李玲燕
- 作品数：6 被引量：11H指数：1
- 供职机构：浙江大学动物科学学院农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达被引量：11
- 2006年
- 为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR 和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。
- 蔡月琴叶菊秀李玲燕周继勇
- 关键词：狂犬病病毒
- 传染性法氏囊病毒凋亡调节蛋白表达细胞株的建立
- 引言和目的：传染性法氏囊病病毒大片段上的小 ORF 编码一分子量约17kDa 的非结构蛋白(NS,亦称 VP5蛋白)。前期研究证明 NS 是病毒复制非是必需的,认为是 NS 蛋白是一个凋亡蛋白,而在本研究过程
- 叶菊秀李玲燕陈庆新周继勇
- 关键词：传染性法氏囊病毒凋亡调节蛋白细胞株
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒凋亡调节蛋白表达细胞株的建立
- 2008年
- 构建传染性法氏囊病病毒非结构蛋白基因（NS）的重组表达质粒pEGFP-C2-NS,然后在LipofectamineTM 2000介导下转染Vero细胞,活细胞状态下直接观察EGFP-NS蛋白在细胞中的表达与定位。结果显示,转染后4~5 h出现荧光蛋白表达,24 h达到高峰,呈小点样环核膜与细胞膜附近沉积,经G418筛选2~3周后稳定表达的荧光蛋白主要分布于细胞膜上。G418抗性细胞,经RT-PCR和Western-blot验证NS mRNA及其蛋白表达,提示已建立能稳定表达EGFP-NS蛋白的细胞株,所表达蛋白具有NS和EGFP双重活性,为进一步研究NS蛋白凋亡调节机制打下了基础。
- 叶菊秀李玲燕陈庆新周继勇
- 关键词：传染性法氏囊病病毒绿色荧光蛋白VERO细胞
- 水禽IgY单克隆抗体的制备与鉴定
- 采集麻鸭、鹅、斑头雁和鸬鹚等水禽血清,以辛酸-硫酸铵法提取水禽IgY,利用Hiload16/60 superdex200 prep pg凝胶柱,以500μL上样量、0.3mL/min流速对粗提水禽IgY进行纯化,收集不同...
- 李玲燕
- 关键词：单克隆抗体质谱鉴定数据库检索
- 文献传递
- 识别水禽共同IgY抗原的单克隆抗体及其制备方法
- 本发明的识别水禽共同IgY抗原的单克隆抗体及制备方法属于生物技术领域，涉及抗体工程技术。用辛酸－硫酸铵盐析法和Superdex 200凝胶层析法从斑头雁、鸬鹚、鸭和鹅的血清中提取IgY蛋白；用纯化的IgY蛋白联合免疫BA...
- 周继勇郭军庆李玲燕蒋媛媛
- 文献传递
- 重组H5亚型流感病毒HA1抗原的制备及其特性分析
- 2009年
- 为获得重组表达的H5亚型流感病毒血凝素(HA1)抗原,将PCR扩增的H5亚型流感病毒HA1基因克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pETHA1-H5。结果显示,转化pETHA1-H5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下以包涵体形式表达了HA1蛋白。HA1重组蛋白能与不同禽类(鸡、鸭和鹅)H5亚型流感病毒阳性血清发生特异性反应,同时以HA1重组蛋白为抗原制备的单克隆抗体具有与H5亚型完整病毒粒子抗原反应的能力,说明重组表达的HA1蛋白保留了自然条件下H5亚型流感病毒的抗原特征。将重组表达的HA1蛋白作为ELISA抗原检测禽血清中的H5亚型流感病毒抗体,以HI试验结果为参考,两者的符合率为96.6%,证明HA1重组蛋白作为ELISA检测抗原是可行的。
- 颜焰陈洪勋李玲燕周继勇简子健
- 关键词：禽流感病毒H5亚型HA1基因原核表达抗原性
