张巍
- 作品数：48 被引量：44H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 借助计算机模建与缺失突变技术确定抗人TNF-α单抗Z12识别的抗原表位被引量：1
- 2004年
- 钓取抗人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)抗体Z12重、轻链可变区(VH,VL)基因,根据其氨基酸序列,运用同源模建方法分别模拟VH和VL结构域的空间构象,并搭建Fv片段的整体三维结构,利用分子对接方法建立Fv/hTNF-α作用的复合物模型,据此模型推测Z12抗体识别的表位为hTNF-α141-146位.将hTNF-α分为N端1-91和C端92-157两段进行原核表达,检测结果表明Z12抗体识别的抗原表位位于hTNF-αC端92-157区,初步证实预测结果可靠.进一步的实验研究表明,当把hTNF-α141-146位氨基酸缺失后,Z12抗体识别该缺失体的能力几乎丧失,提示此抗体特异性识别抗原分子141～146位氨基酸残基.
- 张巍冯健男沈倍奋
- 关键词：计算机建模缺失突变同源建模
- 以hTERT为靶点的肿瘤治疗性腺病毒疫苗
- 本发明公开了一种以hTERT为靶点的肿瘤治疗性腺病毒疫苗。本发明是先将hTERT复合基因eTERTFcGB插入pShuttle-CMV穿梭载体中CMV启动子的下游，得到携带hTERT复合基因eTERTFcGB的重组穿梭载...
- 于继云阎瑾琦肖毅徐元基姜云波张巍王宇刘宁杜芝燕
- 文献传递
- 抗人TNF-α单克隆抗体抗原识别表位的初步研究被引量：1
- 2003年
- 目的 :确定抗人肿瘤坏死因子 α(hTNF α)单克隆抗体 (Z8)识别的抗原表位所在区域。方法 :分别构建缺失hTNF α不同部位的重组质粒 ,用IPTG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行SDS PAGE蛋白电泳及Westernblot分析。结果 :Z8特异性识别含有hTNF αC端 92 15 7位氨基酸在内的融合蛋白 ,而不识别GST及其与hTNF αN端 1 91位氨基酸所形成的融合体。结论 :Z8抗体识别的抗原表位位于hTNF α 92 15 7区。
- 张巍沈倍奋
- 关键词：HTNF-Α抗原表位缺失突变
- 终端αGlcNAc糖基可能作为人胰腺癌细胞肿瘤标志物的初步研究被引量：1
- 2012年
- 目的探索终端为α-N-乙酰葡萄糖胺（αGlcNAc）糖基在胰腺癌组织和细胞中是否呈现特异高表达，从而确定终端αGlcNAc糖基是否可能作为胰腺癌的肿瘤标志物。方法利用特异性识别表位为终端αGlcNAc的商业化抗体（HIK1083），应用免疫组化方法，对11例胰腺癌患者和5例正常人胰腺组织进行检测。结果HIK1083抗体对11例胰腺癌组织／细胞均有明显的结合活性，而对正常胰腺组织和细胞无反应。结论终端αGlcNAc糖基可能作为胰腺癌细胞的肿瘤标志物，对胰腺癌的临床靶向治疗和诊断具有重要的研究价值。
- 高腾达贾艾文张巍
- 关键词：胰腺癌肿瘤标志物
- 一种复制子DNA疫苗载体及其构建方法与应用
- 本发明公开了一种复制子DNA疫苗载体及其构建方法与其在制备复制子DNA疫苗中的应用。本发明具有卡纳霉素抗性的复制子DNA疫苗载体，是将复制子DNA疫苗载体pSCA1中的氨苄青霉素抗性基因置换为卡那霉素抗性基因后得到的，从...
