廖海
- 作品数：123 被引量：344H指数：10
- 供职机构：西南交通大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省应用基础研究计划项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 决明胰蛋白酶抑制剂1活性相关残基的定点突变与抑制活性分析被引量：2
- 2016年
- 决明胰蛋白酶抑制剂1(Co TI1)属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员,通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是Co TI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基,并考察各突变体对胰蛋白酶及棉铃虫等鳞翅目害虫消化酶的抑制作用。与Co TI1相比,Co TI1^(R86D)、CoTI1^(T88D)与CoTI1^(L84D)突变体对胰蛋白酶的抑制活性分别下降了93%、64%与59%;对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等3种鳞翅目害虫消化酶的平均抑制活性分别下降了88.7%、57%与60.7%。以上结果表明Arg86、Leu84与Thr88是Co TI1发挥抑制作用的关键残基,这为Co TI1的抑制分子机制及抗虫研究提供了重要的理论依据。
- 向缅朱建全俞继华李洋洋李娟娟刘祖碧王万军廖海周嘉裕
- 关键词：决明胰蛋白酶抑制剂定点突变
- 植物IPP基因的生物信息学分析
- 2024年
- 异戊烯基焦磷酸异构酶(IPP)催化异戊烯焦磷酸与二甲基丙烯基焦磷酸(DMAPP)的可逆异构化反应,对下游萜类产物的合成发挥重要作用。该研究利用生物信息学方法,从稻(Oryza sativa)与拟南芥(Arabidopsis thaliana)等单、双子叶植物基因组中鉴定获得31条IPP基因。系统进化树将IPP分为3簇,其中单子叶植物单独形成一簇,同簇的IPP成员具有相似的结构域,可能执行相似的生物学功能;以稻与拟南芥IPP基因为代表,顺式调控元件分析显示它们含有干旱等响应元件;定量PCR结果显示,稻与拟南芥IPP转录水平的表达模式较为多样化。研究结果为系统认识IPP基因的生物学作用及可能的应用研究提供了理论依据。
- 喻心怡冀慧玥路萍萍周嘉裕廖海
- 关键词：生物信息学干旱胁迫脱落酸
- 决明子中丝氨酸蛋白酶抑制剂的分析被引量：3
- 2006年
- 目的确定决明子中丝氨酸蛋白酶抑制剂的种类和数量。方法材料经过明胶-PAGE和明胶-SDS-PAGE后,分别用胰蛋白酶进行酶解,考马斯亮兰染色。结果电泳胶板经胰凝乳蛋白酶处理后,观察到一条清晰的蛋白染色带。结论决明子中含有一种胰凝乳蛋白酶抑制剂,该抑制剂有较强的抗还原能力,但在强酸环境中易发生变性。
- 廖海任炜周嘉裕康庄杜林方
- 关键词：决明子丝氨酸蛋白酶抑制剂抗肿瘤
- 暗紫贝母IPI基因的克隆与功能分析被引量：1
- 2023年
- 从暗紫贝母(Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia.)中克隆异戊烯焦磷酸异构酶(isopentenyl-diphosphate delta isomerase,IPI)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),命名为FuIPI,并开展生物信息学及功能分析。结果表明,FuIPI基因的ORF长度为825 bp,编码蛋白包括274个氨基酸残基,相对分子质量约为31 kD,理论等电点为5.61。序列比对表明FuIPI具有IPI家族特有的保守结构域及参与催化的关键氨基酸残基。系统进化分析表明FuIPI与姜、小果野蕉等植物的IPI具有较近的亲缘关系。实时荧光定量PCR分析表明,FuIPI在暗紫贝母不同组织中均有分布,但在叶中表达量最高,其次是茎、鳞茎,花中最低。随后,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,过量表达FuIPI基因,获得的FuIPI重组蛋白能有效转化异戊烯基二磷酸(isopentenyl diphosphate,IPP)形成二甲基烯丙基二磷酸(dimethylallyl pyrophosphate,DMAPP)。本研究为进一步探究FuIPI在生物碱类物质生物合成中的分子作用奠定了理论基础。
- 陈娇宋思敏唐婕辛锦秀张倩赵虹杰陈欣周嘉裕廖海
- 关键词：暗紫贝母基因克隆异源表达体外活性
- 转基因本氏烟草中CtDXR基因拷贝数及耐盐耐高温功能的初步分析
- 2024年
