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王启松: 作品数：41 被引量：116H指数：6; 供职机构：复旦大学更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划美国国立卫生研究院基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

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人表皮生长因子基因的化学合成和克隆及其在酵母中的表达被引量：5: 1991年; 用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因,全长为173个核苷酸,它被分成8个寡核苷酸,分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接,然后被克隆到噬菌体M13mp18中,克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测,证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载体YFD59 HindⅢ位点中,建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFD104,再将此质粒转化酿酒酵母,所得转化子经摇瓶发酵、发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。; 袁汉英闵永洁石松陶无凡吴声积李育阳王启松吕慧梅张承圭胡倩; 关键词：表皮生长因子基因化学合成克隆

人工合成人恶性疟原虫58肽抗原基因在大肠杆菌中的表达被引量：3: 1991年; 使用DNA合成仪合成的人恶性疟原虫58肽抗原基因,与大肠杆菌表达性载体质粒PWR450—Ⅰ重组,转化到大肠杆菌JM83中。用斑点杂交技术和电泳分析DNA方法筛选出阳性重组转化菌株,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳分析,证明合成基因在大肠杆菌中表达,产生与β—半乳糖苷酶融合的多肽。; 马维芳金福军钟雄林陈仕荣王昌才王启松闵永洁; 关键词：DNA合成恶性疟原虫抗原基因

化学合成的人α-心房肽基因在SUC2启动子-信号顺序控制下的表达: 1989年; 本文报道将化学合成的人α-心房肽(α-hANP)基因与酵母分泌型表达载体YFD6A21重组,使α-hANP基因在蔗糖酶基因(SUC2)启动子-信号顺序指导下,在酵母菌中合成和分泌有活性的α-hANP。放射免疫分析表明:α-hANP基因只有在葡萄糖去阻遏条件下才能得到表达,而且其表达量与细胞浓度成正比。此外,95%以上表达产物被分泌到培养液中。; 秦宁李育阳杨迪王启松; 关键词：心房肽基因表达

恶性疟原虫杂合抗原基因的表达及其产物免疫功能的研究被引量：4: 1997年; 化学合成的人恶性疟原虫杂合多肽抗原 AB 基因,编码子孢子 CSP重复序列 NANP、CSPTh2R和红内期spf35.1、spf83.1、spf55.1、spf83.18、pf155/RESA-5’端重复区共7个不同免疫功能表位,与大肠杆菌质粒pWR450-1重组,构建成pWR450-1/AB表达载体。在乳糖操纵子调控下以β-半乳糖苷酶-恶性疟原虫杂合多肽抗原融合蛋白形式,在大肠杆菌中高效表达。表达产物经SDS-PAGE电泳分离纯化后,加福氏佐剂免疫家兔,诱导产生较高滴度的抗血清。抗血清对人恶性疟原虫体外生长有明显的抑制作用,24h抑制率为65.92％;72h的抑制率为72.63％。对照血清无抑制作用。分离纯化的表达产物能与鼠抗恶性疟原虫和疟疾患者抗血清起免疫反应。这些结果表明合成基因的表达产物具有较好的免疫原性。; 王昌才钟雄林陈仕荣胡亚芳马维芳王启松闵永洁; 关键词：恶性疟原虫抗原

高含量人体必需氨基酸基因的化学全合成被引量：5: 1990年; 采用固相亚磷酰胺法合成了编码高含量人体必需氨基酸蛋白质的基因。该基因有300个碱基对,共编码94个氨基酸,其中92%以上为人体必需氨基酸。从该基因的两个方向均可被翻译成具有人体必需氨基酸的蛋白质。该基因选用了植物所偏爱的密码子,并间隔地插入了编码赖氨酸的密码子,使之所编码的蛋白质可被胰蛋白酶消化。; 张晓东杨迪汪训明闵永洁谢毅王鄂生王启松; 关键词：氨基酸基因

