白文成
- 作品数：15 被引量：4H指数：1
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组不可分型流感嗜血杆菌E蛋白与血浆脂蛋白(a)的相互作用
- 2017年
- 目的:E蛋白(Protein E,PE)是不可分型流感嗜血杆菌(Nontypeable Haemophilus influenza,NTHi)表面的一种纤溶酶原(plasminogen,Plg)受体,其C末端含有两个赖氨酸残基。NTHi可通过其表面的PE与Plg结合,从而利用机体的纤溶系统深层入侵宿主。基于脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]中载脂蛋白(a)[Apolipoprotein(a),Apo(a)]与Plg高度的同源性,拟证明Lp(a)是否会与重组表达的PE(r PE)结合。方法:原核表达并纯化r PE及敲除C末端两个赖氨酸残基的r PEΔKK,密度梯度离心结合阴离子交换层析分离人血浆Lp(a),通过ELISA、Pull down、Western blot等方法研究r PE与Lp(a)的相互作用。结果:r PE与Lp(a)结合,但不与LDL结合,且r PEΔKK与Lp(a)的结合能力明显低于r PE;赖氨酸类似物6-氨基乙酸(EACA)能有效抑制r PE与Lp(a)的结合;Lp(a)对r PE与Plg的结合具有微弱的抑制作用。结论:r PE能够与Lp(a)结合,其中r PE的C末端赖氨酸残基和Apo(a)的赖氨酸结合位点(lysine binding sites,LBS)是r PE与Lp(a)结合的主要位点。
- 王瑜刘治刘治白文成韩润林
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌PE纤溶酶原
- 链球菌表面烯醇化酶重组蛋白多克隆抗体的制备
- 2012年
- 制备M6型GAS表面烯醇化酶抗体。皮下多点注射GAS表面烯醇化酶重组蛋白(rSEN)免疫家兔,采用亲和层析纯化免疫血清,通过SDS-PAGE、ELISA、Western-Blot等方法检测抗体的特异性,并初步用制备的抗体检测了M6血清型GAS表面烯醇化酶的表达。制备的抗体蛋白纯度较高,检测的特异性较强,用制备的抗体可以检测到活体菌表面的烯醇化酶。成功制备并纯化得到了GAS表面烯醇化酶多克隆抗体。
- 许丽萍白文成刘杨韩润林
- 关键词：A群链球菌多克隆抗体
- 链球菌表面烯醇化酶及其变异体重组蛋白的表达纯化被引量：1
- 2011年
- 目的:表达并纯化M6型GAS表面烯醇化酶以及其敲除C末端赖氨酸残基重组蛋白(rSEN和rSENΔ434-435)。方法:克隆了M6型GAS ATCC32175的SEN基因以及SENΔ434-435基因,与pASK-IBA37载体连接后,表达蛋白并用亲和层析色谱纯化重组蛋白;通过酶促反应实验测定了重组蛋白的生物活性。结果:2种基因克隆条件稳定,蛋白表达量大,且纯化方法可靠,纯化的重组蛋白具有较高的生物活性。结论:成功表达并纯化了rSEN和rSENΔ434-435蛋白。
- 许丽萍白文成刘杨代霄燕李培峰
- 关键词：A群链球菌烯醇化酶纯化
- LDL作为调理素增强单核细胞对A群链球菌的吞噬效率
- <正>目的:证明LDL可以作为调理素促进单核/巨噬细胞对A群链球菌(GAS)的吞噬效率方法:将FITC标记的四株GAS分别与U937单核细胞共孵育,并在有些实验中加入一定量的LDL,在一定时间后进行荧光强度测定、平板菌落...
