周言
- 作品数：12 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 流行性乙型脑炎生物疫苗的研究进展被引量：4
- 2006年
- 流行性乙型脑炎(JE)是一种经蚊虫传播、人畜共患、严重危害中枢神经系统的急性传染病,我国将其归为法定乙类病毒性传染病。由于该病重症病死率高,且易造成不同程度的神经系统后遗症,所以一直是严重影响世界公共卫生问题的主要疾病之一,预防疫苗也成为许多国家的研究热点内容。鉴于目前大部分国家和地区应用的各类疫苗存在制备费用高、易致变态反应以及出现神经系统症状等缺点,一个寻求稳定、安全以及新型的JE生物疫苗研制战略正在兴起,包括灭活疫苗与减毒活疫苗尚需完善,亚单位疫苗继续开发以及DNA疫苗进一步深入研究等。该文就近年来JE生物疫苗的研究现状作一综述。
- 周言冯国和
- DNA疫苗靶向增强效应的研究进展被引量：1
- 2008年
- DNA疫苗的优势在于通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，激发机体产生特异性的体液与细胞免疫应答反应。此类疫苗接种后类似自然感染过程，易于制备和纯化，无活疫苗毒力回升等问题，因而成为具有应用前景的疫苗之一。目前DNA疫苗所致的体液与细胞免疫效应仍不如传统疫苗，进一步增强DNA疫苗免疫效应成为该领域的研究热点。虽然免疫机制仍不十分清楚，但树突状细胞在诱导免疫反应中的重要作用已经得到肯定。该文从树突状细胞及其表面分子在DNA疫苗诱导细胞毒性T细胞反应中的作用，以及靶向树突状细胞增强免疫效应三个层面的研究进展作一综述。
- 周言冯国和
- 关键词：树突细胞
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子编码基因对乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫增强效应的影响
- 2009年
- 目的研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）编码基因对乙型脑炎（JE）DNA疫苗细胞免疫应答的影响。方法套式RT—PCR法获取BALB／c小鼠GM—CSF编码基因，构建含乙型脑炎病毒（JEV）前膜（prM）-包膜（E）蛋白与GM-CSF编码基因以及单纯GM—CSF编码基因的重组质粒，分别命名为pJME／GM—CSF和pGM—CSF。脂质体法转染上述质粒人中华仓鼠卵巢细胞（CHO），免疫荧光法检测编码蛋白的表达与分布。流式细胞仪检测经不同组合的免疫原免疫后小鼠脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子（IFN-γ、IL-4）变化，LDH法测定CTL活性。数据行单因素方差分析及最小显著差数法比较。结果重组质粒pJME／GM—CSF与pGM—CSF经鉴定构建正确，所编码的蛋白主要分布于胞质，少量分布于胞膜。pJME／GM—CSF组CD4^＋T淋巴细胞比例为（33．90±0．79）％，明显高于其他组（t值分别为9．818、6．804、6．594、10．061、9．380和17．675，均P％0．05）。pJME＋pGM—CSF同时注射组及pGM—CSF注射3d后接种pJME组CD4^＋T淋巴细胞比例分别为（29．83±0．61）％、（29．70±0．51）％，高于pJME注射3d后接种pGM—CSF组的（27．69±0．50）％（t=3．466、t=3．255，P〈0．05）。pJME／GM—CSF组与pJME＋pGM—CSF同时注射组CD8^＋T淋巴细胞比例较空载体（pcDNA3．1＋）组及JE灭活疫苗组升高（t值分别为3．811、2．627、10．537和3．811，均P〈0．05）。pJME／GM—CSF组CTL活性为（51．48±0．10）％，明显高于其他组（t值分别为22．868、13．823、5．377、32．287、34．632和53．795，均P〈0．05）。pJME／GM—CSF组、pJME＋pGM—CSF同时注射组及pGM—CSF注射3d后接种pJME组IFN-γ／IL-4比值分别为19．13±1．36、12．32±0．82、7．05±0．43，明显高于其他组（P〈0．05）。结论GM—CSF编码基因可增强JEDNA疫苗的细胞免疫应答效应。
- 翟永贞李喜梅周言张丹邓宝成冯国和
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 乙脑病毒prME蛋白与BALB／c鼠IgG Fc段编码基因联合构建DNA免疫研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究IgG Fc编码基因对流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）DNA疫苗免疫增强效应的影响。方法巢式RT-PCR法从BALB／c鼠脾组织获取IgG Fc段编码基因，用限制性内切酶从含流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）prME蛋白基因重组子获取prME蛋白基因，分别插入同一真核表达载体pcDNA3．1（＋）不同酶切位点，构建重组子pJME／IgG Fc并经酶切及DNA测序分析。脂质体法将pJME／IgG Fc转染CHO细胞。免疫荧光、Western blot法检测转染的CHO细胞中融合蛋白分布与表达。将pJME／IgG Fc肌注免疫BALB／c鼠，检测小鼠脾特异性细胞毒T细胞（CTL）杀伤活性和中和抗体滴度。结果pJME／IgGFc经BamHI／EcoRI和BamHI／NotI酶切释出的插入子大小（2001 bp、2730 bp）分别与预期结果相符合。所编码的融合蛋白相对分子质量（Mr）为101×10^3，主要分布于胞浆，少量分布于胞膜，pJME／IgG Fc转染CHO细胞经32次传代仍可表达融合蛋白。pJME／IgG Fc免疫组中和抗体滴度与CTL活性较pJME及灭活疫苗组均升高（P〈0．05）。结论pJME／IgG Fc成功构建，转染的CHO细胞可稳定表达融合蛋白，IgG Fc段编码基因能够增强JEV DNA疫苗的细胞和体液免疫应答。
- 李喜梅周言翟永贞马力冯国和
- 关键词：乙型脑炎病毒FC段CHO细胞
- 乙型脑炎DNA疫苗接种局部肌肉组织树突状细胞浸润及其诱导的细胞免疫
- DNA疫苗易于制备和纯化，不存在毒力返祖及毒力增强的危险，具有灭活疫苗的安全性，可以诱导产生体液免疫和持久细胞免疫。然而DNA疫苗免疫宿主后所产生的体液与细胞免疫效果还达不到目前应用疫苗所致标准，通过提高抗原提呈细胞的提...
