官剑武 作品数:6 被引量:10 H指数:1 供职机构: 中南大学湘雅医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国博士后科学基金 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
弓形虫新基因wx2黄色荧光蛋白标记质粒的构建与鉴定 被引量:1 2008年 目的构建弓形虫新基因wx2黄色荧光蛋白标记的黄色荧光超表达质粒,为进一步研究弓形虫新基因WX2的功能提供工具。方法采用PCR扩增出编码wx2目的基因,用BglII,AvrII分别对PCR扩增产物和ptubYFP-YFP/sagCAT进行双酶切。将wx2定向克隆到tubYFP-YFP/sag-CAT;对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预计wx2目的基因片段,大小为558bp;扩增产物成功连接到ptubYFP-YFP/sagCAT中,经PCR,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有基因wx2读框。结论成功构建弓形虫新基因wx2黄色荧光超表达质粒wx2-tub-YFP sag/CAT。 吴翔 谭逵 张琼 谢荣华 官剑武 舒衡平关键词:弓形虫 重组质粒 三种蜘蛛毒素抗弓形虫药物的筛选及其作用机制的初探 研究目的:
观察我国特有的3种蜘蛛(虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛、海南捕鸟蛛)毒素体内外抗弓形虫效果,并初步探索抗弓形虫的作用机制。
研究方法:
1、毒理实验
采用MTT法观察虎纹捕鸟蛛毒素、敬钊缨毛蛛... 官剑武关键词:蜘蛛毒素 药物筛选 文献传递 一种富含半胱氨酸的蜘蛛多肽基因的克隆和初步表达 被引量:1 2010年 目的克隆编码虎纹捕鸟蛛多肽的基因并表达蜘蛛多肽,为研究其生物学功能奠定基础。方法通过构建和随机测序毒腺cDNA文库,克隆编码毒素多肽的基因;构建真核表达质粒,利用酿酒酵母S78株表达系统分泌表达,表达产物进行Tricine SDS-PAGE鉴定。结果克隆到一种编码富含半胱氨酸的多肽的新基因,命名为HWTX-XIVa2基因;构建的真核表达质粒转化酵母S78后表达6.5ku的多肽。结论构建并筛选毒腺cDNA文库是发现毒素多肽基因的一种有效方法,利用基因工程表达是获得蜘蛛多肽的一种有效手段。 蒋立平 官剑武 舒衡平关键词:虎纹捕鸟蛛 基因克隆 多肽 蜘蛛粗毒抗弓形虫作用的初步研究 目的:蜘蛛的数量仅次于昆虫,其毒液成分相当复杂,含量丰富的是分子量2-8 KDa的多肽,具有重要的科学研究价值和良好的应用前景。弓形虫对人类健康危害非常严重,目前临床上抗弓形虫药物存在毒副作用大、疗程长、停药易复发等缺点... 官剑武 唐雅琴 李先耀 孙洪香 章洁 蒋立平关键词:弓形虫 抗弓形虫作用 多肽药物 文献传递 PBL教学法在医学寄生虫学教学中的几点体会 被引量:6 2008年 目前全国高等医学院校医学寄生虫学学时大大减少,有的院校列为考查课,有的列为选修课。在此情况下,医学寄生虫学实验所占学时更是少之又少,如何利用好有限课时,使学生最大限度地吸收、掌握教学内容,已成为摆在高校师生面前的一道难题。传统的教学方法以讲授为主,容易忽视学生学习的主动性和积极性。而应用了PBL(problem based learning)教学法,其基本要点是以学生为中心、基于问题、综合地、相互合作和交互式地学习,有助于培养和提高学生在自学、实验技术、团队合作、分析问题和解决问题等方面的能力,激发学生学习的积极性和主动性。 吴翔 谭逵 张琼 官剑武 舒衡平关键词:医学寄生虫学 教学方法 PBL教学 弓形虫基因缺陷虫株建立方法的初步研究 被引量:1 2008年 目的:应用电穿孔技术转染Tg P24基因敲除转染质粒于弓形虫RH,探讨电穿孔技术的应用条件,以及Tg P24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中筛选的最适条件。方法:设定所需的电穿孔参数、条件,如电压,电容,脉冲次数,电击杯的大小,电转染缓冲液,电穿孔后,将弓形虫悬浮液分别转移到长有不同贴壁细胞的培养瓶中,37℃,5%CO_2(体积分数)的培养箱中培养,观察弓形虫的生长状况,并对不同电穿孔参数、条件下的弓形虫存活率进行比较。12hr后换成加有福来霉素的完全培养基中选择培养,不同时间观察虫体及细胞生长情况;在细胞中选择培养10天后,收集虫体,4℃下福来霉素处理7天,再回复到细胞内用选择培养基培养5天,收集虫体,腹腔注射昆明小鼠,大量收集弓形虫用于提取RNA进行RT-PCR。结果:优化电穿孔条件后的弓形虫存活率得到提高(P<0.05);在选择浓度为5.0μg/ml-7.5μg/ml的福来霉素培养基中,筛选虫株采用L929细胞做为宿主细胞最为适合;RT-PCR结果显示L929细胞筛选基因敲除虫株的效果较好。结论:初步确定了弓形虫电穿孔技术的应用条件,以及TgP24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中的最佳筛选条件;获得了较好的转染效率,为进一步研究弓形虫TgP24基因敲除株的生物学特性打下了良好的基础。 谭逵 张琼 范久波 谢荣华 蒋立平 官剑武 舒衡平 吴翔关键词:弓形虫 电穿孔 基因敲除 哺乳动物细胞