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谷明莉: 作品数：120 被引量：207H指数：7; 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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CD4^＋T细胞活化诱导细胞凋亡在原发性胆汁性肝硬化小鼠模型中的作用研究被引量：3: 2008年; 目的研究CD4^＋T细胞活化诱导细胞凋亡（activation induced cell death，AICD）在poly I：C诱导的原发性胆汁性肝硬化（研marybiliarycirrhosis，PBC）小鼠模型中的作用。方法30只C57BL／6雌性小鼠随机分为模型组和对照组，模型组小鼠腹腔注射poly I：C5mg／kg，对照组小鼠注射等体积无菌PBS，16周后通过测定血清抗线粒体抗体（antimitochondrial antibody,AMA）、碱性磷酸酶（alkali phosphatase，ALP）及肝脏HE染色验证模型。磁珠分离小鼠脾脏CD4^＋T细胞，分别以ConA和anti—CD3体外诱导细胞凋亡；实时荧光定量PCR测定T细胞中凋亡相关基因Fas、FasL和TRAIL（tumor necrosis factor-related apoptosis—inducing ligand）的表达；Westernblot检测CD4^＋T细胞中抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果poly I：C注射16周后模型组小鼠血清AMA均为阳性，同时肝组织汇管区出现不同程度的炎性细胞浸润，而对照组AMA均为阴性，肝组织未出现明显病变。模型组小鼠血清ALP[（110．4±18．3）U／L]显著高于对照组[（52．2±15．4）U／L]，P〈0．001；模型组小鼠脾CD4^＋T细胞AICD显著低于对照组（P〈0．001），同时定量PCR结果表明：FasLmRNA水平较对照组有所降低（P〈0．05），而两组Fas水平差异无统计学意义（P〉0．05），TRAIL水平则显著低于对照组（P〈0．001）；Westernblot结果表明模型鼠的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达较对照组显著增高。结论TH1细胞的凋亡缺陷可能在PBC小鼠模型的发病机制中有重要作用，该缺陷可能是由于自身免疫机制引起凋亡相关分子Fas体系及TRAIL的表达变化引起，同时通过上调Bcl-2的表达抑制自身反应性T细胞的凋亡。; 蒋廷旺邓安梅吴传勇陈波周晔钱琤谷明莉陈燕仲人前; 关键词：聚肌胞苷酸凋亡

大肠杆菌发酵生产重组人颗粒溶素被引量：1: 2007年; 目的:在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS株,生产重组颗粒溶素(GNLY)。方法:选取含pET28a(+)-GNLY的BL21(DE3)pLysS菌株单个克隆分级培养,将制备的二级种子液接种于发酵罐中。在发酵过程中,控制溶氧为30%～50%,温度为37℃;在基础培养基内生长4h后,补加以甘油为碳源的补料,继续生长到11h;加入葡萄糖至终浓度为1%,30℃诱导表达6h;收集菌体,纯化制备目的蛋白。利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性,用CFU方法检测其生物学活性。结果:发酵液中最终菌体密度达80g/L;纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%,含量为60mg/L;经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性。结论:用含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达系统,可得到具有生物活性的重组颗粒溶素,为大批量生产提供了条件。; 钱陈孙孝周晔陈燕谷明莉邓安梅仲人前; 关键词：颗粒溶素分批补料发酵培养重组蛋白质

自身抗原gp210融合蛋白的重组表达及其临床应用研究被引量：5: 2007年; 目的重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床诊断和病情监测。方法针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a(+),构建重组表达载体PET28a(+)-gp210,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋白,进一步经Ni2+亲合层析柱纯化。应用重组gp210融合蛋白建立间接ELISA,检测PBC患者血清中的抗gp210抗体。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PET28a(+)-gp210重组质粒。经SDS-PAGE、Western-blot鉴定,获得了具有免疫原性的重组gp210融合蛋白。经ELISA检测,PBC患者中抗gp210抗体的阳性率为40.5%,与疾病对照组及正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。PBC患者临床资料分析表明,抗gp210阳性患者中IgM浓度显著高于抗gp210阴性患者;经UDCA治疗后,28位PBC患者中,3例抗gp210抗体由阳性转为阴性,9例抗gp210抗体持续阳性,1例抗gp210抗体由阴性转为阳性,16例抗gp210抗体持续阴性;其他临床症状与抗gp210抗体无显著相关。结论应用重组gp210融合蛋白建立ELISA检测自身抗体,对PBC诊断具有较好的特异性,为PBC的临床诊断和病情监测提供了有力依据。; 周晔蒋天舒陈燕陈波谷明莉仲人前邓安梅; 关键词：PBC 自身抗原 GP210 重组融合蛋白

