刘宪楚
- 作品数：8 被引量：2H指数：1
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金湖南省自然科学杰出青年基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 斑马鱼ISL1蛋白多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的为了进一步研究ISL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体。方法根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达。经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的his-ISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价。结果获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体。结论本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础。
- 任恋唐超刘宪楚李容戴悦彭佩莹莫小阳
- 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体
- H1N1流感病毒感染心肌细胞对Wnt信号途径的影响
- 为了揭示流感病毒H1N1通过Wnt信号调控心肌炎发生的致病机制,我们建立了A/PuertoRico/8/34(H1N1)流感病毒感染H9C2细胞模型,采用灭活的病毒感染H9C2细胞系作为对照组,通过细胞组织学形态和RT-...
- 刘宪楚陈则吴秀山莫小阳唐超任恋李容史艳江志钢常海燕方芳李永青
- 果蝇Domeless蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备研究
- 2013年
- 在果蝇(Drosophila melanogaster)的研究中发现Domeless接受器参与发育期间的JAK/STAT信号调节,在心脏疾病的发生机制中发挥重要作用.为了克隆Domeless,我们利用生物信息学选择果蝇Domeless基因抗原亲水区,将扩增出的PCR片段克隆到原核表达pET-28a载体中,转入E.coli(Escherichia coli)中后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogalactoside)诱导融合蛋白表达,Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,纯化后的His-Domeless融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.用Western blot检测抗体的效价和特异性.获得了Domeless原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗Domeless多克隆抗体,为后续Domeless功能研究奠定了基础.
- 唐超任恋刘宪楚李容江志钢赵阳廖四芳袁佳佳莫小阳吴秀山
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- 心脏Nmnat过表达联合耐力运动对果蝇高脂膳食诱发脂毒性心肌症的影响
- 2020年
- 利用UAS/hand-gal4系统构建果蝇心脏Nmnat基因特异性过表达,研究心脏Nmnat基因过表达联合耐力运动对高脂膳食诱发脂毒性心肌症的影响,并分析其分子机制。方法:雄性w^1118和NmnatUAS系果蝇分别与雌性hand-Gal4杂交,收集F1代心脏Nmnat正常表达(hand>w^1118)和过表达(hand>Nmnat)处女蝇,饲养至15 d后开始进行耐力运动(E)和高脂膳食(HFD),并分为hand>w^1118、hand>w^1118+E、hand>w^1118+HFD、hand>w^1118+HFD+E、hand>Nmnat、hand>Nmnat+E、hand>Nmnat+HFD、hand>Nmnat+HFD+E共8组,每组410只。ELISA检测心脏TAG、NAD+、SIR2蛋白去乙酰化、SOD活力和MDA水平,qRT-PCR检测心脏相关基因mRNA表达,M-mode检测心脏功能情况。结果:hand>w^1118+HFD+E果蝇心脏的Nmnat、dFoxo、bmm表达、NAD+水平、SIR2去乙酰化、SOD活力、缩短分数高于hand>w^1118+HFD(P<0.05或P<0.01),且d FAS和Col4al表达、TAG和MDA水平、心率和纤维性振颤低于hand>w^1118+HFD(P<0.05或P<0.01);hand>Nmnat果蝇心脏各指标与hand>Nmnat+HFD相比较未见显著差异(P>0.05);hand>Nmnat+HFD+E果蝇心脏的Nmnat、dFoxo、bmm表达、心脏NAD+水平、SIR2去乙酰化、SOD活力、心脏缩短分数高于hand>Nmnat+HFD(P<0.05或P<0.01),且dFAS和Col4al表达\TAG和MDA水平、心率和纤维性振颤低于hand>Nmnat+HFD(P<0.05或P<0.01)。结论:心脏Nmnat过表达和耐力运动均能抵抗果蝇高脂膳食诱发的心脏脂质过度堆积、氧化损伤、减弱心脏收缩能力和增加纤维性振颤,其分子机制与心脏Nmnat/NAD+/SIR2/dFoxo通路活性增强有关。心脏Nmnat基因过表达联合耐力运动能更好地降低脂毒性心肌症的发生概率,其机制与二者联合对心脏Nmnat/NAD+/SIR2/dFoxo通路活性上调的叠加作用有关。
