于江天
- 作品数：12 被引量：11H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学经济管理更多>>
- 促炎分子盘状结构域受体2在泛素化修饰过程中与泛素分子的偶联方式
- 2015年
- 目的研究泛素分子中哪些位点的赖氨酸(Lys)残基参与了具有促炎效应的膜受体盘状结构域受体2(DDR2)的多聚泛素化修饰。方法将DDR2、Cbl-b及泛素分子不同位点Lys的突变体共转染HEK293T细胞,以胶原蛋白刺激细胞诱导DDR2发生活化。利用免疫沉淀方法分离细胞中的DDR2,Western blot法检测DDR2与不同泛素分子的偶联情况。结果仅保留27位Lys的泛素分子偶联到DDR2分子上的能力与野生型泛素分子相接近,保留33位Lys的泛素分子有较微弱与DDR2偶联的能力。27位Lys突变可使泛素分子彻底丧失与DDR2相偶联的能力,而33位Lys突变使得泛素分子偶联DDR2的能力部分丧失。结论 Cbl-b介导的DDR2的多泛素化修饰主要是通过泛素分子的Lys27偶联的,Lys33可能也部分参与了DDR2的泛素化修饰。
- 于江天卜歆赵虎李霞苏金
- 关键词：盘状结构域受体2泛素化泛素泛素连接酶CBL-B
- E3泛素连接酶Cbl-b对白细胞介素1诱导细胞效应的负调控作用
- 2015年
- 本研究旨在探讨E3泛素连接酶Cbl-b对滑膜细胞中白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)信号通路的影响。采用Western blot方法检测Cbl-b基因缺失小鼠滑膜细胞中Cbl-b及IL-1诱导的基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)的表达水平。胶原底物与滑膜细胞培养上清进行共孵育后通过SDS-PAGE分析胶原的降解情况。结果显示,与野生型相比,Cbl-b基因敲除的小鼠滑膜细胞在IL-1刺激条件下表达更多的MMP-13,且培养上清具有更强的降解胶原的能力。这些结果提示,Cbl-b对IL-1诱导的细胞效应具有负调控作用。
- 于江天卜歆赵虎苏金
- 关键词：CBL-B泛素连接酶白细胞介素1基质金属蛋白酶13滑膜细胞
- 生物化学与分子生物学实验教学探讨被引量：2
- 2006年
- 针对生物化学与分子生物学的实验教学中遇到的问题，分别从调动学生积极性、实验安排、实验内容等方面，提出了几点建议，对实验课的考核及课后总结提出了设想，初步探讨医学院校实验教学改革的新思路。
- 于江天苏金
- 关键词：生物化学实验教学教学方法
- GFR/DDR2嵌和受体的构建和稳定表达的鉴定
- 2004年
- 目的 :将一在细胞膜表面不表达或低表达的受体胞外区与盘状结构域受体 2 (DDR2 )的胞内区融合 ,构建一嵌和DDR2受体 ,避免在活化此受体的同时激活与DDR2有相同配体的受体介导的信号通路 ,为探索DDR2介导的胞内信号途径奠定基础 .方法 :采用PCR扩增和限制性酶切的方式 ,将表皮生长因子受体 (EGFR)的胞外区与DDR2的跨膜及胞内区进行融合并稳定转染EGFR低表达的 2 93细胞 ,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪检测嵌和受体在膜表面的表达状况 .结果 :成功构建了EGFR/DDR2嵌和表达载体 ;筛选到稳定表达此嵌和受体的 2 93细胞株 .结论 :融合并稳定表达了EGFR/DDR2嵌和受体 .
