孙志勇
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国科学院知识创新工程重要方向项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 丝状真菌粗糙脉孢菌菌丝发酵形态关键基因的筛选
- 丝状真菌被广泛地用于发酵生产过程，尤其在工业用酶生产中，其中近60％的酶类生产来自丝状真菌表达系统。液体深层发酵中，丝状真菌菌丝的形态及其生理特性直接影响发酵液流变特性，并且与产量存在着重要联系。在里氏木霉、黑曲霉等工业...
- 孙志勇林良才田朝光
- 粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究被引量：1
- 2016年
- 旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动子表达,同时又消除了葡萄糖苷酶蛋白的背景条带,有利于目标蛋白表达纯化。构建了分别含有粗糙脉孢菌自身强启动子(Pcbh-1、Pcbh-2和Ptef-1)的3个新的高效表达载体,该载体带有融合标签蛋白tev-6×his-gfp,能高效方便的筛选阳性转化子,有利于后续目标蛋白纯化。以纤维素酶GH3-4和CBH-1为例,通过重组表达菌株纤维二糖诱导发酵液进行酶活测定、SDS-PAGE电泳分析和Western blotting检测显示,重组蛋白GH3-4-GFP和CBH-1-GFP成功进行了表达和分泌,分泌水平分别为2.77和2.83 mg/L。Pcbh-1启动子重组蛋白表达水平最高,说明在纤维二糖诱导体系中启动子Pcbh-1的启动效率最高,初步建立了粗糙脉孢菌纤维二糖诱导的蛋白质表达体系。
- 高染染刘倩孙文良孙志勇刘浩田朝光
- 关键词：丝状真菌粗糙脉孢菌蛋白表达系统纤维二糖强启动子
- 粗糙脉孢菌纤维素酶液体发酵优良形态突变体筛选被引量：2
- 2014年
- 丝状真菌被广泛地用于包括纤维素酶在内的工业酶生产过程。在液体深层发酵中,丝状真菌菌丝形态直接影响发酵液的流变特性,进而与目标酶蛋白产量存在着重要的关联。目前,针对丝状真菌工业酶液体发酵菌丝形态的研究依然是从传统的发酵工程学角度出发,对与发酵水平紧密相关的形态、粘度等性状相关基因的认识远远不够。为了挖掘深层发酵中对丝状真菌发酵产酶性能具有重要影响的形态发育相关基因,以粗糙脉孢菌Neurospora crassa单基因突变体库中的95株形态突变株为研究对象,在结晶纤维素为碳源的条件下进行筛选,探寻与野生型菌株蛋白产量有显著差异的突变株。同时,对这些突变株的内切-β-1,4-葡聚糖酶酶活、β-葡萄糖苷酶酶活、发酵液粘度和菌丝干重进行了测定,并观察了发酵液中突变株的菌丝形态。实验结果表明,与野生型菌株相比,突变株SZY32、SZY35、SZY39和SZY43发酵液中蛋白浓度显著降低,突变株SZY11、SZY63、SZY69和SZY87发酵液中蛋白浓度显著性提高。值得注意的是,突变株SZY11和SZY43发酵液菌丝体主要形态为菌球状,其发酵液粘度分别降低75%和50%,突变株SZY87在发酵液中呈长丝状,发酵液粘度显著升高至少2倍。这些与产酶水平相关的形态、粘度基因的获得将有助于丝状真菌纤维素酶等工业酶高产工程菌株的理性构建。
- 孙志勇林良才王敏田朝光
- 关键词：粗糙脉孢菌纤维素酶
