王海龙
- 作品数：14 被引量：28H指数：3
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学医药卫生更多>>
- 多杀菌素基因重组的工程菌菌剂
- 本发明涉及多杀菌素基因重组的工程菌。发明采用Red/ET同源重组技术对多杀菌素(Spinosad)全基因进行修饰及插入功能性组件，同时与Bt4.0718菌株的cry1Ac基因重组，分别在发光杆菌(Photorhabdus...
- 夏立秋张友明丁学知孙运军莫湘涛黄璠罗朝辉王海龙
- 文献传递
- 刺糖多孢菌多杀菌素工程菌研究
- 刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)多杀菌素(spinosyns)具有高效,广谱和安全的杀虫特点,给多年来发展缓慢的生物农药的研究带来了崭新的希望。但多杀菌素发酵周期长,产量低成为有待研究解决...
- 夏立秋张友明黄科学丁学知黄璠胡胜标王海龙罗玉双易勇张成全梅芳李文萍
- 文献传递
- 大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF的构建及其应用被引量：2
- 2010年
- 【目的】构建能定点整合到链霉菌（Streptomyces）染色体上的高效表达载体。【方法】以链霉菌自杀型表达载体pLSB2为基础,通过插入链霉菌噬菌体ΦC31整合酶基因int和attP位点（Phage attachment site）,构建了能在大肠杆菌和链霉菌之间进行接合转移并定点整合到链霉菌染色体上的表达载体pMF。将pMF转化大肠杆菌ET12567（pUZ8002）,并分别接合转移天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolorM145）、变铅青链霉菌（Streptomyces lividansTK24）和红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea2338）,挑取接合子进行PCR和Southern杂交检测。将来自刺糖多孢菌S08-4的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（SAM-s）克隆到载体pMF的启动子下游,接合转移到天蓝色链霉菌中。【结果】表明pMF成功整入链霉菌染色体,并且检测到目的蛋白的表达。【结论】构建的pMF载体可作为外源基因定点整合表达的有效工具,为后续的基因功能研究以及链霉菌的遗传改造奠定了基础。
- 全梅芳余凯夏立秋丁学知曾凡军寇笑笑王海龙胡胜标余子全李敬业
- 关键词：链霉菌整合酶
- 通过两种糖多孢菌属菌株原生质体融合提高多杀菌素产量研究被引量：5
- 2019年
- 多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌产生的一种新型绿色环保杀虫剂,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性。本研究通过将红色糖多孢菌和刺糖多孢菌两种菌株做原生质体融合探究来得到高产多杀菌素的菌株。首先构建了不产红霉素的红色糖多孢菌工程菌株,然后将其与刺糖多孢菌做原生质体融合,经加有抗生素平板培养基及发酵液HPLC分析筛选,得到了产多杀菌素的4株融合菌株。基于4株融合菌株多杀菌素产量都不及起始菌株高,接着采用不加抗生素直接筛选的方法,成功筛选到若干高产多杀菌素的融合菌株,其中菌株B-2多杀菌素产量提高最为明显,较原始菌株增加了331%,并用质谱分析做了进一步的验证。融合菌株B-2后续传代培养多杀菌素产量稳定,表明遗传稳定性较好。本文对红色糖多孢菌和刺糖多孢菌原生质体融合进行了探究并且成功提高了多杀菌素的产量,这为具有优良发酵特性的红色糖多孢菌和刺糖多孢菌融合菌株的构建提供了重要基础。
- 易卓夏立秋丁学知胡胜标罗玉双王海龙唐滢黄鑫
- 关键词：多杀菌素生物农药原生质体融合质谱分析
- 高效液相色谱法测定刺糖多胞菌发酵液多杀菌素含量被引量：6
- 2008年
- 为了建立刺糖多胞菌（Saccharopolyspora spinosa）发酵液中多杀菌素不同组分的分离与定量分析的高效液相色谱检测方法.以AQ12S05-1546WT（150×4.6 mmL.D.S-5μm,12 nm）为分析柱,以甲醇-乙腈-2%醋酸铵溶液（45∶45∶10,v/v/v）为流动相,流速1.5 mL/min,检测波长250 nm.结果表明多杀菌素在25-1000 mg/L范围内线性关系良好,本方法标准偏差为1.486 9,变异系数为0.79%,相关系数为0.9992,平均回收率为99.58%.多杀菌素化合物A,B,C,D,E,F的保留时间分别为7.01,3.59,3.21,8.33,5.72,4.81 min.本方法能准确测定刺糖多胞菌发酵液中多杀菌素含量,有效分离多杀菌素不同组分.
- 易勇夏立秋丁学知杨尉王海龙罗玉双
- 关键词：刺糖多孢菌高效液相色谱法多杀菌素
- 新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究被引量：2
- 2007年
- 将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.
- 夏立秋曾智贺小红付祖姣单世平丁学知孙运军李文萍王海龙罗玉双
- 关键词：WESTERNBLOT生物活性测定
- DNA直接克隆的优化和ccdB反向筛选在Red/ET重组工程中的应用
- 对基因组序列进行功能研究，首先需要对目的DNA序列进行克隆。随着DNA测序技术的不断进步，越来越多生物的全基因组被测序，因此人们获得了大量的基因组序列。DNA文库构建和筛选的传统方法，由于耗时和低效率，不利于基因组序列的...
- 王海龙
- 关键词：基因克隆点突变放线菌转座子DNA序列
- 文献传递
- DNA直接克隆修饰新技术研究及其应用
- 本文阐述了Red/ET重组克服了传统方法对限制性酶切位点的依赖，不受DNA分子大小的限制，只要很短的同源臂就能介导高效的同源重组。利用全长的RecE/RecT重组酶介导的同源重组，可以将51kb的PKS/NRPS基因簇直...
- 夏立秋王海龙丁学知
- 关键词：克隆技术次级代谢同源重组
- 文献传递
- 多杀菌素基因重组的工程菌菌剂
- 本发明涉及多杀菌素基因重组的工程菌。发明采用Red/ET同源重组技术对多杀菌素(Spinosad)全基因进行修饰及插入功能性组件，同时与Bt4.0718菌株的crylAc基因重组，分别在发光杆菌(Photorhabdus...
- 夏立秋张友明丁学知孙运军莫湘涛黄璠罗朝辉王海龙
- 文献传递
- 聚酮化合物β-酮酰-ACP合酶的计算机对比分析与组合生物合成
- 2010年
- 为了合理地设计新的聚酮化合物提高组合生物合成的效率,本文使用ClustalW、Mega4.0分析了26种来自不同聚酮合酶的β-酮酰-ACP合酶结构域的序列特征,并用ProtParam、Phdsec、Swiss-Model等工具对其中9种具有不同底物专一性的β-酮酰-ACP合酶的一级结构、二级结构和三级结构及活性位点进行了分析与预测。发现它们结构上的相似性大于序列上的相似性;活性位点都富含丝氨酸;底物含有2个羧酸基团的β-酮酰-ACP合酶的理论pI均小于5.0且其形式电荷总量也偏低;序列V303ELHGTGTPLGDPIEAGA320是这26种β-酮酰-ACP合酶的一段保守序列,但它并不与活性位点相邻。这些研究对进行聚酮合酶的模块或结构域替换以及定点突变具有重要的指导意义,也为探讨其的进化机制提供了参考。
- 唐滢夏立秋王海龙胡胜标余子全孙运军
- 关键词：组合生物合成底物专一性