- 文登台郑澜陆凯刘宪楚后文其
- 关键词：高脂膳食
- 心脏发育候选基因PYGO1 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定
- 2012年
- 利用RNA干扰技术构建PYGO1基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒(pSUPER-PYGO1)。首先,针对PYGO1 cDNA序列设计并化学合成一对编码短发夹RNA序列,经退火插入到由BglⅡ和XhoⅠ酶切的pSU-PER质粒上构建重组RNAi质粒pSUPER-PYGO1。通过XbaⅠ酶切鉴定及测序分析验证构建效果,将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞系H9c2建立产生逆转录病毒的细胞克隆。通过RT-PCR和Western blot检测pSU-PER-PYGO1对H9c2细胞中PYGO1 mRNA和PYGO1蛋白的干扰效果。pSUPER-PYGO1质粒经酶切鉴定及测序分析,发现59nt寡核苷酸成功插入到预计位点,且序列完全一致;RT-PCR和Western blot检测结果显示转染pSUPER-PYGO1的细胞中PYGO1 mRNA和PYGO1蛋白量明显降低。因此,靶向PYGO1的pSUPER RNAi载体构建成功,为进一步从分子水平探讨PYGO1在心脏发育中的功能奠定了基础。
- 刘明刘宪楚周军媚谢华平廖四芳宋文李佑锋吴秀山王跃群
- 关键词：RNA干扰PSUPERH9C2
- 利用切片免疫荧光技术研究Tbx5在小鼠胚胎心脏中的表达
- 2014年
- Tbx5参与转录因子的调控,对上肢及心脏发育起关键作用.通过对小鼠胚胎心脏组织切片厚度的选择、加入抗原修复液等试验条件的优化,建立了利用切片免疫荧光技术检测小鼠胚胎心脏中Tbx5的方法.结果显示,在胚胎发育的第11.5 d,Tbx5在整个心脏中都有表达,尤其在心房以及左心室中高表达.但在胚胎发育的第13.5 d,Tbx5只在心房和左心室中表达,在右心室中并不表达.揭示Tbx5的这种动态表达模式对于心脏的发育以及腔室分化是十分重要的.
- 李容刘宪楚史艳周万邦曹灵慧李海文谭智勇唐超任恋吴秀山莫小阳
- 关键词：胚胎心脏
- Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染H9c2细胞系的构建
- 2011年
- 运用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)构建pSUPER.retro-Smyd1真核表达质粒,经鉴定后用脂质体法转染H9c2细胞,通过G418筛选出稳定表达pSUPER.retro-Smyd1的细胞系,最后经Western blot及RT-PCR实验鉴定其干扰效果。经鉴定,通过H9c2细胞系构建的pSUPER.retro-Smyd1干扰细胞系的干扰效果显著。因此,本实验成功构建了Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染的H9c2细胞系,为进一步研究Smyd1基因在心脏发育中的作用奠定了良好的实验基础。
- 李帆廖四芳刘华友鲁建鑫刘宪楚刘明吴秀山李永青
- 关键词：RNAI技术SIRNA稳定转染
- 染色体4q25区域rs2200733多态性与房颤相关性的Meta分析被引量：1
- 2017年
- 目的系统评价染色体4q25区域rs2200733多态性与房颤的关联。方法通过检索中英文数据库查找已发表的rs2200733与房颤易患性关系的病例对照研究,应用Rev Man5.3软件对符合要求的研究进行Meta分析。结果共纳入9篇研究文献,共计病例3 210例,对照5 070例。Meta分析结果显示:rs2200733多态性相关的T等位基因是房颤发生的风险因素[T vs C:OR=1.64,95%CI 1.32-2.05,P<0.000 1;TT vs CC:OR=2.83,95%CI 1.94-4.11,P<0.000 01;TC vs CC:OR=1.73,95%CI 1.28-2.34,P=0.000 4;TT vs TC+CC:OR=1.95,95%CI 1.33-2.86,P=0.000 6]。结论 4q25区域rs2200733多态性与房颤发病风险相关,T等位基因携带者遗传易感性较高。
- 刘明张新刘宪楚
- 关键词：房颤META分析
