孙然
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低氧对大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞功能的影响
- 2014年
- 目的培养鉴定大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs),探讨其对缺氧刺激反应性的不同。方法酶消化法分离大鼠不同级别PASMCs并分为3组:大肺动脉组,包括肺动脉干及肺内一级主干;中动脉组,包括肺内主干的第二级和第三级分支;小肺动脉组,包括肺内主干四级分支后的更细小分支。分别给予常氧(DMEM+2%FBS、5%CO2、21%O2、37℃)和低氧(DMEM+2%FBS、5%CO2、3%O2、37℃)培养48 h,用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法和Western blotting检测增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的蛋白表达水平的方法检测细胞的增生能力;应用伤口愈合实验检测细胞的迁移能力。结果倒置显微镜下PASMCs呈现长梭形,免疫荧光法检测平滑肌细胞标志物即平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)为阳性,生理情况下(常氧),3组肺动脉平滑肌细胞增生及迁移能力均较一致;低氧培养48 h后,中小肺动脉平滑肌细胞的增生与迁移能力均显著高于大动脉,PCNA结果与MTT结果一致,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在低氧条件刺激下,不同级别肺动脉平滑肌细胞反应性不同,中小肺动脉平滑肌细胞的增生及迁移能力均显著高于大肺动脉平滑肌细胞。
- 国桓王望孙然刘杰王军
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞低氧增生迁移
- 大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞对血小板源性生长因子的反应性及其意义被引量：1
- 2014年
- 目的分离培养并鉴定大鼠不同分支级别肺动脉平滑肌细胞（PASMC），观察其对血小板源性生长因子（PDGF）反应性的差异，探讨相同刺激因素下，不同级别肺血管病理改变不同的细胞学机制。方法分离SD大鼠肺动脉并按解剖学分支分为3组：大动脉组，包括肺动脉干及肺内一级主干；中动脉组，指肺内主干二、三级分支；小动脉组，包括肺内动脉四级及以上分支。分离培养不同分支PASMC并用平滑肌细胞抗体进行免疫荧光染色鉴定。给予PDGF刺激，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性；Western blot方法测定增殖细胞核抗原表达水平变化以反映细胞增殖能力；伤口愈合实验检测细胞迁移能力的变化。结果不同分支PASMC在光学显微镜下观察无明显差别；免疫荧光染色结果显示，三种常用的平滑肌细胞标志物即平滑肌肌动蛋白（a-SMA）、钙结合蛋白（S100A4）和平滑肌调宁蛋白（calponin）抗体染色均呈阳性，各组间荧光强度无明显差异。正常培养条件下3组细胞增殖率分别为（137．0±12．1）％、（166．1±23．6）％、（156．8±2．5）％，Western blot检测PCNA表达灰度值分别为（0．41±0．10）、（0．55±0．18）和（0．48±0．28），迁移到空白区域的细胞个数分别为（49±14）、（68±13）和（71±7），组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。给予10ug/L PDGF干预48h后，中、小动脉组PASMC的增殖率分别为（215．7±17．8）％、（195．2±6．6）％，均高于大动脉组[（167．0±14．4）％，均P〈0．01]，干预后3组细胞内PCNA蛋白表达灰度值分别为（0．93±0．11）、（1．21±0．14）和（0．62±0．03），迁移到空白区域的细胞个数分别为（194±46）、（171±16）和（68±21），中、小肺动脉组与大动脉组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论尽管不同分支PASMC通常无明显差异，但
- 国桓杨汀王望刘杰孙然王军王辰
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子增殖迁移
- Bβ448野生型及突变型纤维蛋白原稳定转染细胞系的建立被引量：1
- 2012年
- 目的构建野生型(BβArg448)和突变型(BβLys448)纤维蛋白原稳定表达细胞系,为进一步研究BβArg448Lys基因多态性的病理生理学意义及相关蛋白功能研究提供实验基础。方法以含纤维蛋白原野生型Bβ链cDNA全长的表达载体pMLP-FGB(448G)为模板,采用PCR定点突变技术构建BβLys448表达载体,即突变型质粒pMLP-FGB(448A)。应用脂质体转染及药物加压筛选的方法,将纤维蛋白原Aα链、野生型/突变型Bβ链、γ链表达载体共同转染至CHO-K1细胞,RT-PCR检测各条链mRNA的表达。结果野生型及突变型纤维蛋白原稳定转染细胞系在转录水平构建成功。结论野生型及突变型纤维蛋白原稳定转染细胞等在转录水平构建成功,为进一步体外研究BβArg448Lys所致纤维蛋白原的结构与功能异常奠定了基础。
- 林媛李积凤刘杰牛梦林孙然王军刘岩王辰
- 关键词：纤维蛋白原定点突变
