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三聚氰胺免疫层析试纸检测方法研究被引量：3: 2008年; 研究免疫层析试纸方法快速检测样品三聚氰胺残留。采用戊二醛法和重氮法分别合成三聚氰胺-明胶和三聚氰胺-牛血清白蛋白,作为免疫抗原和检测抗原。按常规方法制备抗三聚氰胺多克隆抗体并用胶体金标记。制作免疫层析试纸,通过观察金标抗体在试纸条上检测线的呈色现象,判断样品中三聚氰胺的残留量。结果表明,本方法可在15分钟以内完成检测,检测限为1.0μg/mL,可应用于牛奶等样品中三聚氰胺残留的快速检测。; 刘志国付云洁房国梁韩增飞; 关键词：三聚氰胺胶体金斑点金免疫渗滤法

雀稗麦角菌原生质体诱变育种及发酵条件研究被引量：1: 2009年; 为获得麦角碱高产菌株,提高雀稗麦角菌(Claviceps paspali strain3103)发酵的产碱率,用溶壁酶水解处理菌丝体、不同浓度的亚硝基胍诱变处理制备的原生质体,经再生培养获得诱变菌株,再经紫外初筛后进行发酵复筛,采用Van-Urk方法测定产碱量。筛选得到的高产菌株进行二级发酵并优化其发酵条件。实验结果表明,经亚硝基胍诱变处理,麦角总碱的产率由90mg/L提高到了1600mg/L,增加了约16倍;单位产碱率由22.5mg/L/g提高到了400mg/L/g,增加了约17倍;连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,接种量为20%时可有效缩短发酵周期。结果表明,用亚硝基胍对原生质体进行诱变处理可有效提高C.papspali的产碱率。; 韩增飞刘志国曾丽娟房国梁付云洁; 关键词：原生质体亚硝基胍诱变育种发酵

噬菌体基因Ⅴ蛋白基因的合成、重组表达及功能分析被引量：1: 2012年; 目的:研究丝状噬菌体基因V蛋白(gene V protein,GVP)基因的合成、重组表达及其功能。方法:根据GVP的基因序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计合成了8个寡核苷酸片段,利用重叠延伸PCR合成GVP基因序列,将其与原核表达载体pET-28a-c(+)质粒重组,转化大肠杆菌,获得GVP蛋白阳性表达菌株,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,产物经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化,获得目的蛋白GVP,DNA结合实验检测其功能。结果:成功合成出GVP基因,重组体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导获得高效表达,DNA结合实验表明GVP与单链DNA间解离平衡常数Kd=7.27×10-5mol/L。结论:重组构建并高效表达的GVP蛋白具有较高单链DNA结合能力,可用于食品病原微生物特定单链DNA分子的浓缩和分离。; 张大川房国梁李琦陈江源王岚李睿刘烈炬刘志国; 关键词：大肠杆菌BL21(DE3)

环介导等温扩增法快速检测阪崎肠杆菌被引量：12: 2010年; 目的:研究阪崎肠杆菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)方法,实现对食品中阪崎肠杆菌的快速检测。方法:针对阪崎肠杆菌16S rRNA基因(16S rDNA)及外膜蛋白A(OmpA)基因设计LAMP引物,扩增后通过电泳或加入显色剂SYBR-GREENⅠ检测。结果:LAMP法能有效特异地检测出阪崎肠杆菌;以16S rRNA引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限为32CFU/mL,用OmpA引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限达3CFU/mL,扩增产物加入SYBR-GREENⅠ在紫外条件下可见荧光,与电泳检测具有同样的灵敏度。结论:LAMP法可实现对阪崎肠杆菌的快速检测,在食品检测中具有广阔的应用前景。; 马寅众陈江源房国梁李琦李睿周帼萍刘志国; 关键词：阪崎肠杆菌环介导等温扩增

蛋白G IgG Fc段结合域的克隆表达及功能研究被引量：1: 2009年; 旨在研究蛋白G IgG Fc段结合域(PGFB)的克隆、表达及其抗体结合功能,用于抗体的纯化。根据PGFB的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了4个寡核苷酸片段。通过重叠延伸PCR方法合成了PGFB DNA片段,测序鉴定后克隆至原核表达系统pET-28a-c(+)上,转化大肠杆菌,获得表达菌株;IPTG诱导表达PGFB,经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化后偶联到琼脂糖凝胶6B上,用其纯化多克隆抗体。结果显示,PGFB在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,纯化后纯度达到90%以上,相对分子量为12.25 kD,与预期值相符。此外,偶联产物纯化多克隆抗体达到了良好的效果,每毫升基质可结合20 mg抗体。本研究克隆构建并高效表达了具有较好抗体亲和能力的PGFB,为多克隆抗体的快速纯化提供了方便。; 房国梁刘志国宗义强张大川曾丽娟付云洁屈伸; 关键词：IGG 多克隆抗体原核表达

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房国梁