半合成人肿瘤坏死因子cDNA的构建及其在大肠杆菌中的高表达被引量：4: 1991年; 本文报道从人基因文库中分离淋巴毒素(LT)基因的同时,克隆了肿瘤坏死因子(TNF)基因,这两个基因相距1.2kb.TNF基因有4个外显子,第4外显子编码TNF成熟蛋白157个氨基酸中的140个.将第4外显子切出一部分,再人工合成编码其余氨基酸的DNA片段,两者连接构成重组的人TNF(rhTNF)cDNA,并克隆在大肠杆菌表达载体中成功地得到表达.5 l罐发酵得菌体约20g/l,以L929为靶细胞测定细胞毒活性为10~6-10~7单位/ml.高压液相色谱仪分离纯化rhTNF,冻干后得白色粉剂.测定了这种rhTNF的氨基端的10个氨基酸序列,证明与天然的人TNF完全相同.纯度约为95％.; 李昌本柴常星谢毅吕群柴建华喻红陈春妹林丽珠王启松李宗林周娅李育阳赵寿元; 关键词：半合成 CDNA; 全文增补中

人心钠素的蛋白质工程研究——Ⅰ.一种人心钠素衍生物RH-1的基因合成及克隆表达被引量：2: 1990年; 在心钠素结构改造的蛋白质工程研究中,本工作首次提出以“分子嵌合法”构建心钠素衍生物的设计思想,并设计了系列心钠素衍生物RH-1、RH-2和RH-3。为阻止羧肽酶对心钠素的降解,羧肽酶抑制剂SQ20881被串联于α-bANP的N端,二个脯氨酸被串联于C端,从而形成杂合的心钠素衍生物分子RH-1,衍生物RH-2仅在α-hANP的N端嵌合SQ20881,衍生物RH-3则只在α-hANP的C端嵌合二个脯氨酸。用DNA合成仪合成RH-1基因的全部10个片段,经纯化拼接成全基因,并经核苷酸序列分析得以确认。克隆RH-1基因于表达性载体pLSD-13,构成pRHL-1重组体,并经限制性内切酶分析和Southern杂交证明了RH-1基因的正确插入。用大肠杆菌N6405菌株表达该基因,SDS/PAGE分析证实了衍生物RH-1基因的表达。凝胶扫描表明,表达蛋白量约占细胞可溶性蛋白的11％。; 任皓卢圣栋王启松闵永洁翁绳周; 关键词：蛋白质工程心钠素

人α-心房肽基因的化学合成及其在酵母系统中的克隆和表达: 1990年; 按酵母密码系统化学合成人α-心房肽。为得到人α-心房肽基因的正确表达,少数碱基已按酵母简并密码予以替换,但在DNA序列互补的另一链的相应位点上的密码则未作相应的替换,故在局部上出现了不配对的格局。该基因已被克隆入带有α-factor外分泌型启动子的穿梭质粒pCLWA_2,含有编码人α-心房肽不同DNA序列的重组体已用Bg1 Ⅱ的限制性分析加以区别。比较两种基因所表达的人α-心房肽水平表明:含有酵母简并密码的基因所表达的人α-心房肽水平(0.5～0.7mg/L)低于按天然DNA序列合成的基因所表达的人α-心房肽水平(0.8～1mg/L)。; 林哈娜张福徽卢圣栋王年门建华朱虹雷勋兰屈金河王启松施文闵永洁; 关键词：基因合成酵母

人α-心钠素全基因的化学合成被引量：4: 1989年; 用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、基因3＇端的终止信号TGA及基因两端的接头部分。基因分7个寡聚核苷酸片段在DNA合成仪上合成,然后一次性酶促连接成为完整的α—hANP双链基因。化学合成的基因克隆到M13载体上,经分子杂交鉴定筛选出的α-hANP基因克隆株,用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。; 杨迪闵永洁施文王启松; 关键词：心钠素化学合成基因

新型小肽疫苗的设计——Ⅰ.多联体生长激素释放抑制因子基因的化学合成、克隆与表达被引量：1: 1992年; 小分子多肽制备抗体效率很低。我们设计了一种新的制备小肽疫苗的方法——小肽自连疫苗。这种新疫苗无需用其它蛋白质作载体,因此纯度高,单一性强,无其它杂抗原。尤其在需要进行自身免疫时这种疫苗效率较高。根据这种设计,我们合成并克隆了一个多联的生长激素释放抑制因子的基因,经过筛选、鉴定,得到了一个最大为六联体的生长激素释放抑制因子基因。该基因放到大肠杆菌中表达,并做Western检测,得到六联体生长激素释放抑制因子的表达菌株,该菌株的表达产物能与生长激素释放抑制因子的抗体发生免疫反应。; 张鹰袁汉英杨宝华王启松; 关键词：免疫基因工程

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