王明丽 作品数:35 被引量:59 H指数:5 供职机构: 河南大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 教育部科学技术研究重点项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
新型抗ErbB2、抗CD16三价双特异性抗体的构建及功能鉴定 2008年 目的构建一种新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb。方法构建重组载体pET22b(+)/BsAb;转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组蛋白的表达,通过包涵体复性纯化蛋白。应用悬浮培养系统扩增稳定表达抗人CD16 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(CG5细胞)和稳定表达抗人ErbB2 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(HG2细胞),通过rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析柱纯化融合蛋白,应用流式细胞术分析BsAb的结合能力。结果该BsAb可在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,通过对重组蛋白的复性可获得高纯度的蛋白;复性后的BsAb具有与其亲本抗体相似性的结合靶抗原的能力。结论新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb能与高表达ErbB2的乳腺癌细胞系SKBR3细胞高亲和力结合和表达CD16的人外周血单个核细胞低亲和力结合。 陆寒 解志刚 王明丽 施明 胡美茹 于鸣 马远方 沈倍奋 郭宁关键词:双特异性抗体 ERBB2 CD16 肿瘤免疫治疗 靶向TIPE2基因的shRNA慢病毒载体构建及病毒包装 被引量:1 2014年 目的包装表达TIPE2-shRNA的慢病毒颗粒。方法查询并合成7对针对TIPE2的shRNA序列,将其克隆入pLK0.1载体,经酶切及测序正确后,将构建好的7种pLKO.1-TIPE2-shRNA质粒分别与pCDNA3.1/3×FLAG-TIPE2共转染293T细胞,Western blot鉴定干扰效率并进行后续的病毒包装。结果 4号质粒沉默效果最好,将其与Non-target-shRNA质粒分别进行病毒包装,Western blot和免疫荧光证实病毒具有良好的感染效率和沉默效果。结论 TIPE2-shRNA的慢病毒载体构建及病毒包装成功。 王耀辉 王明丽 陈九格 张晶 马远方关键词:SHRNA 基因 二维电泳和质谱技术鉴定肝细胞癌相关N-连接糖蛋白 被引量:2 2015年 目的鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达N-连接糖蛋白。方法采用刀豆凝集素A(Con A)、晶状体凝集素(LCH)、雪花凝集素(GNA)等3种植物凝集素组成的亲和层析柱,分别从肝永生化细胞系L02和HCC细胞系Huh7、PLC5、SNU449中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱、生物信息学等技术鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证了转录调控肿瘤蛋白(TCTP)、上皮细胞黏附分子(Ep CAM)和膜联蛋白A2(annexin A2)在肝永生化及HCC细胞和HCC及癌旁组织中的表达规律,体外侵袭实验检测TCTP沉默后对SNU449的侵袭力影响。结果质谱、生物信息学等技术共鉴定出42个差异表达的蛋白质分子/异质体(HCC细胞中高、低表达的蛋白/异质体分别为14个、28个),代表32个蛋白质分子,其中的22个蛋白含有至少1个N糖基化位点(Net NGlyc 1.0预测)。这些差异表达的蛋白主要参与氧化还原内稳态维系、碳水化合物/能量代谢、糖酵解、抗凋亡等生物学过程。Western blotting检测表明,TCTP、Ep CAM和annexin A2在6个肝癌细胞系PLC5、Hep G2、SNU449、Huh7、HCC7721和SNU473及肝癌组织中表达显著升高,siRNA介导的TCTP沉默明显抑制了HCC细胞系SNU449的体外侵袭能力。