李陪
- 作品数：3 被引量：8H指数：3
- 供职机构：天津师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNaseⅢ制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库构建及优势分析被引量：4
- 2013年
- 目的建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库，并探讨这种新型siRNA制备方法的优势。方法制备502bp的KIF4A基因组序列作为转录模板；体外转录获得双链RNA；用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白（GST-RNaseⅢ）酶切双链RNA，制备KIF4AesiRNA文库；应用KIF4AesiRNA和化学合成的KIF4AsiRNA转染胃癌细胞株SGC-7901，应用Q-RTPCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平。结果利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4AesiRNA文库，该文库可有效抑制SGC．7901细胞内的KIF4A表达，且抑制效果明显优于化学合成的KIF4AsiRNA。结论用生物学方法制备的KIF4AesiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达，且抑制效果优于化学合成的siRNA。
- 李陪董智雄朱长军刘海燕
- 关键词：RNA干扰
- 染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
- 钟铠泽赵健李陪陈蔚文朱长军董智雄
- 关键词：有丝分裂小分子干扰RNA胃癌细胞
- 染色体驱动蛋白KIF4A对胃癌细胞迁移和转移的影响被引量：4
- 2013年
- 目的前期的研究证实,染色体驱动蛋白KIF4A在胃癌组织中低表达,过表达KIF4A抑制了胃癌细胞的增殖。本研究进一步研究KIF4A与胃癌细胞迁移与转移的关系,从而为胃癌临床治疗提供新的治疗靶点。方法应用组织芯片和免疫荧光染色技术研究胃癌及其周围淋巴结组织中KIF4A蛋白分子的表达差异性;利用细胞小分子RNA干扰和Transwell迁移实验,检测KIF4A对细胞迁移运动能力的影响。结果 65%(26/40)的胃癌组织中KIF4A蛋白分子表达水平低于周围的淋巴结组织;KIF4A的表达水平与胃癌组织的TNM分期密切相关;KIF4A蛋白分子的表达随胃癌转移侵袭能力的增强而降低;抑制胃癌细胞内KIF4A蛋白分子的表达明显增强胃癌细胞的迁移运动能力。结论染色体驱动蛋白分子KIF4A通过抑制胃癌细胞的迁移运动能力参与控制胃癌的临床转移过程。
- 刘海燕李陪高辉朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白胃肿瘤迁移