- 评估转基因本氏烟草中CtDXR基因的拷贝数,并初步分析其耐盐与耐高温能力。首先利用Southern Blot技术确定野生型本氏烟草中Actin基因的拷贝数,并以Actin基因为内参基因,以转CtDXR基因本氏烟草为材料,采用实时荧光定量PCR方法,检测转基因植株中CtDXR基因的拷贝数。最后,初步分析转基因植株的耐盐与耐高温能力。基于PCR方法,随机检测10株T1代转基因本氏烟草植株均能扩增出目的条带,表明它们均已成功转入目的基因CtDXR;Actin基因在本氏烟草基因组中为单拷贝基因;以Actin基因为内参基因,最终确定80%的转CtDXR基因植株为单拷贝或低拷贝株系;盐胁迫下,转CtDXR基因植株的株高(P<0.01)、侧根数(P<0.01)与鲜重(P<0.001)优于野生型植株,高温胁迫下,转CtDXR基因植株的株高(P<0.01)、叶片数(P<0.01)与鲜重优于野生型植株,表明转基因植株具有更强的耐盐和耐高温能力。利用研究建立的转基因本氏烟草外源基因拷贝数的检测方法,对转CtDXR基因植株完成外源基因拷贝数的鉴定,且初步鉴定了CtDXR基因具有耐盐与耐高温功能。
- 田春尧冀慧玥丁润月郑乔木周嘉裕廖海
- 关键词：拷贝数
- 川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的同源建模与分子模拟对接被引量：4
- 2015年
- [目的]分析川芎咖啡酸-3-O甲基转移酶(Caffeic acid-3-Omethyltransferase,COMT)序列特征、蛋白结构和活性位点。[方法]以紫花苜蓿中COMT的晶体结构为模板,利用同源建模构建川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)COMT的三维模型。[结果]经过动力学优化后,川芎COMT的三维模型与紫花苜蓿COMT的结构极为相似,主要由α-螺旋和β-折叠构成,其中α-螺旋占37.26%、β-折叠占10.41%、无规卷曲占52.33%。川芎COMT含有两个重要的结构域:咖啡酸结合域与S-腺苷甲硫氨酸结合域,主要通过氢键与范德华力结合,其中咖啡酸与川芎COMT分子中的Asp208和Gly210形成氢键,S-腺苷甲硫氨酸与川芎COMT分子中的Ser186、Thr213、Ala215、Thr216、Trp268及Asp272等残基形成氢键。[结论]该文得到川芎COMT的序列特征、蛋白结构和活性位点,为该类COMT的催化机理研究和分子工程改造奠定基础。
- 宋涛冯斌李娟娟唐迪王万军廖海周嘉裕谭睿
- 关键词：同源建模川芎
- 川芎甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析被引量：9
- 2011年
- 以川芎(Liqusticum churning Franch Hort)为材料,采用RT-PCR和RACE方法,从新鲜的嫩叶中克隆出甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的cDNA序列。克隆到的cDNA序列全长为2 211 bp,编码一条由508个氨基酸残基组成的多肽,其核酸序列与人参的BADH基因的cDNA序列同源性为86%,对应编码氨基酸序列同源性为91%。将得到的序列提交GenBank,序列号为HM352764。与其他植物BADH的氨基酸序列比对,川芎BADH具有相同功能区域,包括N-端信号肽、底物结合及酶催化位点,因而可以参与甜菜碱的合成反应。对川芎BADH与其他植物BADH的氨基酸序列的进化分析表明,其与五加科人参的同源性较近。
- 周嘉裕廖海
- 关键词：川芎甜菜碱醛脱氢酶克隆
- 太白贝母的Indel标记引物及其应用
- 本发明提供一种快速鉴定太白贝母的Indel标记引物、方法及用途，属中药材来源品种鉴定技术领域。本发明首次发现以该Indel标记引物为核心的PCR方法能够特异性鉴定太白贝母，仅有太白贝母在302bp位置显示阳性结果，其它贝...
- 廖海周嘉裕张田王威威蒋瑞平
- 文献传递
- 一种川芎咖啡酸-O-甲基转移酶的突变体及其用途
- 本发明提供一种川芎咖啡酸‑O‑甲基转移酶突变体及其用途，属于生物工程技术领域。突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；突变体的获得是基于发现318位氨基酸是影响活性的一个关键位点并用定点突变将其318位的异亮氨酸...
- 周嘉裕廖海严子成廖东颖陈安琪李秋娥
- 决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建被引量：1
- 2015年
- [目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI。[结果]决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽。决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员。所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确。[结论]克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础。
- 李洋洋阿尔古丽俞继华吴鹏飞许维嘉李娟娟刘祖碧王万军周嘉裕谭睿廖海
- 关键词：决明克隆原核表达载体