结论 TCTP、Ep CAM和annexin可能参与了HCC发生发展过程,TCTP可能成为HCC靶向治疗的分子靶点之一。 王明丽 韩大正 晁玮霞 刘瑞敏 赵云岗 张天 齐义军关键词:肝细胞癌 植物凝集素 质谱 二维电泳 小鼠MEF/Hsf1^(-/-)/Hsf1细胞系的重建及Hsf1,SV40T-ag蛋白的表达 2014年 目的:重建热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)过表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系,为进一步研究Hsf1的功能提供实验模型。方法:将携带Hsf1全长基因的逆转录病毒载体pWZL-blast-flag-Hsf1,通过瞬时转染的方法,转染产生病毒的小鼠包装细胞293Phoenix。用病毒上清直接感染MEF/Hsf1-/-细胞,建立Hsf1稳定表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系。通过Western blot实验,检测Hsf1和SV40T抗原(T-antigen,T-ag)蛋白的表达。结果:Hsf1蛋白在MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞中的表达比WT/MEF细胞强,而在MEF/Hsf1-/-细胞中没有明显表达。SV40T-ag蛋白在MEF/Hsf1-/-细胞中的表达明显比WT/MEF细胞和MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞强,而SV40T-ag蛋白在WT/MEF细胞中的表达强于MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞。结论:成功建立了MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系;Hsf1参与了对SV40T-ag蛋白的表达调控。 蒋杞英 张智 胡延忠 王明丽 马远方关键词:热休克转录因子1 SV40T抗原 逆转录病毒载体 小鼠胚胎成纤维细胞 大鼠心肌细胞自噬H9C2/GFP-LC3稳定株的构建 2016年 摘要目的:在大鼠心肌细胞H9C2(2—1)中建立表达绿色荧光蛋白融合微管相关蛋白3(GFP-LC3)的稳定细胞株,为研究心肌细胞自噬提供合适的细胞模型。方法:将表达增强的绿色荧光蛋白融合微管相关蛋白3的质粒(pEGFP-LC3)瞬时转染人胚肾一293T细胞(HEk293T),通过荧光观察和免疫印迹对质粒进行鉴定;将质粒用同样的方法转染H9C2(2-1)细胞,G418筛选出稳定表达GFP-LC3的细胞株,通过观察荧光和免疫印迹检测GFP-LC3在H9C2中的表达;稳定细胞株在缺氧1h复氧0、6、12、48h和60h的模型中,荧光显微镜观察GFP在细胞质中的表达,免疫印迹检测内源性LC3的变化;确定荧光及内源性LC3的高表达时相,用3-甲基腺嘌呤(3MA)进行自噬抑制后观察荧光及内源性LC3蛋白表达情况。结果:荧光观察和免疫印迹检测到GFP-LC3在H9C2中的表达,成功建立了表达GFP-LC3的H9C2稳定株;筛选出荧光及内源性LC3的高表达时相为缺氧1h复氧48h,在此模型中,GFP-LC3在细胞质中聚集成点状,内源性LC3表达显著升高,细胞经3MA处理后点状聚集减少,内源性LC3表达减弱。结论:成功建立了过表达GFP-LC3的H9C2稳定株,该细胞株为研究心肌细胞自噬奠定了基础。 王明丽 祝伟娜 樊梦雅 刘璋楠 王耀辉关键词:绿色荧光蛋白 异种蛋白联合重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子和卡介苗免疫调节效应的体外研究 2008年 本研究探讨异种蛋白neu-Fc协同重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及卡介苗(BCG)对Th1型和Th2型免疫应答的调节作用。通过基因工程技术将大鼠neu L2-S2功能域与人IgG Fc区编码序列融合,构建真核表达载体。在CHO细胞中获得稳定表达,应用rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析纯化neu-Fc融合蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白。Ficoll法分离人外周血单个核细胞(PBMNC),MTT法检测融合蛋白对PBMNC的促增殖作用。