特发性血小板减少症患者外周血单个核细胞穿孔素表达水平研究被引量：1: 2013年; 目的研究穿孔素是否参与了特发性血小板减少症(ITP)的发病机制。方法采用RT-PCR法检测了35例特发性血小板减少症患者和45例健康个体外周血单个核细胞(PBMC)内穿孔素mRNA的表达,以免疫印迹法检测穿孔素蛋白含量。采用ELISA法检测受试对象血浆IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α水平。以Spearman法分析穿孔素与上述细胞因子以及血小板计数的关系。结果与健康对照组比较,ITP患者PBMC中穿孔素蛋白和mRNA的表达均较健康个体增高(P<0.01)。穿孔素蛋白水平与IFN-γ、TNF-α水平均呈正相关(P<0.01),与血小板计数呈负相关(P<0.05),与IL-4、IL-10水平无相关性(P>0.05)。结论穿孔素参与了ITP的发病机制。; 杜朝阳李虎张薇薇叶辛谷明莉徐玉莲邓安梅钱宝华; 关键词：穿孔素白细胞介素4 白细胞介素10 逆转录聚合酶链反应

定量RT-PCR检测PBC患者外周血中颗粒溶素的基因表达水平被引量：3: 2006年; 目的建立检测人颗粒溶素(granulysin,GNLY)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并测定PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY的基因表达水平,探讨GNLY基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primarybiliary cirrhosis)发生发展的关系。方法基于TaqMan荧光探针技术,构建质粒pET28a-GNLY,作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。用此方法测定了60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化及60例健康对照者外周血中GNLY mRNA的含量。结果PBC患者GNLY mRNA的表达范围为5.35×107-4.61×109拷贝/μg RNA;健康对照者为9.28×105-7.32×107拷贝/μg RNA。PBC组GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组(P<0.01)和疾病对照乙型肝炎肝硬化组(P<0.001)。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法,PBC患者GNLY mRNA的含量显著高于健康对照组,GNLY表达与PBC的发生发展存在一定的关联性。; 钱琤陈波陈孙孝周晔王燕谷明莉吴传勇蒋廷旺陈燕邓安梅仲人前; 关键词：PBC 逆转录-聚合酶链反应

原发性胆汁性肝硬化患者外周血T细胞microRNA表达谱变化被引量：9: 2012年; 目的观察原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血T细胞中微小RNA（microRNA，miRNA）表达谱的变化。方法选取20例PBC患者，收集同期20份健康人外周血作对照。应用芯片技术筛选PBC患者外周血T细胞中表达差异的miRNA，并用实时定量PCR进行验证。结果与健康对照组相比，PBC患者外周血T细胞中有25个miRNA表达失调，其中有23个下调，仅有2个上调（均P〈0．05）。定量PCR显示，miR-346、miR-17-5p、miR-20a和miR-let-7b表达显著低于健康对照，而miR-451和miR-129表达显著高于健康对照，与芯片结果一致。结论PBC患者外周血T细胞miRNA表达与健康对照比较存在差异，这些异常表达的miRNA可能参与PBC的发病。; 钱琤汪怀周范华杰谷明莉任传路邓安梅仲人前; 关键词：胆汁性微RNAS 自身免疫疾病

