乐亮
- 作品数：16 被引量：64H指数：5
- 供职机构：中国中医科学院中医药信息研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新的延胡索酸水合酶抗体的制备及功能研究
- 2013年
- 延胡索酸水合酶(fumarate hydratase,FH)是三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA)中的一个关键性酶。FH的基因突变将导致延胡索酸合酶缺乏症、遗传性平滑肌瘤和肾细胞癌(hereditary leiomyomatosis and renal cell carcinoma,HLRCC)等疾病。FH缺失导致HLRCC分子的确切生物学机制尚不明确。作者将FH基因片段克隆到原核表达载体上,在大肠杆菌中表达GST-FH(400-510)融合蛋白。该融合蛋白为抗原免疫小鼠获得抗体,通过免疫印迹实验证明了该抗体的特异性并发现FH在心脏和肝脏中的含量较高。通过免疫共沉淀实验发现,在大鼠肝脏组织中FH可能与多个蛋白形成蛋白复合物。
- 付美红乐亮成钟谢勇高海钱火连李海涛胡克平
- 关键词：多克隆抗体免疫印迹免疫共沉淀
- 米诺环素抑制MPP^+诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤被引量：6
- 2011年
- 目的:探讨米诺环素(minocycline)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤的保护作用。方法:将MPP+加入体外培养的的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元凋亡模型,实验过程中用minocycline进行预处理,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞存活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,DCFH-DA检测ROS聚集,JC-1检测细胞线粒体膜电位变化。结果:0.5 mmol/L MPP+处理PC12细胞24 h,能明显抑制细胞生长(抑制率80.8%),诱导细胞发生凋亡(凋亡率5.22%),同时ROS浓度提高230.0%,线粒体膜去极化(绿/红荧光强度比为11.95)。而加入10μmol/L minocycline预处理30 min可明显升高MPP+处理的PC12细胞活性,细胞凋亡率明显降低(P<0.01),ROS浓度明显下降,绿/红荧光强度比也明显降低(P<0.01)。结论:Minocycline抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡部分通过对抗其线粒体功能而发挥作用。
- 乐亮李晶洁黎仕锋朱文博束敏峰苏兴文邱鹏新颜光美
- 关键词：米诺环素PC12细胞线粒体功能损伤
- 帕金森病的研究现状被引量：4
- 2009年
- 帕金森病(PD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,病理特征主要是黑质多巴胺能神经元的变性死亡。本文对PD的历史发展、基底节神经传导通路、病理生理机制、病因学说和治疗进展进行系统的阐述。
- 乐亮黎仕锋王有琼杨小晓
- 关键词：帕金森病基底节多巴胺线粒体功能障碍
- 米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导C57BL/6小鼠行为学损伤的抑制作用研究
- 2016年
- 目的探讨米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL/6小鼠的行为学损伤的保护作用及其机制。方法通过MPTP腹腔注射C57BL/6小鼠建立帕金森病亚急性模型。40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照(control)组,模型(MPTP)组,治疗(MPTP+Mino)组和米诺环素阴性对照(Mino)组,每组10只。分别采用游泳、爬杆和自主活动计数实验检测小鼠的运动行为能力。并采用HPLC测定中脑多巴胺(DA)、二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果治疗组游泳评分,爬杆评分和自主活动能力明显高于模型组(P<0.01)。且治疗组的中脑DA、DOPAC和HVA的含量明显高于模型组(P<0.01)。结论米诺环素对MPTP所致的小鼠运动功能损伤具有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制MPTP所致的小鼠多巴胺神经元的损伤而起作用。
- 姜保平乐亮彭勇许利嘉何春年肖培根
- 关键词：米诺环素C57BL/61-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶游泳实验
- Rett综合征相关基因MeCP2敲除大鼠模型的构建及分析被引量：3
- 2016年
- MeCP2(Methyl CpG binding protein 2)基因突变可导致Rett综合征(Rett syndrome,RTT)。目前已报道的MeCP2敲除小鼠表型与RTT病人症状存在显著差异。为探索MeCP2在脑发育中的作用及其导致RTT的机制,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了MeCP2基因敲除大鼠模型。通过构建靶向敲除MeCP2基因的载体,体外将Cas9 mRNA和sgRNA显微注射到SD大鼠受精卵中,在MeCP2基因exon2中造成移码突变,从而获得MeCP2基因敲除大鼠。利用测序和Westernblotting方法鉴定MeCP2敲除大鼠,并对其表型和行为学特征进行分析,发现MeCP2敲除大鼠体重降低,存在焦虑倾向和认知缺陷。本研究成功构建了MeCP2基因敲除大鼠模型,其表型类似人类RTT患者的症状,为后续MeCP2功能研究提供了更好的动物模型。
- 翟伟胡宏秀乐亮庄峰峰王克柱赵英王凯刘新民孙迪安王晓英匡世焕胡克平
- 关键词：MECP2SD大鼠模型RETT综合征