- 周言冯国和
- 关键词：乙型脑炎疫苗接种树突状细胞细胞免疫
- 文献传递
- 乙脑病毒prME蛋白与鼠GM-CSF编码基因的融合构建与表达
- 2010年
- 目的构建乙脑病毒prME蛋白与鼠GM-CSF融合基因重组子并建立稳定细胞表达株。方法套式-RT-PCR法从BALB/c鼠脾组织获取GM-CSF编码基因,用限制性内切酶从含乙脑病毒prME蛋白基因重组子获取prME蛋白基因,定向克隆至同一真核表达载体pcDNA3.1(+)不同酶切位点,构建重组子pJME/GM-CSF并经酶切及DNA测序分析。脂质体法将pJME/GM-CSF转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞。Western blot法检测转染的CHO细胞中融合蛋白表达。结果 pJME/GM-CSF经BamH I/EcoRI和BamH I/Not I酶切释出的插入子片段(2001 bp、2472bp)分别与预期结果相符合。所编码的融合蛋白相对分子量(Mr)为85×103。结论 pJME/GM-CSF成功构建,转染的CHO细胞可稳定表达融合蛋白。
- 翟永贞周言马力冯国和
- 关键词：脑炎病毒病毒蛋白质类粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子CHO细胞
- 壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米DNA疫苗肌注BALB/c鼠诱导细胞免疫效应的研究
- <正>目的探讨载有日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulatin...
- 翟永贞周言马力冯国和
- 文献传递
- 不同途径接种乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所致BALB/c鼠的细胞免疫被引量：4
- 2007年
- 目的:研究经不同途径接种乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所诱导的细胞免疫。方法:将乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗(命名为pJME)分别以肌注、滴鼻两种免疫方式免疫BALB/c鼠,流式细胞仪检测脾脏CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶释放实验测定脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果:pJME肌注组与滴鼻组免疫鼠CD4+T淋巴细胞百分比(30.91+0.72)%、(27.89+0.42)%,均高于灭活疫苗与载体肌注组(23.73+0.17)%、(23.78+0.21)%(P<0.05),肌注组显著高于滴鼻组(P<0.05);而CD8+T淋巴细胞百分比(14.62+0.25)%、(13.73+0.50)%,也均高于灭活疫苗和载体肌注组(10.80+0.39)%、(11.97+0.06)%(P<0.05),肌注组与滴鼻组无显著差异(P>0.05);两组有明显CTL效应(pJME肌注组29.1%,pJME滴鼻组17.1%),明显高于载体肌注组6.0%,pJME肌注组明显优于滴鼻组。结论:pJME以两种途径免疫鼠时可诱导明显细胞免疫反应。
- 周言张琳翟永贞李喜梅王占英冯国和
- 关键词：T淋巴细胞亚群
- 壳聚糖-pJME／GM-CSF纳米免疫原肌注BALB／c鼠所致树突状细胞分布与功能变化
- 2010年
- 壳聚糖是一种来源广泛、价格低廉、具有良好生物相容性及降解性、安全无毒的阳离子天然高分子聚合物，以纳米颗粒或微球形式与DNA结合后形成聚电解质复合体，后者可优化DNA疫苗的免疫效果。研究证实壳聚糖是一种有效介导DNA疫苗进行皮肤及黏膜免疫的载体物质。
- 周言翟永贞马力王志峰常彩芳冯国和
- 关键词：BALB/C鼠GM-CSF壳聚糖细胞分布树突状
- 壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米DNA疫苗肌注BALB/c鼠诱导细胞免疫效应的研究被引量：3
- 2014年
- 探讨载有日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)编码基因重组子(命名为pJME/GM-CSF)的壳聚糖纳米颗粒的免疫佐剂效应及其机制。本研究采用复凝聚法制备壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒;免疫组化法检测肌肉注射部位浸润细胞的类型,流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾脏DC表型和功能的变化;乳酸脱氢酶释放法检测CTL活性。结果显示制备的壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒鉴定正确;pJME/GM-CSF募集包括非成熟树突状细胞、巨噬细胞、粒细胞到注射部位,增加脾脏树突状细胞表面MHCII的表达,抗原摄取和递呈功能,增强疫苗诱导的细胞免疫反应,壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒可进一步扩大pJME/GM-CSF的上述作用。这些结果表明壳聚糖可作为DNA疫苗肌注免疫时的传送载体,能够增强pJME/GM-CSF疫苗的细胞免疫应答。
- 翟永贞周言马力冯国和
- 关键词：壳聚糖GM-CSF细胞毒性T淋巴细胞