- 周鹿蕾刘玲杨金丽李雨欣白文成刘娜李文龙高玉敏徐丽萍韩润林
- 文献传递
- 梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立
- 2022年
- 为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明:对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅花鹿血清。说明试验建立的间接ELISA方法能够作为鹿结核病血清学快速检测的有效方法,弥补了传统方法的不足。
- 包福祥张磊张磊敖可心蒋强吴玘瑶张慧敏程艺白文成白文成
- 关键词：牛结核分枝杆菌梅花鹿间接ELISA
- M6型A群链球菌表面烯醇化酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶特性的研究
- 2012年
- 表面烯醇化酶(surface enolase,SEN)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(surface glyceraldehydes-3-phosphate dehydro-genase,sGAPDH)都是A群链球菌(group A Streptococcus,GAS)没有跨膜结构的膜表面蛋白,它们可能在GAS感染中起到重要的作用。在本研究中,对SEN和sGAPDH在M6型GAS不同生长阶段(即在对数期和稳定期)的表达情况进行检测分析。取对数期(OD600=0.5-0.6)和稳定期(OD600=1.5-1.6)的GAS,分别测定SEN和sGAPDH活性。同时用变溶菌素(mutanolysin)提取这2个生长阶段细胞壁结合蛋白,用Western blot检测该提取物中的SEN和sGAPDH。结果表明在相同菌细胞浊度的条件下,SEN在M6型GAS对数期时的表达量及活性比其稳定期时的高45%左右。虽然sGAPDH的表达量较高但活性很低(<0.07mM NADH/min),并且在这2个生长阶段没有明显的差异。
- 白文成韩润林
- 关键词：A群链球菌
- 人脂蛋白(a)与金黄色葡萄球菌重组α-烯醇化酶的相互作用被引量：1
- 2017年
- 表面α-烯醇化酶(Eno)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)重要纤溶酶原受体(Plr),其C端Lys残基是与纤溶酶原(Plg)Kringle结构域(K或K结构域)结合位点之一。人脂蛋白(a)(Lp(a))是由一分子载脂蛋白(a)(apo(a))和一分子低密度脂蛋白(LDL)通过二硫键结合构成,apo(a)上的K结构域与Plg的K结构域具有高度同源性,都有赖氨酸结合位点(LBS)。Apo(a)的KIV_(10)是主要的LBS。因此假设,Lp(a)也可能与Eno结合,从而竞争性抑制Eno与Plg的结合。本文为研究Lp(a)与Eno的相互作用机制,在大肠杆菌中重组表达了Eno(rEno)及敲除C末端Lys残基(第434个氨基酸残基)的Eno(rEno△434)和apo(a)的KIV_(10)结构域(rKIV_(10));用酶联免疫吸附试验(ELISA)和亲和色谱层析(Pull down)对rEno、rEno△434与Plg、Lp(a)、LDL、rKIV_(10)的相互作用机制进行了研究。结果表明,rEno与Plg、Lp(a)、rKIV_(10)呈特异性结合,一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)能够抑制它们的结合,证明Lp(a)与rEno也是通过LBS结合;rEno不与LDL结合,证明Lp(a)是通过apo(a)与rEno结合;rEno△434与Plg和Lp(a)的结合有明显降低,证明rEno的C端Lys残基是与Lp(a)结合的位点之一。
- 纪智星白文成
- 关键词：金黄色葡萄球菌纤溶酶原相互作用
- 卵黄低密度脂蛋白的提取及与利福喷丁的融合技术
- 本发明涉及一种新的卵黄低密度脂蛋白的提取方法及其与利福喷丁的融合技术，其中卵黄低密度脂蛋白的提取包括：(1)蛋黄浆的制备；(2)硫酸葡聚糖纤维素亲和层析提取卵黄低密度脂蛋白；(3)透析除去盐分。卵黄低密度脂蛋白与利福喷丁...
- 韩润林杨金丽李雨欣刘恩白文成
- 文献传递
- LDL和HDL作为调理素增强单核细胞对A群链球菌的吞噬效率
- 研究背景:我们以往的研究证实,低密度脂蛋白(LDL)可以与多个血清型的A群链球菌(GAS)表面的1型胶原样结合蛋白(Streptococcal collagen-like protein 1,Scl1)结合.我们前期的研...
- 周鹿蕾刘玲杨金丽李雨欣白文成刘娜李文龙高玉敏徐丽萍韩润林
- 关键词：低密度脂蛋白高密度脂蛋白A群链球菌单核细胞
- 铜绿假单胞菌二氢硫辛酸酰胺脱氢酶的重组表达及其与脂蛋白(a)的相互作用被引量：1
- 2017年
- 【目的】二氢硫辛酸酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,旨在研究Lpd与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]以及Plg之间的相互作用。【方法】用大肠杆菌表达rLpd及其突变分子(rLpd K476A、rLpd K477A、rLpdΔKKR),用酶联免疫吸附实验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot等技术检测rLpd及其突变分子与Lp(a)、Plg的相互作用。【结果】ELISA及亲和色谱层析实验结果表明,rLpd可以与Lp(a)结合但不与LDL结合,Lp(a)与rLpdΔKKR的结合能力显著低于其与rLpd的结合能力。1 mmol/L的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)对rLpd与Lp(a)的结合有显著的抑制作用。1 000μg/L的Lp(a)对rLpd与Plg的结合起到显著的抑制作用。【结论】Lpd能够与Lp(a)特异性结合,其476和477两个相邻的赖氨酸残基是与Lp(a)结合的主要位点,Lp(a)可以竞争性地抑制rLpd与Plg的结合。
- 王洋李文龙刘恩王瑜霍苏馨白文成高玉敏韩润林
- 关键词：铜绿假单胞菌纤溶酶原
