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步雪峰: 作品数：67 被引量：173H指数：6; 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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Hsa_circ_0003449在人胃癌中表达及对胃癌细胞增殖和迁移作用被引量：1: 2022年; 环状RNA是一种特殊的非编码RNA,在肿瘤发生发展中起着重要作用。通过高通量测序技术对5对确认为癌组织及癌旁正常组织进行检测,分析筛选出差异性环状RNA hsa_circ_0003449,通过qRT-PCR进行验证后,使用siRNA进行基因敲减,利用细胞克隆试验、平板划痕试验及transwell试验等检测胃癌细胞功能的改变,通过生物信息网站预测基因靶点TP73蛋白,敲减hsa_circ_0003449后检测蛋白质水平上的改变。结果表明:在人胃癌组织中,hsa_circ_0003449表达水平明显高于癌旁正常组织;在胃癌患者血清中,hsa_circ_0003449表达水平也高于健康体检者血清中表达水平;在胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823、HGC-27、MGC-803)中,hsa_circ_0003449表达水平均高于正常人胃黏膜上皮细胞株(GES-1)。在人胃癌细胞株中通过siRNA对hsa_circ_0003449的敲减引起肿瘤增殖及迁移能力下降。同时胃癌细胞株中hsa_circ_0003449的敲减会引起靶点TP73蛋白的表达水平下降。这一研究成功验证了hsa_circ_0003449在胃癌中高表达,且敲减hsa_circ_0003449后可抑制人胃癌细胞增殖、迁移等能力,为进一步探究hsa_circ_0003449成为胃癌早期诊断标志物和治疗靶点提供了理论基础。; 蔡烨伟王灵霞袁海涛曹碧月周晓东张垚步雪峰; 关键词：胃癌细胞增殖细胞迁移

rL-IL29对肺腺癌A549细胞生物学特性的影响及相关机制被引量：1: 2018年; 目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒LoSota株(recombinant Newcastle disease virus LoSota line expressing IL-29,rL-IL29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,以rL-IL29感染的A549细胞为rL-IL29组,LoSota株新城疫病毒(NDVL)感染的A549细胞为NDVL组及PBS处理的A549细胞为对照组。蛋白质印迹法检测各组A549细胞中NDV HN、IL-29蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell侵袭实验检测rL-IL29对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞E-钙黏蛋白、MMP2、波形蛋白及AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果:A549细胞感染rL-IL29后,NDV HN及IL-29蛋白均稳定表达,且明显高于NDVL组及对照组;rL-IL29及NDVL感染A549细胞后能够抑制细胞的增殖、迁移及侵袭,且rL-IL29作用更强;与对照组及NDVL组比较,rL-IL29感染后A549细胞中E-钙黏蛋白表达量明显增加,波形蛋白、MMP2(66 kDa/72 kDa)、p-AKT及P65蛋白表达明显减弱(均P<0.05)。结论:rL-IL29可能通过阻碍AKT/NF-κB信号通路上调E-钙黏蛋白表达和下调波形蛋白、MMP2蛋白表达,从而抑制肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移。; 杭敏严玉兰邵小美张日婷步雪峰; 关键词：重组新城疫病毒肺腺癌迁移

鼠IFN—λ2 CHO细胞系建立及生物学活性的研究被引量：3: 2010年; 目的稳定表达鼠IFN—λ2并对其生物学活性进行研究。方法用水疱口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）刺激小鼠脾脏细胞，克隆mIFN—λ2全长基因，构建真核表达载体PCAGG-EGFP-mIFN-λ2，并在CHO细胞稳定表达，且在小鼠黑色素瘤B16细胞上进行抗病毒活性测定；构建MDBK-Mxp—Luc细胞系诱导Mx1抗病毒蛋白产生。结果pMD18-T-mIFN—λ2双酶切鉴定，出现582bp大小的条带，成功构建了PCAGG—EGFP—mIFN—λ2真核表达载体；稳定表达mIFN—λ2 CHO的细胞株分泌的上清中mIFN-λ2蛋白在B16细胞上的抗病毒活性为10^4AU／ml；mIFN-λ2蛋白诱导鼠Mx1抗病毒蛋白的表达，9～12h达高峰，24h后消失（P〈0．05）。结论建立了稳定表达mIFN—λ2的CHO细胞株，其分泌型mIFN—λ2蛋白具有明显的抗病毒活性。; 严玉兰袁利学刘洋曹文雁步雪峰步志高郑金旭; 关键词：抗病毒活性

股浅静脉缩窄术治疗6例原发性深静脉瓣膜功能不全: 2000年; 陶曙步雪峰高一峰; 关键词：深静脉瓣膜功能不全

人IFN-λ1重组腺病毒对胃癌细胞增殖的影响及其机制研究被引量：1: 2013年; 目的探讨Ad-hIFN-λ1重组腺病毒对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响及其机制。方法分别用Ad-hIFN-λ1重组腺病毒、Ad-LacZ空质粒及PBS对照组作用于人胃腺癌细胞SGC-7901，MTT法测定细胞增殖情况，RT-PCR检测胃癌SGC-7901中IFN-λ1mRNA的表达，免疫荧光法检测hIFN-λ1蛋白的表达，Tunel、流式细胞术检测细胞凋亡。结果Ad-hIFN-λ1转染胃腺癌细胞SGC-7901后，肿瘤细胞生长明显抑制，细胞中hIFN-λ1 mRNA、蛋白高效表达，细胞凋亡率明显高于Ad-LacZ组、PBS空白对照组。结论Ad-hIFN-λ1重组腺病毒转染至胃腺癌细胞SGC-7901后表达IFN-λ1，Ad-hIFN-λ1能够显著抑制人胃腺癌SGC-7901细胞生长，并可能通过诱导其凋亡而起作用。; 刘峻严玉兰张金刘洋张杰梁冰步雪峰; 关键词：胃癌重组病毒凋亡

