刘忠华
- 作品数：218 被引量：478H指数：12
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 外源基因在转基因动物中遗传和表达稳定性的研究进展
- 转基因技术始于20世纪70年代末80年代初.是人们按照需要将外源目的基因导入宿主细胞中,使得外源基因稳定的整合在宿主基因组中,随着宿主基因组的复制而扩增,得到稳定的遗传和表达。目前转基因动物在功能基因组研究、定向育种、建...
- 孔庆然刘忠华
- 关键词：外源基因转基因动物动物遗传学
- 文献传递
- 一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂及其应用
- 本发明公开了一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所提供的制剂是由肌源成纤维细胞提取物、丙酮酸盐和钙盐组成。其中，肌源成纤维细胞提取物是鸡肌源成纤维细胞经超声波裂解后，分离得到小于1...
- 张宇李海刘忠华连正兴
- 文献传递
- 猪ROSA26启动子的鉴定与应用
- 本研究在猪中对ROSA26启动子进行克隆和鉴定，并检测了其第一外显子和驱动绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达活性。通过与小鼠ROSA26启动子的同源比对，在猪13号染色体上得到了一段长为513bp，同源率达到92％的序列，...
- 武美玲孔庆然王娟解炳腾刘忠华
- 关键词：启动子
- 小鼠精子注入兔卵母细胞受精研究被引量：7
- 1999年
- 利用显微操作仪将小鼠精子注入家兔卵母细胞的胞质内和透明带下,对鼠兔异种精卵互作和异种受精胚胎的发育进行了研究,并对注射精子的数量及卵的体外成熟时间等影响鼠兔异种显微受精的因素进行了探讨,结果如下:(1)将小鼠精子分别注入兔卵胞质内和透明带下,均能激活兔卵母细胞,导致精核解聚和原核形成;(2)小鼠精子注入兔卵胞质内和透明带下受精,杂种胚胎体外培养能发育到8-细胞期;(3)鼠兔异种受精4-细胞胚胎染色体标本制备观察结果表明,它们为正常二倍体;(4)鼠兔异种受精4-细胞胚胎的超微结构观察结果表明,它们极近似兔正常4-细胞胚胎的超微结构;(5)将小鼠精子注入兔卵透明带下,注射5—10个精子组卵的受精率(32.4%)和卵裂率(16.2%)均高于注射单个精子组的,但二组间差异不显著(P>0.05);DM+15%NCS液中体外成熟培养11—12h兔卵透明带下注入1—2个小鼠精子后的受精率(42.3%)和卵裂率(30.8%)均高于体外成熟培养24—25h组的,但二组间差异未达到显著水平(P>0.05)。
- 李子义谭景和周琪孙兴参李光鹏刘忠华
- 关键词：哺乳动物受精小鼠精子
- 脉冲次数和卵龄对小鼠卵母细胞电活化效果的影响被引量：4
- 1995年
- 以一定电场条件、不同次数的电脉冲刺激注射ＨＣＧ后不同时间（１５、１７、１９、２１和２３ｈ）小鼠卵母细胞，研究了不同电场条件下脉冲次数和卵龄对卵母细胞活化效果的影响。结果如下：（１）对注射ＨＣＧ后１７和１９ｈ卵母细胞的研究表明，在一定电场条件（如场强１．２ｋＶ／ｃｍ，持续时间８０μｓ）下，增加脉冲次数可提高卵母细胞活化率，这在注射ＨＣＧ后１７ｈ卵母细胞更为明显（１次脉冲活化率２６．５％，４次脉冲活化率６０％）。（２）１次脉冲刺激活化率较高的电场条件（场强１．２ｋＶ／ｃｍ，持续３２０μｓ），增加脉冲次数因死亡率上升而导致活化率下降（在注ＨＣＧ１９ｈ卵母细胞，１次脉冲活化率为６４．７％，３次脉冲为５０％）。（３）卵母细胞活化率随卵龄增加而升高（注ＨＣＧ后１５ｈ２６．７％，２１ｈ８３．７％），但活化卵体外发育率则随卵龄增加而下降。（４）体内和体外老化至注ＨＣＧ后１９ｈ卵母细胞的电活化率差异不显著。
- 谭景和刘忠华孙兴参戴文达董守田张维生
- 关键词：卵母细胞小鼠
- 精浆对猪精子冷冻效果影响的研究被引量：2
- 2012年
- 为优化猪精子冷冻技术,提高解冻后精子的活力和受精能力,本试验分别以含精浆浓度为10%、20%和30%的冷冻保护剂处理精子,以冷冻前、解冻后精子活力和质膜完整性,解冻后精子进行体外受精(IVF)的卵裂率和囊胚率等作为检测指标,同时以含有卵黄的Tris-柠檬酸-葡萄糖(Tris-citric acid-glucose,TCG)冷冻基础液作为对照研究精浆对猪冷冻精子的保护作用。结果显示,在含有10%精浆浓度的稀释液中,冷冻前质膜完整性,解冻后精子活率、质膜完整性、IVF囊胚率相对于对照组均显著提高(P<0.05);当含有10%精浆的冷冻精液解冻后用于人工授精时,与配母猪妊娠率、窝产仔数、窝产活仔数等仍显著低于鲜精授精组(P<0.05)。上述结果表明,含10%精浆的冷冻保护剂能提高精子的冷冻后活力和IVF胚胎发育率,但用于人工授精配种与鲜精相比还有一定差距。