- 苏金于江天王吉村史曼朱玲张健刘新平药立波
- 关键词：金属蛋白酶类基因表达
- 抽象概念不应成为基础医学教育的障碍
- 2015年
- 以分子生物学教学方法为例,针对医学知识的抽象和枯燥、医学院校本科生学习热情不高等现状,提出在理论学习之前介绍基本理论的实践应用价值;通过生动的比喻使抽象概念具体化;加强介绍重要理论和概念出现的过程的方法。上述方法有利于激发学生的学习兴趣,培养学生科学的思维方式。
- 于江天苏金
- 关键词：分子生物学教学思维方式
- DDR2/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2007年
- 目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得重组表达载体DDR2/Fc-pcDNA3.1(-);采用脂质体转染技术转染HEK293细胞;RT-PCR、免疫印迹检测融和蛋白的表达.结果:DNA测序和限制型酶切鉴定证明两段基因正确克隆至pcDNA3.1(-)的多克隆位点,细胞裂解物中检测到融合蛋白的表达,其分子质量与预期大小一致,该融合蛋白能正确表达于HEK293细胞中.结论:成功构建了DDR2/Fc融和表达载体,表达了融合蛋白.
- 张燕王保莉苏金车红磊于江天刘新平
- 关键词：盘状结构域受体2FC
- SPARC通过竞争性结合胶原蛋白抑制DDR2的活化
- 2013年
- 目的探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)是否与盘状结构域受体2(DDR2)竞争性结合胶原蛋白,并观察SPARC对DDR2磷酸化水平的影响。方法采用转染小干扰RNA的方法下调人前列腺癌细胞PC-3中DDR2的表达,观察对该细胞中SPARC mRNA表达水平的影响。在HEK293T细胞中同时过表达SPARC和DDR2,在有无胶原蛋白刺激的情况下,通过免疫沉淀及Western blot法检测DDR2磷酸化水平的变化。结果下调DDR2会引起SPARC mRNA和蛋白表达水平显著下降;而SPARC能够抑制胶原蛋白刺激的DDR2磷酸化。结论 SPARC很可能通过竞争性结合胶原蛋白来抑制DDR2的活化。
- 卜歆于江天张淑雅赵虎苏金
- 关键词：DDR2SPARC胶原蛋白细胞外基质
- 人p65和IκBα基因真核表达载体的构建及在永生化滑膜细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建人p65和IκBα基因的真核表达载体并检测其在人永生化滑膜细胞MH7a中的表达.方法应用RT-PCR方法从体外培养的HEK293细胞mRNA中扩增出p65和IκBα基因的编码区,克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1myc/His(-)A,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染MH7a细胞,WesternBlot检测p65和IκBα的表达.结果测序证实PCR扩增得到的p65和IκBα基因编码区序列正确;脂质体法转染MH7a细胞后检测到预期目的蛋白的表达.结论成功构建了p65和IκBα的真核表达载体并使其在人永生化滑膜细胞中表达.
- 程欣王立峰张健刘娜苏金于江天刘新平
- 关键词：P65IΚBΑ逆转录聚合酶链反应
- DDR2与MMP-13表达相关性在RA关节软骨破坏中作用的初步研究
- 关节滑膜组织的过度增生和对软骨的侵蚀是类风湿性关节炎/(RA/)关节软骨破坏和关节畸形的直接原因。我们前期的研究表明，盘状结构域受体激酶/(Discoidin Domain Receptor 2，DDR2/)在RA成纤维...
- 于江天
- 关键词：盘状结构域受体2基质金属蛋白酶13滑膜细胞
- 文献传递
- 盘状结构域受体2与EGFP融合载体的构建及细胞中的活性分析
- 2006年
- 目的:寻找使盘状结构域受体2(DDR2)在细胞内的表达情况易于检测并能动态追踪其蛋白表达分布的途径方法:采用PCR技术扩增获得DDR2编码区无终止码序列通过限制性酶切将DDR2片段亚克隆入pEGFP-N3载体中,转染293T细胞后通过倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,并用免疫印迹技术检测融合载体的表达及胶原刺激后活化状况.结果:成功构建了DDR2/EGFP融合表达载体,进一步的分析也证明此融合表达载体能在细胞中正确表达并可以被配体所激活.结论:DDR2/EGFP的成功构建及可进一步检测磷酸化,为深入研究DDR2的功能奠定了基础.
- 于江天苏金任婷婷刘新平
- 关键词：盘状结构域受体2EGFP磷酰化