- 藤茶主要成分对胰岛素抵抗HepG2细胞内氧化应激水平的影响被引量：7
- 2015年
- 目的:探讨藤茶主要成分,二氢杨梅素、没食子酸、二氢槲皮素、杨梅素及杨梅苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗及细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)、三磷酸腺苷(ATP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。方法:将HepG2细胞分为正常对照组、胰岛素抵抗模型组和样品干预组。用高糖(55 mmol·L-1)诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型,用MTT法检测样品对HepG2细胞增殖的影响;用葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖的含量;用分光光度法检测细胞内MDA、LD含量及SOD、CAT活性;用荧光酶标仪检测细胞内ROS和ATP水平。结果:五个化合物在有效浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响;样品干预组葡萄糖消耗量较模型组显著升高;与模型组相比,五个化合物某个或某几个浓度组显著降低细胞内MDA含量,提高SOD、CAT活性及ATP水平;没食子酸、二氢槲皮素和杨梅苷显著降低细胞内ROS水平;除二氢杨梅素外,其余四个化合物均能降低细胞内LD含量。结论:胰岛素抵抗HepG2细胞与对照组细胞相比有较高的氧化应激水平,抗氧化能力减弱。藤茶主要成分能通过降低细胞的氧化应激水平,增加细胞的抗氧化能力,从而预防胰岛素抵抗。
- 潘慧敏姜保平乐亮肖伟许利嘉肖培根
- 关键词：藤茶HEPG2细胞胰岛素抵抗氧化应激
- Wnt信号通路在肝纤维化中的作用被引量：5
- 2010年
- 肝纤维化是多种慢性肝病进展至肝硬化的中间过程,特征为以胶原蛋白为主的细胞外基质合成与降解失衡,是多条细胞信号转导通路和一系列细胞信号分子网络共同控制的结果。Wnt信号通路包括经典通路和非经典通路,参与调控细胞的分化,癌变,凋亡,机体免疫及应激等生理病理过程。最近有研究表明Wnt信号通路与肝星状细胞的活化及肝纤维化的发生相关。本文就Wnt通路的组成分子,信号转导路径,在肝纤维化发展中的作用做简要综述。
- 黎仕锋乐亮杨小晓李晶洁
- 关键词：肝纤维化WNT信号通路
- 中药蛋白质组学研究策略被引量：20
- 2016年
- 蛋白质组学在中药研究中的应用已十分广泛,有许多较为成功的实例。作者回顾了前人应用蛋白质组学技术对中药复杂体系的研究工作,并提出建立一门专门针对中药研究的蛋白组学,即中药蛋白质组学。该文对中药蛋白质组学的研究策略及未来的研究方向进行了综述和思考,希望为从事中药蛋白质组学研究者提供一点思路。
- 乐亮姜保平徐江胡克平陈士林
- 关键词：生物信息学蛋白质相互作用
- 紫铆因通过抑制p53信号通路对抗丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡被引量：4
- 2018年
- 目的探讨紫铆因对丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用不同剂量的紫铆因预处理1 h后,1.5 mmol·L^(-1)丙酮醛诱导PC12细胞凋亡,MTT及LDH比色法分析细胞存活率及细胞毒性;PI及Hoechst 33342双染法分析细胞凋亡及坏死;逆转录PCR检测促凋亡基因p53、caspase-9和抗氧化基因SOD2的表达;免疫印迹法检测p53、caspase-9的蛋白表达。结果不同剂量的紫铆因预处理PC12细胞1 h后,可明显对抗丙酮醛引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,减少细胞核固缩、碎裂,抑制促凋亡基因p53、caspase-9的过表达,提高抗氧化基因SOD2的表达。结论紫铆因能明显对抗丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡,作用机制与其抗氧化活性,降低促凋亡基因p53、caspase-9的表达有关。
- 乐亮徐江徐江姜保平许利嘉胡克平陈士林
- 关键词：丙酮醛PC12细胞凋亡P53CASPASE-9
- 石胆酸诱导的LO2细胞胰岛素抵抗模型及其应用
- 2019年
- 目的利用石胆酸刺激人正常肝细胞(LO2)建立胰岛素抵抗模型,并用于筛选具有改善胰岛素抵抗降血糖活性的化合物。方法用不同浓度石胆酸(LCA)处理LO2细胞不同时间。通过MTT法检测细胞活性,并用不同浓度胰岛素刺激细胞,采用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为光学探针检测细胞的葡萄糖摄取能力,明确建立稳定的LO2细胞胰岛素抵抗模型所需LCA的最适浓度及时间。Western blot检测LCA对胰岛素信号通路关键蛋白:磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)表达的影响。模型建立后,以二甲双胍为阳性药,对5种黄酮类化合物奥卡宁、异奥卡宁、马里苷、黄诺马苷、紫铆因及1种环烯醚萜类化合物梓醇,进行改善胰岛素抵抗降血糖活性筛选,以2-NBDG荧光标记葡萄糖法评估细胞糖摄取情况,以MTT法评估细胞存活率。结果 LCA作用于LO2细胞可显著降低细胞糖吸收,并产生明显的胰岛素耐受,而25μmol·L^(-1) LCA作用于LO2细胞24 h,模型稳定性最好。与对照组相比,12.5和25μmol·L^(-1) LCA组IRS1的蛋白磷酸化水平显著降低(P <0.05),且12.5和50μmol·L^(-1) LCA能明显减少AKT蛋白的磷酸化水平(P <0.01)。活性筛选发现,奥卡宁、异奥卡宁及紫铆因均能显著提高细胞糖摄取能力,并且其改善细胞胰岛素抵抗降血糖活性显著优于阳性药二甲双胍。结论 LCA可诱导LO2细胞建立稳定、可靠的胰岛素抵抗模型并用于药物筛选。
- 吕秋月项佳媚乐亮姜保平姜保平陈四保许利嘉
- 关键词：胰岛素抵抗