STING在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义被引量：2: 2016年; 目的探讨刺激干扰素基因（STING）在原发性胆汁性肝硬化（PBC）中的表达及其潜在的临床意义。方法纳入2014年1月～2015年10月期间在上海长海医院和长征医院就诊的PBC患者28例，平均年龄32.5＆#177;11.3岁，纳入同期体检的健康对照28例，平均年龄37.5＆#177;13.7岁。分离单个核细胞（PBMC），采用实时荧光定量PCR检测 STING mRNA表达水平；采用Spearman检验分析STING表达水平与PBC患者临床指标的相关性；随访5例初诊的PBC患者，观察临床治疗前后 STING表达水平的变化。结果与健康对照组相比，STING mRNA在 PBC患者 PBMC中显著增高，在Ⅲ期和Ⅳ期中的表达显著高于 I期和Ⅱ期，差异有统计学意义（U＝0.00，P＜0.05）。STING mRNA水平与患者 Mayo评分、GGT正相关（R＝0.45，R＝0.42，P＜0.05），与 AST，ALT和 ALP无相关性（R＝0.33，0.21，0.27，P＞0.05）。临床治疗有效后，STING mRNA的表达量显著降低，差异有统计学意义（U＝0.00，P＜0.05）。结论 STING可能参与了PBC的发病机制。; 陈燕谷明莉叶辛李腾达邓安梅; 关键词：原发性胆汁性肝硬化干扰素

隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体的免疫原性研究: 2008年; 目的探讨纯化的隐球菌抗原肽GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型隐球菌疫苗的研制打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的GMFDGLSGV单体、二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定重组多聚体的免疫原性。结果10例HLA-A*0201阳性个体PBMC对八聚体的平均SI为37.4±3.07;增殖反应明显高于四聚体(平均SI为20.1±1.37)、二聚体(平均SI为14.1±1.06)、单体(平均SI为11.4±0.68)以及阴性对照(平均SI为1±0.10)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在抗原肽诱导的CTL细胞毒活性中,HLA-A*0201阳性个体PBMC对八聚体、四聚体、二聚体、单体及阴性对照组均表现不同程度的杀伤活性,平均活性分别为48.1±4.28、23.9±2.20、16.3±1.27、13.1±1.10、1.0±0.1(P<0.01)。结论本研究得到的重组优化八聚体具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性,为进一步开发有效的隐球菌疫苗打下了基础。; 谷明莉钱周晔陈波陈孙孝邓安梅仲人前; 关键词：结核分枝杆菌多聚体疫苗

重症肌无力患者外周血中性粒细胞／淋巴细胞比值和血小板／淋巴细胞比值的临床意义被引量：6: 2016年; 目的探讨重症肌无力（MG）患者外周血中性粒细胞／淋巴细胞比值（NLR）和血小板／淋巴细胞比值（PLR）的临床意义。方法选取2013年1月～2014年12月期间长海医院收治的54例MG患者及体检的57名健康成人归为MG组及对照组。比较两组及不同临床分型MG患者的WBC计数、NLR及PLR，通过受试者工作曲线（ROC）曲线下的面积评价各指标对MG的诊断价值。结果MG组的WBC计数、NLR及PLR分别为（6．85±0．37）×10^9／L，2．48±0．19和118．79±6．38，显著高于对照组（5．87±0．12）×10^9／L，1．59±0．06和102．01±3．45（P〈0.05）。WBC计数、NLR及PLR的ROC曲线下面积分别为0．559，0．717和0．58]。Ⅲ或Ⅳ型的PLR显著高于Ⅰ型，Ⅱ型（P〈0．05）。结论MG患者的NLR和PLR均显著升高，NLR的诊断价值更高，PLR可能与疾病严重程度有关。; 刘挺挺李虎马炜陈燕谷明莉张蕾邓安梅; 关键词：重症肌无力炎症

原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD14~+CD16~+单核细胞的表达及临床意义: 目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血CD14~+CD16~+单核细胞的表达及其临床意义。方法:采用流式细胞术分别检测35例PBC患者和32例健康对照者外周血...; 张蕾方超平朱荣荣陈燕谷明莉邓安梅; 关键词：原发性胆汁性肝硬化; 文献传递

谷明莉

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