫印迹检测肺组织GATA-3蛋白表达水平。结果①哮喘+烟雾暴露组气道壁厚度[(18.34±0.87)μm2/μm]较哮喘组[(15.72±0.82)μm2/μm]和对照组[(8.52±0.58)μm2/μm]均明显增加,差异有统计学意义(P值均<0.01);②哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织IL-4含量[(34.07±6.11)ng/L]、[(1.41±0.31)ng/L]较哮喘组[(22.57±4.32)ng/L]、[(0.80±0.14)ng/L]和对照组[(11.38±2.90)ng/L]、[(0.27±0.08)ng/L]均增高,差异有统计学意义(P值均<0.05);哮喘+烟雾暴露组血浆INF-γ含量[(9.53±3.28)ng/L]较哮喘组[(58.83±19.57)ng/L]和对照组[(150.87±55.54)ng/L]均降低,差异有统计学意义(P值均<0.05),肺组织INF-γ含量[(0.48±0.10)ng/L]较哮喘组[(0.58±0.23)ng/L]差异无统计学意义;③哮喘+烟雾暴露组GATA-3蛋白表达(1.29±0.08)较哮喘组(0.87±0.04)和对照组(0.45±0.06)均增加,差异有统计学意义(P值均<0.01)。结论香烟烟雾暴露可以通过上调转录因子GATA-3蛋白表达,进而调控Th1/Th2偏移,在哮喘气道炎症及气道重塑的形成中扮演重要角色,为吸烟加重哮喘的免疫学机制之一。 蒋毅 杜永成 许建英关键词:辅助性T细胞 GATA-3 重型/危重型新型冠状病毒肺炎患者合并肝脏损伤及凝血功能障碍的研究 被引量:2 2021年 目的:分析重型及危重型新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者合并肝脏损伤及凝血功能障碍的情况。方法:收集华中科技大学同济医学院附属同济医院中法新城院区山西队2020年2月8日至3月25日诊治的53例重型及危重型COVID-19患者的病历资料,将患者分为重型组(38例)和危重型组(15例),回顾性分析不同临床分型患者的临床特征及入院时肝功能、凝血功能及炎症指标的变化;将患者按诊疗过程中肝功能异常程度分为肝脏损伤组、肝功能轻度异常组以及肝功能正常组,比较各组患者相应时间节点碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs CRP)、D-二聚体水平的变化。分析所有患者疾病转归。采用独立样本t检验、Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis检验、卡方检验进行统计学分析。结果:53例重型及危重型COVID-19患者中位年龄为57(27-80)岁,其中男性29例(54.7%),女性24例(45.3%)。起病至入院的时间为(11.5±7.7)d。危重型较重型患者AST、TBil、DBil、ALP、GGT、LDH、D-二聚体、PCT、hs CRP水平明显增高,而Alb水平明显降低(P<0.05)。53例患者中,共有34例(64%)患者出现ALT、AST或TBil异常升高,4例(7.5%)符合COVID-19合并肝脏损伤。根据肝功能异常程度分组后,肝脏损伤组ALP、GGT、D-二聚体水平较肝功能正常组明显升高(P<0.05),肝脏损伤组D-二聚体水平较肝功能轻度异常组明显升高(P<0.05),肝功能轻度异常组ALP、GGT较肝功能正常组明显升高(P<0.05)。结论:本组患者中,7.5%的重型及危重型COVID-19患者合并肝脏损伤并伴有D-二聚体水平明显升高,危重型患者较重型患者存在更严重的肝脏损伤及凝血功能障碍,二者可能共同促进COVID-19的疾病进展。 张婕 张婕 高晓玲 刘燕 蒋毅 赵芳芳 赵芳芳 霍丽娟 霍丽娟关键词:肝脏损伤 凝血功能 D-二聚体 炎症指标 重症哮喘的治疗进展 被引量:1 2022年 2014年欧洲呼吸学会/美国胸科学会(ESR/ATS)把重症哮喘定义为在过去的一年里需要按照GINA(Global Initiative for Asthma)推荐的第4~5级治疗或者超过50%的时间使用全身激素以达到哮喘控制或者即使给予上述治疗仍未控制的哮喘^([1])。2014年我国14岁以上人群哮喘流调显示,哮喘患者中,重症哮喘占5.99%^([2]),虽然患病率较低,但却是哮喘患者致死、致残的主要原因。 张韩伟 蒋毅 张亚丽 岳倩如关键词:重症哮喘 哮喘控制 哮喘患者 患病率 香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠CD4+ CD25+调节性T细胞及转录因子Foxp3表达的影响 被引量:11 2010年 目的 探讨香烟烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及转录因子Foxp3表达的影响.方法 将40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、烟雾暴露组、哮喘组和哮喘+烟雾暴露组,每组10只;哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,生理盐水组雾化生理盐水,烟雾暴露组采用吸入香烟烟雾,哮喘+烟雾暴露组于每日雾化激发OVA前给予香烟烟雾吸入.