仲大莲 作品数:17 被引量:54 H指数:5 供职机构: 中国科学技术大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 安徽省“十五”科技攻关项目 安徽省高校省级自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 自动化与计算机技术 更多>>
新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建 被引量:9 2003年 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。 许发芝 仲大莲 余为一关键词:新城疫病毒 F基因 真核表达重组质粒 人工养殖河蟹体内菌群分布的调查 2000年 经分离鉴定 ,河蟹体内栖居的菌群主要有假单胞菌属、黄杆菌属、气单胞菌属、肠球菌属、爱德华氏菌属、不动杆菌属、粘球菌属、变形杆菌属、葡萄球菌属和奈氏球菌属 ,其分离率分别为 2 3 8%、2 0 2 %、1 2 8%、7 3%、6 4 %、4 6 %、4 6 %、3 7%、2 8%和 2 8%。动物实验表明 ,除假单胞菌属、气单胞菌属和爱德华氏菌属外 ,其他分离菌对小白鼠均无致死性 。 李槿年 仲大莲 祖国掌 余为一关键词:中华绒螯蟹 养殖河蟹 应用RACE法克隆鸽恒定链基因的研究 被引量:7 2008年 为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1050bp的全长cDNA。比较核苷酸序列,鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%,而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上;其中633bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明,分子结构与鸡恒定链相似,其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。 刘岗 仲大莲 刘雪兰 余为一关键词:RACE 克隆 新城疫病毒(DNV)HN基因真核表达重组质粒的构建 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得两株新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因cDNA,然后定向插入真核表达质粒pcDNA3中,构建了含HN基因的重组质粒。 首先,将NDV Lasota株和F48E9... 仲大莲关键词:HN基因 真核表达重组质粒 文献传递 同步测定鸡四种病毒技术的研究 余为一 董卫星 季学枫 李槿年 曹晋蓉 魏建忠 丁春水 朱敏 褚峰 李培英 李东风 姚淮平 李郁 曾明华 仲大莲 胡步荣 王桂军 该项目根据血清学原理,在抗原抗体制备工艺中,通过亲和层析和盐析等技术,处理抗原和抗体,保证了抗原抗体的质量,提高了其特异性和敏感性。在“条形酶标斑点法同步测定四种病毒抗原”诊断试剂盒中,把四种病毒抗体包被在同一硝纤维膜上...关键词:关键词:血清学 病毒抗原 诊断试剂盒 一种含多种病毒抗原表位的禽多价核酸疫苗制备方法 一种含多种病毒抗原表位的禽多价核酸疫苗制备方法,属疫苗制备技术领域。其所要解决的技术问题是:提供一种安全、高效,且只进行一次免疫,就能使动物同时获得抗多种病毒的特异性免疫能力的疫苗的制备方法。其技术要点:分离获得多种病毒... 余为一 仲大莲 李槿年文献传递 鸡新城疫病毒F蛋白部分表位基因的克隆表达及其免疫反应性 2008年 为研究NDV-F蛋白抗原表位在动物免疫应答中的作用特点,作者克隆和表达了NDV-F蛋白基因的部分片段,并检测其免疫反应性。首先根据F基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计了1对引物,以已克隆的NDV(F48E9株)的F基因为模板,通过PCR扩增获得长度为594 bp的片段。接着在电泳和酶切鉴定后将其定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-F594,并经PCR、双酶切及测序鉴定后,进一步将其转化到大肠杆菌BL21中。最后用IPTG诱导表达,提取物用SDS-PAGE和W estern-b lotting分析。结果表明,该基因片段表达的融合蛋白大小约为46 000,以包涵体形式存在,并具有良好的免疫反应性。 沈艳 余为一 仲大莲关键词:新城疫病毒 F基因 免疫反应性 鸡Ii基因的克隆、鉴定及其原核表达 被引量:2 2003年 从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中提取总RNA,用自行设计的一对引物通过RT-PCR方法扩增出鸡恒定链(invariantchain,Ii)基因片段。经酶切鉴定后,再将该片段克隆到pcDNA3载体中,测定其DNA序列,结果表明该片段长度为669bp,其DNA序列与GenBank登录的基本一致。再将该片段插入原核表达载体PGEX-4T-1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS-PAGE,获得分子量约为50kD的特定蛋白条带,表明所克隆的鸡Ii基因在原核细胞中得到表达。 刘玉华 仲大莲 许发芝 余为一关键词:II基因 克隆 原核表达 禽类Ii基因的克隆、表达及其功能的初步研究 Ii链是一种非多态性的Ⅱ型跨膜蛋白,在调节MHC Ⅱ类分子的表达和功能方面发挥重要作用。人类和小鼠的Ii基因都是单拷贝基因,其mRNA都能够以不同的拼接模式产生不同形式的Ii链异构体。但是禽类Ii链是否存在异构体还未见报... 仲大莲关键词:禽类 基因克隆 基因表达 异构体 文献传递 新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建 被引量:10 2002年 应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-HN基因片段。 仲大莲 余为一 刘兢 李向明 郭霄峰关键词:新城疫病毒 HN基因 免疫 真核表达重组质粒 NDV 禽病