刘东
- 作品数：52 被引量：242H指数：9
- 供职机构：上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目上海市科学技术委员会资助项目上海市农科院青年科技发展基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猪卵母细胞冷冻保存研究被引量：14
- 2006年
- 目的本研究试图通过比较猪卵母细胞超低温冷冻保存方法、冷冻承载工具、冷冻卵母细胞的类型,从而有效地保存猪卵母细胞;方法利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞,以台盼蓝染色、二乙酸荧光素(FDA)染色鉴定卵母细胞冷冻后的成活率,以体外成熟和体外受精鉴定卵母细胞冷冻后的发育能力,研究了不同冷冻方法和不同冷冻保护剂对猪卵母细胞的冷冻效果。结果(1)程序化法冷冻保存中,9%乙二醇(EG),10%二甲基亚砜(DMSO),10%甘油(Gly)均对猪MII期卵母细胞有冷冻保护作用,极显著高于对照组(FDA染色成活率33.8%,25.8%,23.5%vs2.5%,P<0.01),且以9%EG的效果最好,显著高于另外两组(33.8%vs25.8%,23.5%,P<0.05)。(2)玻璃微细管(GMP)法是猪卵母细胞超低温冷冻的较好方法,以普通的麦管(Straw)法进行的程序化冷冻为对照组,GMP管法显著提高猪卵母细胞的冷冻成活率(分别为63.3%和34.5%,P<0.05)。(3)在玻璃化冷冻方法中,不同的冷冻液载体对猪卵母细胞冷冻成活率有影响。以EFS40为冷冻液,Straw和GMP管作冷冻液载体,卵母细胞的成活率分别为45.0%和65.9%,二者差异显著(P<0.05)。(4)用Straw的程序化冷冻法和用GMP管的玻璃化冷冻法对猪GV期卵母细胞冷冻均有效,但二者差异显著(成活率分别为30.0%和59.7%,P<0.05)。冷冻后继续培养,分别有2.8%和6.3%的卵母细胞周围颗粒层发生扩散。(5)冷冻对MII期卵母细胞的发育潜能影响较大,用新鲜精液使其受精,仅有4.9%的受精卵分裂,极显著低于对照组的49.5%(P<0.01);发育至4-细胞期的比例为1.7%,但未能发育至8-细胞期以上胚胎。结论选用MⅡ期卵母细胞、以GMP管为冷冻承载工具、应用玻璃化冷冻方法能够较好地保存猪卵母细胞,为进一步完善猪卵母细胞超低温冷冻保存技术体系提供了参考依据。
- 张德福朱良成刘东芮荣汤琳琳项智峰
- 关键词：卵母细胞冷冻保存体外受精
- 猪胚胎冷冻保存方法及用途
- 本发明公开了一种玻璃化冷冻猪胚胎的方法，其中使用玻璃微细管作为冷冻胚胎的承载工具，所述的玻璃微细管至少有一端的内径为0.1－1mm，这种冷冻方法成本低，成功率高。本发明还公开了由此方法所获得的猪胚胎及其用途。
- 张德福刘东吴华莉
- 文献传递
- 已糖对猪卵母细胞体外成熟及体外受精后囊胚发育能力的影响
- 2006年
- 以NCSU-37为基础培养基,观察了葡萄糖、果糖和乳糖3种已糖对猪卵母细胞体外成熟和体外受精能力的影响,结果:①与浓度2.51、0.0 mmol/L比较,葡萄糖或果糖浓度为5.5 mmol/L时,猪卵母细胞MII期成熟率较高(P<0.05);而不同浓度的半乳糖对MII期成熟率无明显影响。②猪成熟卵母细胞体外受精后,葡萄糖或果糖组囊胚率分别为8.6%和8.2%,显著高于对照组及半乳糖组2.9%和9.2%(P<0.05);但对囊胚进行地衣红压片显示,果糖组囊胚质量达到A级率为43.2%(10/23),显著高于葡萄糖组24.3%(6/25)。研究表明,果糖对于猪卵母细胞的体外成熟及体外生产高质量囊胚效果较好。
- 项智锋张德福张金洲刘东张似青苏建民
- 关键词：卵母细胞体外受精
- 不同收集方法对猪卵母细胞体外成熟培养的影响被引量：27