流式细胞仪检测外周血CD4+ CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)以及白细胞介素4(IL-4)含量;Western blot检测肺组织Foxp3蛋白表达水平.结果 (1)哮喘组大鼠CD4+CD25+Treg为(6.4±1.0)%,低于生理盐水组的(9.9±1.0)%,差异有统计学意义(F=92.59,P<0.01);哮喘+烟雾暴露组为(3.3±0.8)%,低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=92.59,P<0.01).(2)哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[(22.6±4.3)ng/L、(0.8±0.1)ng/L]高于生理盐水组[(11.4±2.9)ng/L、(0.3±0.1)ng/L],差异有统计学意义(F值分别31.69和49.29,P<0.01);哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织中IL-4含量[(34.1±6.1)ng/L、(1.4±0.3)ng/L]高于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F值分别为31.69和49.29,P<0.05);哮喘组血浆中INF-γ含量[(59±20)ng/L]低于生理盐水组[(151±56)ng/L],差异有统计学意义(F=21.83,P<0.05),哮喘+烟雾暴露组INF-γ含量[(10±3)ng/L]低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=21.83,P<0.05).(3)哮喘组Foxp3蛋白表达为8.18±0.26,低于生理盐水组的10.27±0.33(F=43.33,P<0.01);哮喘+烟雾暴露组为6.36±0.38,低于生理盐水组和哮喘组(F=43.33,P<0.05).结论 香烟烟雾暴露可能通过下调CD4+CD25+Treg数量并抑制Foxp3蛋白表达,进一� 蒋毅 杜永成 许建英关键词:哮喘 转录因子 雷公藤防治哮喘的作用机制 被引量:6 2005年 杜永成 蒋毅 刘立新关键词:哮喘治疗 雷公藤 下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴 糖皮质激素 激素依赖型 激素抵抗型 重度哮喘临床特征、炎症标志物特点及危险因素分析 被引量:1 2023年 目的探讨重度哮喘的临床特征、炎症标志物特点及危险因素,以提高临床医生对该疾病的认知。方法收集2018年5月—2021年5月就诊于山西医科大学第一医院呼吸科门诊的支气管哮喘患者一般情况、疾病诊治情况、个人史、共患病、辅助检查、哮喘控制测试(asthma control test,ACT)评分等资料,共纳入127例患者,其中重度哮喘组40例,轻中度哮喘组87例,采用χ^(2)检验、独立样本t检验以及Logistic回归分析重度哮喘的临床特征、炎症标志物特点及危险因素。结果与轻中度哮喘患者比较,重度哮喘患者年龄更大[(51.0±12.0)岁比(40.7±12.8)岁,P<0.05)],吸烟者更多(32.5%比14.9%,P<0.05),男性患者为主(67.5%比40.2%,P<0.05),肺功能更差[第1秒用力呼气容积占预计值百分比为(56.1±23.8)%比(93.2±18.0)%,第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值为(56.7±13.2)%比(75.8±9.0)%,均P<0.05],前1年急性加重次数更多(2.7±3.1比0.1±0.4,P<0.05),ACT评分更低(14.4±3.7比18.0±5.0,P<0.05),血和诱导痰嗜酸性粒细胞计数更高[(0.54±0.44)×10^(9)/L比(0.27±0.32)×10^(9)/L,(25.9±24.2)%比(9.8±17.5)%,均P<0.05]。两组哮喘患者相比,诱导痰中性粒细胞比例、呼出气一氧化氮相比差异无统计学意义(P>0.05)。相关多危险因素分析显示吸烟[比值比(odds ratio,OR)=2.740,95%可信区间(confidence interval,CI)1.053~7.130,P<0.05]、合并过敏性鼻炎(OR=14.388,95%CI 1.486~139.296,P<0.05)、胃食管反流(OR=2.514,95%CI 1.105~5.724,P<0.05)是重度哮喘患病的危险因素。结论与轻中度哮喘患者相比,重度哮喘患者存在肺功能差、急性加重次数多、嗜酸性粒细胞炎症表型为主等特征,即使给予更高级别治疗仍然控制较差,患病危险因素包括吸烟、过敏性鼻炎、胃食管反流等。 张韩伟 蒋毅 张亚丽 安若丽 岳倩如关键词:重度哮喘 炎症标志物