李有强
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 组氨酸激酶(YycG)在筛选肺炎链球菌抑制剂中的应用被引量：4
- 2009年
- 为了获得具有体外活性的肺炎链球菌组氨酸激酶YycG并利用其筛选寻找新的抑制剂。原核表达组氨酸激酶YycG的激酶功能域,经SDS-PAGE,Western blot鉴定及镍层析柱纯化后,采用激酶试剂盒检测其激酶活性;利用对其激酶活性的抑制作用从105种候选化合物中筛选有效的抑制剂,并通过实验验证抑制剂的抗菌作用。原核表达得到约35kDa的目的蛋白激酶域片段YycG′,其纯度达95%,并具有体外水解ATP的激酶活性;利用其活性筛选得到数种不同抑制效果的小分子化合物,且体外验证具有较好的抑菌效果。通过肺炎链球菌组氨酸激酶YycG活性筛选找到的小分子抑制剂可为进一步研发与该菌相关的药物或消毒剂提供基础。
- 李南王非牛司强王虹李有强尹楠林张雪梅朱维良尹一兵胥文春
- 关键词：组氨酸激酶蛋白纯化酶活性体外筛选
- 人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶抗体的制备及生物学特性研究
- 人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶是人体内一种以磷酸吡哆醛为辅基的氨基转移酶，在体内催化氨基在丙氨酸和谷氨酸之间转移，在非必需氨基酸的合成和蛋白质分解代谢中起重要的中介作用。临床上ALT是反应肝脏功能的有效指标。血清中ALT的活性可...
- 李有强
- 关键词：丙氨酸氨基转移酶原核表达蛋白纯化多克隆抗体肝脏功能
- 文献传递
- 人Ⅰ型谷丙氨酸氨基转移酶的原核表达及抗血清的制备
- 2009年
- 目的:构建人谷丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫家兔,制备ALT1抗血清.方法:从HepG2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增alt1基因,并将其克隆入pMD19-T载体中测序,将测序正确的目的基因克隆至PET-32a(+)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western Blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA,Western Blot进行检测.结果:测序证实克隆的基因序列与GenBank中的ALT1序列相符;SDS-PAGE,Western blot结果证实获得Mr为75×103的ALT1融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶100000,Western Blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合.结论:获得了ALT1重组蛋白及特异性多克隆抗体.
- 李有强张雪梅王虹李南张群胥文春
- 关键词：丙氨酸转氨酶免疫血清
- 人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
- 2009年
- 目的通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Westernblot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定。结果获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2。间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×105。Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原。结论成功制备ALT1单克隆抗体。
- 李有强尹一兵胥文春张云燕张雪梅尹楠林
- 关键词：单克隆抗体
- 超声微泡介导pEGFP-N1质粒转染人牙周膜成纤维细胞的实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨超声微泡造影剂在一定能量的超声波辐照下,介导质粒pEGFP-N1转染人牙周膜成纤维细胞(HP-DLFs)的效率及安全性。方法体外原代培养HPDLFs,以EGFP基因为报告基因,脂质微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HPDLFs。实验组超声+微泡+质粒组根据转染条件不同分成不同亚组,对照组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组和脂质体+质粒组。转染48h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP表达。同时用MTT法检测HPDLFs的活力。结果超声微泡介导的质粒对HPDLFs的转染效率与脂质体介导的质粒转染效率相似,明显高于其他对照组。超声+微泡+质粒组中HPDLFs的活力明显高于脂质体+质粒组。结论在一定条件下,超声微泡能安全、有效地介导外源基因的转染与表达。
- 张云燕李有强骆书美钟晓波王六王志刚
- 关键词：微泡人牙周膜成纤维细胞基因转染
- clpP基因缺陷对肺炎链球菌毒力表达降低的研究被引量：5
- 2009年
- 目的探索clpP基因缺陷对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)毒力的影响。方法用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活clpP基因,用PCR、Western blot鉴定缺陷菌株,通过RT-PCR分析自溶素(major autoly-sin A,lytA)、表面黏附A(pneumococcal surface adhesion A,psaA)、溶血素(pneumolysin,ply)和胆碱结合蛋白A(cholinebinding protein A,cbpA)的表达,并通过动物实验观察clpP基因缺陷株毒力改变情况。结果RT-PCR显示clpP缺陷株的4个毒力因子mRNA表达水平均低于野生菌,两者比较有统计学差异(P<0.05);小鼠毒力实验表明野生菌株半数致死时间为22h,而缺陷株半数致死时间为8d,两者比较有统计学差异(P<0.01);缺陷菌在小鼠体内被清除速度也显著快于野生菌株(P<0.05)。结论clpP基因缺陷使S.pn多种毒力因子表达减弱,毒力降低。
- 张群胥文春尹一兵朱兴华李有强张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌毒力因子热休克蛋白