- 2003年
- 本实验就猪卵母细胞的三种采集方法 :抽吸法、剖解法和机械破碎法进行了对比研究。结果表明 :(1)机械破碎法所采集细胞数目显著高于剖解法 (P <0 .0 5 ) ,剖解法显著高于抽吸法 (P <0 .0 5 ) ;而所用时间则与此相反 (P<0 .0 5 )。 (2 )A级卵母细胞的比例在剖解法中显著高于抽吸法 (P <0 .0 5 ) ,同时抽吸法也显著高于机械破碎法 (P <0 .0 5 )。机械破碎法采集的B级细胞比例显著高于其余两法 (P <0 .0 5 ) ;抽吸法所采集的C级细胞也显著高于其余两法 (P <0 .0 5 )。 (3)剖解法中卵丘扩散率要显著高于其它两法 (P <0 .0 5 ) ;而机械破碎法中第一极体排出率要显著低于另两法 (P <0 .0 5 )。
- 陈晓宇刘东李青旺张德福
- 关键词：卵母细胞体外成熟培养
- 猪精液冷冻技术研究进展被引量：11
- 2006年
- 概述了猪精液冷冻的研究历史、冷冻损伤机理,并从稀释液添加剂、冷冻保存承载工具、精子密度、精子冷冻种间差异和个体差异等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素,介绍了解冻后精子质量的检测方法,探讨了猪精液冷冻中存在的问题并进行了展望。
- 李林林吴华莉刘东张德福马恒东
- 关键词：精液冷冻冷冻损伤
- 不同收集方法对猪卵母细胞体外成熟培养的影响
- 本实验就猪卵母细胞的三种采集方法:抽吸法、剖解法和机械破碎法进行了对比研究.结果表明,1)机械破碎法所采集细胞数目显著高于剖解法(P<0.05),剖解显著高于抽吸法(P<0.05);而所用时间则与此相反(P<0.05)....
- 刘东汤琳琳张德福陈晓宇
- 关键词：卵母细胞体外成熟培养
- 文献传递
- 地方猪种种质资源长期保存技术研究进展被引量：9
- 2005年
- 概述了我国地方猪种资源概况及保种的迫切性,冷冻保种研究现状及地方猪种种质资源长期保存的主要技术,包括猪种配子和胚胎冷冻技术、基因组DNA库、猪EG细胞、猪体细胞克隆技术及其在长期保存种中的作用。
- 张德福刘东汤琳琳张宏江闻人楚芮荣
- 关键词：体细胞克隆
- 猪卵巢卵母细胞的收集和体外成熟培养被引量：12
- 2002年
- 实验对猪卵母细胞的采集和体外成熟培养(IVM)以及培养液进行研究。结果表明,在卵母细胞的采集过程中,机械破碎法平均每个卵巢所获得的A、B级细胞数(7.00,20.50)要显著多于抽吸法(1.48,2.73)(P<0.05)。但抽吸法中平均每个卵巢所用的时间(1.05min)却显著少于机械破碎法(15.6min)(P<0.05)。NCSU-23与TCM-199两种培养液对卵母细胞体外成熟率无显著差异(P>0.05)。添加10μg/LrpGH比20μg/LrpGH更有利于卵母细胞的成熟(71.5%,45.5%),两者差异显著(P<0.05)。
- 陈晓宇刘东李青旺张德福李震于瑞嵩刘惠莉
- 关键词：卵巢卵母细胞体外成熟培养
- 猪细胞核移植中卵母细胞激活方法的研究进展被引量：3
- 2002年
- 猪的克隆 (核移植 )是当今的热点研究之一 ,研究意义重大。本文就猪核移植中卵母细胞的激活方法、原理及相关研究等作一综述。
- 刘东张德福
- 关键词：细胞核移植卵母细胞
- 猪核移植胚DNA甲基化改变与“印迹”基因表达特征研究
- 张德福刘红林刘东吴华莉戴建军汤琳琳李震于瑞嵩陈杰王峰刘惠莉周宗清
- （1）建立了猪核移植供体细胞培养技术 首先选定合适的猪核移植所需的体细胞。通过比较成纤维细胞、卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞等体细胞，表明成纤维细胞、卵丘细胞是较合适的供体细胞，取材方便，形成重构胚后囊胚发育率较高...
- 关键词：
- 关键词：核移植甲基化