通过ELISA法检测IL-12和IL-10水平的变化。结果表明:PBMNC经MCF-7细胞上清诱导后,IL-12水平降低(p<0.05),IL-10水平显著升高(p<0.01)。10nmol/L neu-Fc对PBMNC具有显著的促增殖作用。与GM-CSF、BCG或者neu-Fc单独作用相比,neu-Fc与GM-CSF、BCG联合作用可显著上调IL-12表达,下调IL-10表达(p<0.01)。结论:neu-Fc具有很好的促增殖作用,GM-CSF和BCG协同neu-Fc能有效诱导Th1型细胞应答。 王明丽 解志刚 陆寒 施明 胡美茹 于鸣 马远方 沈倍奋 郭宁关键词:卡介苗 IL-12 幽门螺杆菌感染与原发性开角型青光眼的关系 被引量:3 2012年 目的探讨幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染与原发性开角型青光眼(primary-open angle glaucoma,PO-AG)之间的关系。方法收集在眼科门诊就诊的37例POAG患者(观察组)血清标本,同时收集来自门诊的34例健康志愿者(对照组)血清标本。采用酶联免疫吸附试验检测观察组和对照组血清Hp特异性免疫球蛋白抗体G(Hp CagA-IgG)的表达情况。结果观察组Hp CagA-IgG阳性率高于对照组(P<0.01)。结论 Hp感染可能增加患POAG的几率。 彭波 王明丽 张千帆 范永琦关键词:幽门螺杆菌 原发性开角型青光眼 XRCC1基因多态性与年龄相关性白内障的风险性关联分析 2012年 目的检测X射线交错互补修复基因1(XRCC1)Argl94Trp位点基因单核苷酸多态性与我国河南省汉族人群年龄相关性白内障的遗传易感性关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对90例年龄相关性白内障患者(病例组)和60例健康人群(对照组)进行基因型分析。结果 XRCC1(Argl94Trp)位点基因多态性在河南省汉族群体中的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。XRCC1(Argl94Trp)位点变异等位基因Trp在病例组及对照组的频率分别为29.4%和32.5%,差别无统计学意义(P>0.05)。Arg/Trp及Trp/Trp基因型在病例组与对照组中的基因型频率分别是38.9%、38.3%和10.0%、13.3%,差别均无统计学意义(P>0.05),提示Trp/Trp和Arg/Trp基因型均不增加年龄相关性白内障的发病风险。结论 XRCC1(Argl94Trp)位点基因多态性与我国河南省汉族人群年龄相关性白内障的发病风险无相关性。 张千帆 王明丽 彭波 孟凡毅关键词:X线修复交叉互补基因1 基因多态性 年龄相关性白内障 系统解剖学以授课为基础和以问题为基础的教学方法比较 被引量:6 2014年 为了改变以教师为中心的“凯洛夫”式封闭教学框架,更好地调动医学生的学习积极性,培养其创造与开拓能力,许多医学院校教师对传统的以授课为基础(lecture-based learning,LBL)的教学方法进行了大胆的改革与实践,肯定由美国神经学教授Barrow于1969在加拿大McMaster大学创立的以问题为基础(problembased learning,PBL)的启发式教学法[1].然而对不同专业的学生,不同的授课方法,对学生的教学效果是否都是如此?为此,2年以来,我们连续以临床医学专业和临床心理学专业的本科学生为研究对象,分别使用PBL教学法与LBL教学法在不同专业、不同章节对同层次的班级间进行系统解剖学理论教学实验性对比研究,为本课程教学过程中改进教学方法提供参考. 王明丽 林波 程相树关键词:系统解剖学 授课方法 启发式教学法 临床医学专业 LBL教学法 PBL教学法 大鼠多次采血常用的三种方法探讨 被引量:15 2013年 目的探讨大鼠在1天内或者短时间内需要多次采血常用的三种方法,提高大鼠实验的成功率。方法采用90只雄性Wistar大鼠,分别用眼眶后静脉采血法、颈静脉采血法及心脏穿刺采血法进行采血实验。结果眼眶后静脉采血法:采血0.2—0.3 mL/次,每只大鼠3—4次/d。颈静脉采血法:采血0.2—0.4 mL/次,每只大鼠6—8次/d。心脏穿刺采血法:采血0.3—0.4 mL,每只大鼠3—5次/d。结论三种采血方法取血量相对比较大,血液标本质量高,更利于大鼠的动物实验,但各有应注意的事项。 王明丽 张晶 王耀辉 李淑莲 马远方关键词:采血方法