潘志美
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市科委科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 聚合酶链反应法扩增免疫球蛋白变区基因
- 1993年
- 用异硫氰酸胍抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞株2F7的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出351 bp的重链变区基因(V_H)和324bp轻链变区基因(V_L),分别克隆至pUCV_(NP)-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的变区基因.
- 刘健王斌潘志美田培坤张文祥
- 关键词：聚合酶链反应免疫球蛋白杂交瘤
- 人─鼠抗人小细胞肺癌嵌合重链基因在小鼠骨髓瘤细胞中的表达
- 1994年
- 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法获得小鼠抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因（ｃＤＮＡ），构建成含人──鼠抗人小细胞肺癌嵌合重链基因质粒（ｐＳＶ＿２△Ｈｇｐｔ２Ｆ＿７Ｖ＿ＨＨｕγ＿３）ＤＮＡ通过电脉冲介导基因转移的方法，转染小鼠骨髓瘤细胞Ｊ５５８Ｌ，并经选择培养基筛选出含有构建质粒基因的克隆，进一步按ＥＬＩＳＡ方法测定细胞表面和培养上清液中嵌合重链抗体的表达效率，最终选出表达抗体效率较高的单克隆细胞株为５Ｃ＿２，１２Ｂ＿９，２９Ｃ＿６。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测证明，阳性克隆细胞总ＲＮＡ经电泳后在１８Ｓ附近处与鼠抗人小细胞肺癌单抗的重链变区ｃＤＮＡ探针有明显的阳性杂交带出现。细胞抽提蛋白经ＳＤＳ──ＰＡＧＥ电泳分离显示在正常人ＩｇＧ重链分子相当的位置有一清晰条带出现，分子量约为５８ＫＤ，免疫印迹方法同样检测出此条带特异他与兔抗人ＩｇＧ（重链特异）抗体反应，证实人──鼠抗人小细胞肺癌嵌合重链基因在小鼠骨髓癌细胞中表达成功。
- 郭虹汾刘健潘志美王斌田培坤李斯德
- 关键词：嵌合抗体基因转移肺肿瘤
- CRLP与DNA修复相关性的初步研究被引量：2
- 2003年
- 目的探讨细胞经紫外处理后CRLP与DNA修复的相关性。方法将插入反义CRLP的pcDNA3.1/V5-His质粒用脂质体介导法转染BEL7402肝癌细胞,G418筛选获得的细胞用15J/m2的紫外作用,4h后用Annexin V—EGFP试剂处理细胞,荧光激活细胞分选法测定细胞凋亡比例。另外用RT-PCR和Northern杂交的方法检测了肿瘤细胞株和多组织中的CRLP的表达。结果转染反义CRLP质粒的细胞株经紫外处理后,统计学处理表明凋亡比率显著高于对照;该基因在所检测的肿瘤细胞株和各类组织中均有表达。结论CRLP基因的表达受到抑制以后可能通过影响细胞DNA修复能力降低细胞抗紫外杀伤的能力。
- 汪朝晖覃文新潘志美万大方顾健人
- 关键词：DNA修复肿瘤细胞
- 抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因的体外扩增、克隆和序列分析被引量：2
- 1993年
- 本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。
- 刘健吴文书王斌潘志美田培坤黄震宇洪锦心
- 关键词：聚合酶链反应嵌合抗体
- 一种简便的适用于特异扩增单抗可变区基因的杂交瘤细胞的RNA制备方法
- 1993年
- 在分子生物学实验中,欲合成cDNA必先制备高纯度、未降解的RNA。目前较为常用的有氯化铯超速离心,但因该法操作时间长需要昂贵的实验试剂和设备,给实验带来较大的不便。
- 刘健潘志美王斌洪锦心
- 关键词：杂交瘤细胞株RNA
- 建立Ig基因富集的DNA库进行2F7单克隆抗体基因克隆
- 1990年
- 用小鼠型抗人小细胞肺癌单克隆抗体的2F7杂交瘤细胞DNA,经限制性内切酶EcoRI或BamHI完全酶解,通过Southern blot,用小鼠Ig基因Cr_(2a)、V_(H)、J_(H)和E_(H)作探针,富集阳性DNA,同时用pSV_2neo质粒为载体与这些DNA重组,经筛选获得了一批杂交阳性的克隆。
- 郭婵潘志美刘健洪锦心
- 关键词：免疫球蛋白单克隆抗体
- 一个新基因的两种剪接体在人肺癌细胞中不同功能的研究
- 何祥火万大方顾健人潘志美姚明魏霖李锦军张萍萍贺丽苹俞晔
- 本研究列入国家重点基础研究发展规划(973)(G1998050209)和国家高技术研究发展计划(863)(2005BA711A01)。 研究时间：2000年～2006年 本研究以我国高发肿瘤之一肺癌为材料，用电子克隆...
- 关键词：
- 关键词：人肺癌信号转导
- 正常小牛胸腺核糖核酸对TK-成纤维细胞的作用被引量：1
- 1983年
- L-M(TK-)细胞是小鼠成纤维细胞在含有5-溴脱氧脲嘧啶核苷的培液中,经90周的培养后,获得的对抗BudR的细胞株。它的特点是胸腺嘧啶核苷激酶活力的缺失。
- 郭婵唐继昌洪伟娜潘志美顾健人
- 关键词：小牛胸腺核糖核酸TK胸腺组织纤维细胞
- 用基因定点突变技术改建—免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体被引量：2
- 1991年
- 本文介绍了一种简便的、具有高突变率的基因定点突变方法。应用Bio-Rad Muta-Gene Phagemid Kit,在一装有表达载体上的抗NP(4-hydroxyl-3-nitrophenacetyl)免疫球蛋白重链可变区基因的J_a区引进BstE Ⅱ酶切位点,从而改建成一种能用于表达免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体。应用该Kit,基因定点突变率达43％。
- 刘健陈宏蔚潘志美吴文书洪锦心
- 关键词：免疫球蛋白基因定点突变
- 肝细胞肝癌相关新基因FP248的功能研究被引量：3
- 2005年
- 目的 FP248基因是本实验室通过高通量基因功能筛选得到的一个与细胞生长相关的新基因,本研究旨在研究其在肝癌发生发展中的作用。方法 用Northern blot,Southern blot方法检测FP248 在肝癌及其癌旁组织中mRNA表达差异和DNA的变化。通过体外细胞转染和体内裸小鼠成瘤实验观察FP248 对肝癌细胞SMMC 7721 生长的作用,并用Atlas Hu- man cDNA Expression Array探讨FP248影响肝癌细胞SMMC 7721的作用机理。结果 FP248的mRNA在57%(4/7)的肝癌中表达高于其相应的癌旁组织,而且肝癌组织中DNA有扩增。FP248 的过表达在体内外均可明显促进SMMC- 7721 细胞的生长。Atlas结果显示FP248过量表达后可上调许多与细胞生长密切相关的基因,同时还参与调节细胞粘附分子。结论 基因FP248与肝癌的发生发展有密切关系,是一个与人肝癌发生发展相关的新基因。
- 杨付叶潘志美周筱梅李宏年张萍萍李锦军姚明万大方顾健人
- 关键词：肝细胞基因基因表达SMMC-7721细胞小鼠
