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梭菌属神经毒素的基因鉴定与分型: 2006年; 目的：建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法：根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列，综合应用多种生物学软件与在线分析平台，设计特异性及通用检测引物，对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增，验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论：设计了针对A，B，E，F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物，以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物（BonAB—P01／P02，BonB-P01／P02，BonE-P01／P02，BonF-P01／P02，TET-P01／P02，TY-P01／P02）。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验，检测特异性良好，没有交叉反应；通用扩增结果显示均得到1100bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到（1～3）×10^3个菌。该检测方法特异性强，灵敏度高，可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。; 杨慧盈王慧包士中史晶荫俊; 关键词：PCR检测特异性灵敏度

一种抗I型志贺毒素IgY抗体、及其制备方法和用途: 本发明公开了一种抗I型志贺毒素的IgY抗体，该抗体可以通过以下方法制备：化学合成或基因重组表达的方法制备无毒性的志贺毒素免疫抗原，通过免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，应用生物化学方法提取和纯化卵黄免疫球蛋白(IgY抗体)。该抗体具...; 王慧侯晓军王琴包士中蔡昆史晶荫俊

志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应: 2008年; 目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显著提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。; 包士中史晶蔡昆侯晓军高翔刘昊荫俊王慧; 关键词：模拟表位

人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达被引量：4: 2007年; 目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。; 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊; 关键词：原核表达

抗A型肉毒毒素人源三结构域抗体的重组设计与表达被引量：1: 2005年; 以获得的抗A型肉毒毒素人源单链抗体ScFvB17为模板 ,PCR扩增抗体ScFv基因的重链可变区 (VH)和轻链可变区 (Vκ) ,以重链恒定区 1(CH1) 5′端 12个氨基酸的序列作为连接肽 ,构建成三结构域抗体分子 :VH_连接肽_Vκ(VH Vκ)。重组VH Vκ抗体分子在大肠杆菌中得到高效表达 ,其表达量占菌体总蛋白质的 34%以上。表达的蛋白质在菌内形成包含体 ,采用镍柱金属鏊合层析法对该包含体进行纯化 ,得到了纯度高达 95 %的VH Vκ。ELISA等实验结果显示 ,重组设计并制备的三结构域抗体蛋白VH Vκ不但可以特异识别毒素抗原 ,具有与原母本单链抗体ScFv相同的抗原特异性 ,而且具有了更高的相对亲和力和稳定性。; 王慧荫俊史晶孟露露李佩真; 关键词：A型肉毒毒素中和活性

SNAP-25基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与鉴定被引量：2: 2009年; 目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定。方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因。将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliBL21感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化。通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析。结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达。表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性。; 刘昊史晶蔡昆高翔侯晓军王慧; 关键词：肉毒毒素底物原核表达

抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体、其制备方法及用途: 本发明公开了抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体，还公开了该抗体的人源化改构体。上述抗体通过以下方法制备：首先通过分子生物学或其它方法制备抗体的CDR区或可变区或IgG部分或全基因，在原核细胞如大肠杆菌等，真核细胞如酵母菌...; 王慧史晶荫俊侯晓军蔡昆包士中王琴

鼠源抗B型肉毒毒素Fab抗体库的构建及初步筛选: 2007年; 目的:应用重组噬菌体抗体库技术制备抗B型肉毒毒素Fab抗体。方法:用重组B型肉毒毒素重链C端片段(BoNTB/Hc)免疫BALB/c小鼠,从其脾淋巴细胞扩增免疫球蛋白Fd段和κ链基因,克隆至表达载体pComb3中,并将抗体Fab段表达于噬菌体表面,建立容量为5.96×106cfu的噬菌体抗体库。以BoNTB/Hc为抗原对所建抗体库进行4轮亲和筛选,获得与B型肉毒毒素特异性结合的克隆,并进行序列测定。结果:构建了抗B型肉毒毒素Fab抗体库,筛选出特异性克隆1个。结论:从鼠源噬菌体免疫抗体库中初步获得了特异性抗B型肉毒毒素的Fab抗体。; 杨秀清王慧史晶侯晓军包士中荫俊; 关键词：B型肉毒毒素 FAB 噬菌体抗体库

一种抗I型志贺毒素IgY抗体、及其制备方法和用途: 本发明公开了一种抗I型志贺毒素的IgY抗体，该抗体可以通过以下方法制备：化学合成或基因重组表达的方法制备无毒性的志贺毒素免疫抗原，通过免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，应用生物化学方法提取和纯化卵黄免疫球蛋白(IgY抗体)。该抗体具...; 王慧侯晓军王琴包士中蔡昆史晶荫俊

抑制2型志贺毒素活性的多肽TF1及其编码基因与应用: 本发明公开了一种抑制2型志贺毒素活性的多肽TF1及其编码基因与应用。本发明提供的多肽，命名为TF1(又名P1)，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。该多肽P1可以做成药物以预防和/或治疗由2型志贺毒素或产2型志贺毒素的病原...; 王慧李涛侯晓军王琴屠伟刘越男史晶蔡昆

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史晶