董银行
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：北京农学院植物科学技术学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 桃果实中脱落酸受体ABAR/CHLH结合区蛋白的原核表达、纯化及复性
- 2011年
- 为了剖析桃果实中脱落酸受体ABAR/CHLH蛋白的结合活性,从桃果实中提取总RNA,采用RT-PCR方法,以桃果实RNA逆转录的cDNA为模板,扩增出ABAR/CHLH基因的结合区功能片段C369,回收目的片段并测序,基因片段长度为1 121 bp,编码369个氨基酸残基,分子量约为40 kD。利用BamHⅠ和NotI酶切位点将该片段编码区插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建ABAR/CHLH基因片段原核表达载体pET28a-C369,经菌落PCR和测序确证后,转化E.coliRosetta(DE3),通过IPTG诱导其表达His-CHLH融合蛋白。通过SDS-PAGE检测及Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化目的蛋白,并用纯化复性的His-CHLH C369融合蛋白制备抗体。
- 刘青董银行卢冬李春丽沈元月
- 关键词：桃果实
- 草莓果实β-葡萄糖苷酶基因FaBG1克隆及成熟期表达分析被引量：2
- 2012年
- 为了探讨脱落酸合成相关酶β-葡萄糖苷酶FaBG1基因是否参与草莓果实成熟的调控,本研究以‘红颜’草莓着色期间的果实为试材,首先通过RT-PCR技术克隆β-葡萄糖苷酶FaBG1基因的编码区核苷酸序列。该1,845bp基因在基因组中以单拷贝形式存在,并编码1个含有615氨基酸的多肽。生物信息学分析表明,FaBG1含有3个跨膜区,在进化上高度保守。围绕果实着色期间FaBG1基因转录水平以及ABA含量分析表明,随着果实的着色增加,FaBG1转录水平和ABA含量都逐渐增加,半红后基因表达量逐渐降低,而ABA含量继续上升,至成熟时达到高峰。本研究结果表明FaBG1可能参与草莓果实的着色启动。
- 董银行郭家选
- 关键词：草莓果实成熟脱落酸Β-葡萄糖苷酶
- 葡萄果实β–葡萄糖苷酶基因克隆、原核表达及活性检测被引量：3
- 2012年
- 以‘玫瑰香’葡萄着色期的果肉为试材,通过反转录技术克隆了ABA合成相关酶β–葡萄糖苷酶基因VvBG1的1 518 bp编码区核苷酸序列,其编码1个含有505氨基酸的多肽。生物信息学分析表明,VvBG1含有1个跨膜区和糖基水解酶1超家族保守域。通过BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶将除去信号的编码区克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),成功诱导并纯化了VvBG1融合蛋白。经过透析复性和超滤浓缩得到了0.8 mg.mL-1可溶的融合蛋白。通过纯化蛋白葡萄果肉均浆液孵育试验和GC–MS ABA含量分析证实了葡萄果实中β–葡萄糖苷酶VvBG1具有较高的生理活性。
- 董银行郭家选
- 关键词：葡萄果实原核表达