- 刘彪逯心玉孔庆然苏兴盼何文腾胡魁刘忠华
- 关键词：猪精子精浆冷冻保存体外受精人工授精
- 基于线粒体DNA序列探讨中国紫貂的起源被引量：2
- 2011年
- 为了研究中国紫貂的起源,试验利用PCR方法和直接测序技术对中国境内分布的18只野生紫貂线粒体DNA控制区全序列进行了测定和群体分析。结果表明:所获得的7个单倍型序列长度介于1 073～1 134 bp之间,在保守序列区CSB1与CSB2之间存在AC串连重复序列,长度介于198～258 bp,这是导致紫貂线粒体控制区序列长度异质性的原因;序列中具119个碱基插入/缺失位点、2个颠换位点以及26个转换位点;其整体单倍型多样性(H)为0.880±0.045、核苷酸多样性(Pi)为0.039±0.004,种群总体遗传多样性水平较高。3个地理亚种间存在明显的遗传分化,尤其是长白山和阿尔泰亚种间FST(遗传分化指数)=0.989 49(P>0.01),种群间基因流极低(Nm=0.005);阿尔泰亚种、长白山亚种分别与大兴安岭亚种的个别种群存在较近的亲缘关系,该结论与紫貂化石证据结合即可推测出紫貂大兴安岭亚种是我国境内分布的3个紫貂种群中首先分化形成的,然后以大兴安岭为中心向南分化形成长白山亚种以及向西分化形成阿尔泰亚种。
- 徐纯柱张洪海马建章刘忠华
- 关键词：紫貂线粒体DNA控制区
- 猪源Lin28基因的克隆及其在猪胎儿成纤维细胞中的表达
- 2012年
- Lin28广泛地表达于早期胚胎中,是重编程的一个重要诱导因子。根据GenBank中公布的猪源Lin28的序列设计合成引物,以猪桑葚胚cDNA为模板,通过RT-PCR方法扩增其编码区全序列。将此克隆片段连接到PMXs表达载体上,构建逆转录病毒载体PMXs-Lin28。在293T细胞中包装携带Lin28基因的逆转录病毒,感染猪如猪胎儿成纤维细胞(Porcine embryonic fibroblasts,PEF)。免疫荧光及Real-time结果显示,PMXs-Lin28载体能够介导Lin28 mRNA和蛋白质在猪胎儿成纤维细胞中的高效表达,Lin28基因能够激活Oct4、Sox2、Nanog、Klf4和c-Myc基因的表达。
- 刘忠华韩小娇张鑫淼王娟牟彦双何文腾黄天晴孔庆然姜丹丹丛义梅尹智
- 关键词：成纤维细胞过表达
- 猪VHL基因克隆及敲低克隆胚胎的构建被引量：1
- 2013年
- 通过在细胞和胚胎水平对猪Von Hippel-Lindau(VHL)基因进行了基因敲低研究,以便为建立VHL疾病模型猪奠定基础。研究首先通过3 RACE和5 RACE克隆得到猪VHL基因cDNA全长序列(2 725 bp),Real-time PCR结果表明VHL基因广泛表达于猪的各种组织器官,其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达。进一步在猪iPS细胞中对5条干扰片段进行筛选,获得2条高效的干扰片段,干扰效率分别达到72%(P=0.0012)和64%(P<0.01)。以稳定干扰VHL基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体,构建克隆胚胎,结果表明,克隆胚胎的发育能力与对照组相比没有明显差异,而且在克隆囊胚中VHL基因的干扰效率达到71%(P<0.01)。综上所述,文中获得了猪VHL基因全长序列并获得该基因稳定敲低的猪细胞和胚胎,从而为VHL疾病模型猪的构建奠定了良好的基础。
- 金红红王健宇王芳马婧牟彦双刘忠华
- 关键词：VHL基因RNA干扰
- 一种猪冻精解冻稀释液及其配制方法
- 一种猪冻精解冻稀释液及其配制方法，本发明属于猪冻精解冻技术领域。本发明要解决的技术问题是猪冷冻精液在解冻稀释过程中极易发生精子的氧化损伤。本发明的组分：D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚...
- 翁晓刚牟彦双张宇霆蔡铭铭宋健刘忠华
- 文献传递