重组新城疫病毒rL-RVG诱导人胃腺癌细胞内质网应激和凋亡被引量：1: 2016年; 目的:观察新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV La Sota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法:将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate,4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4-PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4-PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rLRVG组明显降低(P<0.05)。结论:rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。; 赵英海严玉兰李米王穆彬步雪峰; 关键词：新城疫病毒狂犬病毒糖蛋白内质网应激

重组新城疫病毒rL-IL29促进人小细胞肺癌细胞系H446内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达被引量：1: 2018年; 目的探讨重组新城疫病毒rL-IL29对小细胞肺癌细胞系H446细胞内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白表达的影响。方法将H446细胞随机分为对照组、新城疫病毒(NDV)组及rL-IL29组,后2组分别转染NDV和rL-IL29。CCK-8法检测细胞活性;ELISA检测细胞上清中IL-29含量;Western blot和免疫荧光检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达。并分别加入内质网应激抑制剂4-PBA预处理4 h,Western blot检测处理组及对照组GRP78、CHOP、自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达。结果感染H446细胞后,随着病毒浓度的升高,细胞活力明显降低,其中rL-IL29在10-5升高明显(P<0.05)。rL-IL29处理组细胞上清中IL-29含量明显升高(P<0.05),rL-IL29组IL-29蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。NDV组、rL-IL29组中GRP78及CHOP表达明显升高(P<0.05),LC3Ⅰ/Ⅱ、cleaved-caspase-3表达明显高于对照组(P<0.01),且rL-IL29组明显高于NDV组(P<0.05)。4-PBA预处理后,4-PBA组GRP78、CHOP、cleaved-caspase-3以及LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 rL-IL29能促进人小细胞肺癌细胞内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达。; 严玉兰邵小美刘沙杭敏尹超云张日婷步雪峰; 关键词：小细胞肺癌内质网应激自噬凋亡

重组新城疫病毒rl-RVG抑制A549荷瘤鼠的瘤体生长被引量：1: 2014年; 目的探讨稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒疫苗对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的生长抑制及其可能促凋亡机制。方法将rl-RVG感染到成功建立的A549荷瘤鼠瘤体内,检测对瘤体生长抑制率;RT-PCR检测NDV HN基因及RVG基因的表达;TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡;蛋白印迹法测caspase系列、Bax、Bcl-2表达;NDV及PBS作为对照。结果与对照组相比,rl-RVG组荷瘤鼠瘤体增长明显缓慢;RVG及NDV基因表达;rl-RVG组肿瘤细胞凋亡明显增加(P<0.05);rl-RVG组caspase-3,8和9高表达(P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显高于对照组(P<0.01)。结论 rl-RVG成功感染至A549荷瘤鼠,其对A549荷瘤鼠瘤体生长有着明显的抑制作用,且可能与rl-RVG激活机体的Bcl-2和caspase家族诱导凋亡相关。; 严玉兰贾丽娟刘洋张金张杰梁冰步雪峰; 关键词：凋亡

干细胞标志物Nanog的检测在胃癌诊断中的意义被引量：32: 2009年; 目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达阳性率分别为58.1%(36/62)、9.7%(6/62),差异有统计学意义(P<0.0001);Real-timePCR结果表明胃癌组织中Nanog相对表达水平高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Nanog阳性表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论Nanog表达与胃癌的发生及其分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志。; 陈忠许文荣钱晖朱伟王胜步雪峰毛飞曹慧玲徐学静; 关键词：胃癌 NANOG PCR 肿瘤干细胞

不同年龄人群肌肉组织中7种线粒体酶的表达差异被引量：2: 2014年; 目的:探讨年轻人与中老年人肌肉中线粒体电子传递链和胞质中一些关键酶的表达差异。方法:收集7例年轻人及33例中老年人颈部肌肉标本,透射电镜观察两组肌肉中线粒体形态学变化,免疫组织化学染色和蛋白质印迹检测NADH氧化还原酶辅酶1[NADH dehydrogenase(ubiquinone)1 alpha subcomplex 1,NDUFA1],琥珀酸脱氢酶复合体铁硫亚基(succinate dehydrogenase complex,subunit B,SDHB),细胞色素b(cytochrome b,Cytb),细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX),V型H+ATP酶(vacuolar-type H+-ATPase,V-ATPase H),苹果酸脱氢酶(cytosolic malate dehydrogenase,MDH)、短链羟烷基-辅酶A脱氢酶(hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase,HADHSC)的表达情况。结果:与年轻人相比,中老年人肌肉中线粒体体积增大,空泡增多,嵴排列紊乱,出现类结晶状包涵体;NDUFA1、SDHB、Cytb、COX、V-ATPase H表达量明显降低(P均<0.05),但MDH及HADHSC的表达差异无统计学意义;蛋白质印迹结果与免疫组织化学结果相一致。结论:肌肉组织中线粒体的形态和关键酶的表达随年龄的增加出现明显改变,可能在衰老过程中起到重要作用。; Rukhsar Ahmad蒋鹏程顾韵刘嫣方陈芹步雪峰谢黎林志强钱炜; 关键词：衰老肌肉线粒体

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