- 于继云阎瑾琦贾锐张亮徐元基张巍王宇朱晓明
- 文献传递
- 大质粒DNA疫苗pSVK—CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的：从多种大肠杆菌感受态细胞中筛选出适合该研究大分子质粒DNA疫苗的宿主菌，鉴定其达到中试要求。方法：将疫苗质粒pSVK—CAVA（14．7kb）转化4种大肠杆菌化学感受态细胞并提取质粒，通过琼脂糖凝胶电泳实验检测质粒的形态结构。对基因工程菌进行生化检测，并通过连续传代法和酶切鉴定进行稳定性检测，同时将质粒DNA瞬时转染至293T细胞中检测质粒表达能力。选取质粒含量最高和稳定性最好的宿主菌作为原始种子分装冻存，将原始种子库扩大培养，逐级建立好主种子库和工作种子库即三级种子库。通过摇瓶培养实验在4种常用基础培养基中挑选出最适合质粒生产的培养基。结果：确定了XL-10Gold作为质粒DNA疫苗pSVK—CAVA的宿主菌，基因工程菌传代稳定性和结构稳定性良好，质粒能在293T细胞中体外表达。筛选出TB培养基为基础培养基，质粒容积产量达到9．9mg／L，比LB培养基提高了接近1倍。结论：该研究筛选出大肠杆菌XL-10God作为质粒DNA疫苗的宿主菌，解决了大质粒在常用宿主菌中不稳定的难题，并对基础培养基进行了初步优化。
- 吴昊王宇朱晓明阎瑾琦张巍徐元基田仁礼殷小涛刘姣王琳于继云
- 关键词：宿主菌DNA疫苗高稳定性GOLD
- 人肿瘤坏死因子-α突变蛋白与活性部位分析被引量：1
- 2002年
- 利用基因工程技术 ,可以得到大量的hTNF α突变蛋白 ,它们是研究hTNF α活性部位结构与功能关系的有力工具 ,国外许多学者就此方面做了大量的实验研究。本文就影响hTNF α功能的活性区域和主要氨基酸残基以及N端、C端和二硫键与hTNF α生物活性的关系做一综述。
- 张巍
- 关键词：人肿瘤坏死因子-Α突变蛋白活性部位氨基酸残基
- 共表达两个独立的抗关节炎分子TNFR-Fc和CTLA4-FasL的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用
- 本发明公开了共表达两个独立的抗关节炎分子TNFR-Fc和CTLA4-FasL的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用,将Furin裂解位点和FMDV2A自剪切肽联合运用，使得两个抗关节炎融合蛋白TNFR-Fc和CTLA4-...
- 于继云张巍王芳阎瑾琦王博张晓郡徐元基
- 文献传递
- 大鼠TNFR-Fc重组腺相关病毒载体的构建、表达及中和活性鉴定
- 2013年
- 目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子II型受体胞外区(TNFR)融合大鼠IgG Fc片段的重组2型腺相关病毒载体(pAAV2/TNFR-Fc),并对目的蛋白TNFR-Fc的表达和生物学活性进行初步鉴定,为后续的类风湿关节炎基因治疗研究做准备。方法构建大鼠TNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染293T细胞,收集转染上清,以ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达,并应用L929细胞测定重组表达产物的TNF-α细胞毒中和活性。结果成功构建重组表达载体pAAV2/TNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白TNFR-Fc的表达,其可有效中和大鼠TNF-α的L929细胞毒活性。结论成功构建了大鼠TNFR-Fc融合基因,并验证了其在2型AAV载体上的分泌性表达,为进一步病毒包装及动物实验奠定了基础。
- 王芳杜芝燕王琳姜云波于继云阎瑾琦徐元基张巍
- 关键词：重组腺相关病毒载体中和活性
- 携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
- 2013年
- 目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1;在LipofectamineTM2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGloxΔE1,3Cre共转染进HEK293细胞;通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1)。将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达。结果基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致。Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达。结论成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力。
- 林晓亮姜云波赵倩殷小涛田仁礼李云奇徐元基阎瑾琦张巍高江平于继云
- 关键词：腺病毒载体HELA细胞基因治疗
