许玉玲
- 作品数：15 被引量：30H指数：3
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- 人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2启动子区CpG岛的甲基化状态
- 2012年
- 目的探讨人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中Foxa2的表达改变及其启动子区CpG岛的甲基化水平变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞[第22代细胞,即22 PDL(populationdoubling levels,群体倍增水平)]组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。用荧光定量PCR方法检测人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2的mRNA表达改变,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测启动子区-777～-478 bp甲基化的变化情况,并用亚硫酸氢盐修饰基因组结合克隆测序检测启动子区域CpG岛的甲基化水平。结果与年轻细胞组比较,中年细胞组人胚肺成纤维细胞Foxa2 mRNA的表达水平无明显变化;而复制性衰老细胞组和早衰细胞组人胚肺成纤维细胞Foxa2的mRNA表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。早衰细胞组的启动子区具有一定的甲基化水平;年轻细胞组、复制性衰老细胞组及早衰细胞组Foxa2启动子区CpG岛的甲基化水平分别为5.7%,17.1%和43.6%。结论人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2的mRNA表达水平逐渐降低,其启动子区CpG岛甲基化水平逐渐升高,参与其表达调控。
- 张文娟纪卫东杨淋清许玉玲庄志雄
- 关键词：细胞衰老早衰甲基化
- 细胞复制衰老与H_2O_2诱导细胞早衰过程中P66^(SHC)基因表达谱及组蛋白修饰研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究细胞复制衰老与H2O2诱导细胞早衰过程中P66SHC基因表达变化及复制衰老过程中组蛋白修饰改变。方法人胚肺成纤维细胞固定传代直至停止增殖以制备复制衰老模型,过氧化氢诱导细胞早衰模型。采用Q-PCR方法动态观察细胞复制衰老与早衰过程中P66SHC以及组蛋白乙酰化酶EP300和去乙酰化酶HDAC1的基因表达,采用染色质免疫沉淀技术观察年轻细胞与衰老细胞P66SHC基因启动子区的组蛋白修饰情况。结果 P66SHCmRNA表达与染毒剂量正相关(R=0.909,P=0.000),EP300表达与染毒剂量负相关(R=-0.922,P=0.000),HDAC1与染毒剂量不相关(R=-0.066,P=0.839)。P66SHC表达与群体倍增代数正相关(R=0.743,P=0.006),EP300表达和HDAC1表达与群体倍增代数负相关(R=-0.709,P=0.010;R=-0.599,P=0.040)。与复制衰老组相比,早衰组细胞P66SHC、EP300及HDAC1的基因表达量均有显著性差异(t=-19.733,P=0.000;t=11.103,P=0.000;t=9.728,P=0.001)。老年细胞的P66SHC基因调控区的H3组蛋白修饰丰度均降低;在转录起始点上游3.0kb处抑制基因转录的H3K9-tri-Me修饰几乎为零,选择启动子(转录起始点下游3.8kb)处的组蛋白修饰以活化转录的修饰为主。结论 P66SHC、EP300和HDAC1均可能参与细胞衰老和氧化应激诱导的细胞早衰,早衰组细胞P66SHC基因表达与复制衰老组不同;组蛋白修饰参与P66SHC的基因表达调控。
- 徐薇庄志雄杨建平杨琳清许玉玲张文娟
- 关键词：过氧化氢
- 细胞衰老过程中P53表观遗传学修饰被引量：4
- 2009年
- 目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P53的表观遗传学修饰。方法荧光定量采用聚合酶链式反应法(PCR)检测P53的mRNA表达,甲基化特异PCR检测启动子区甲基化改变情况,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其组蛋白修饰,包括组蛋白H3,H4乙酰化和H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果细胞复制性衰老过程中,P53的mRNA表达在中年细胞组显著升高,复制性衰老细胞组也升高,早衰组无明显改变;细胞复制性衰老过程中,其启动子区-820 bp^-656 bp甲基化水平随增龄而降低,早衰组降低明显;复制性衰老细胞组及早衰组的组蛋白修饰在启动子区-889 bp^-676 bp以组蛋白H3(Lys4)甲基化修饰为主;-199 bp^-30 bp的修饰,复制性衰老细胞组以组蛋白H3,H4乙酰化修饰为主,早衰组以H4乙酰化,H3K4甲基化修饰为主。结论细胞衰老过程中,P53启动子区组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰存在调控机制的差异。
- 张文娟纪卫东杨淋清杨建平许玉玲徐薇庄志雄
- 关键词：细胞衰老P53甲基化乙酰化
- 人胚肺成纤维细胞衰老过程中胰岛素样生长因子2表观遗传活化作用
- 2010年
- 目的观察体外培养人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导早衰持续阶段胰岛素样生长因子2(IGF2)表观遗传学修饰。方法荧光定量PCR检测IGF2的mRNA表达,甲基化特异PCR检测其启动子区甲基化改变,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化,H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果细胞复制性衰老过程中,中年细胞组及复制性衰老细胞组IGF2的mRNA表达升高,早衰持续组升高显著;细胞衰老过程中,仅复制性衰老细胞组在启动子区-658～-456bp具有一定的甲基化水平;复制性衰老细胞组的组蛋白修饰在启动子区-856～-634bp以H4乙酰化,H3甲基化修饰为主;+9～+145bp的修饰,复制性衰老细胞组受组蛋白H3及H4甲基化联合修饰,早衰持续组以H3甲基化修饰为主。结论细胞衰老过程中,IGF2启动子区组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。
- 张文娟纪卫东杨淋清许玉玲张文姬庄志雄
- 关键词：细胞衰老胰岛素样生长因子2
- 细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中基因组DNA甲基化水平改变被引量：3
- 2010年
- 目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的细胞早衰过程中基因组DNA甲基化及甲基转移酶DNMT1的表达改变。方法应用5-甲基胞嘧啶免疫荧光法及[3H]甲基掺入法检测细胞衰老不同阶段细胞基因组DNA整体甲基化变化趋势,以Q-PCR和Western Blot方法检测DNMT1的mRNA和蛋白表达变化。结果细胞复制性衰老过程及早衰过程中,与年轻细胞组相比,5-甲基胞嘧啶免疫荧光强度逐渐降低,[3H]甲基掺入实验结果显示,甲基化的CpG%分别为年轻细胞组68.2%,中年细胞组41.9%,复制性衰老组16.1%,而早衰起始组63.5%,早衰持续组18.0%。DNMT1的mRNA和蛋白表达水平一致,在细胞复制性衰老过程中,DNMT1表达呈下降趋势,复制性衰老细胞组表达水平最低,而早衰起始组DNMT1表达显著升高,早衰持续组又降低至同复制性衰老组水平。结论本试验条件下,在细胞复制性衰老及早衰过程中,基因组DNA甲基化水平逐渐降低,基因组低甲基化是衰老细胞的伴随状态,与DNMT1水平降低有关。
- 张文娟纪卫东杨淋清许玉玲张文姬庄志雄
- 关键词：细胞衰老DNMT1人胚肺成纤维细胞
- 细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究被引量：3
- 2008年
- 目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用。方法在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/LH_2O_2处理,每天用H_2O_2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol/L H_2O_2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组。荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其启动子区-846639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在P16启动子区,第一外显子上游-1000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-846～-639 bp之间,长度为208 bp。中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、047,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79。在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16IP2启动子区(-229～-60 bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主。结论细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。
- 张文娟纪卫东杨淋清杨建平许玉玲徐薇庄志雄
- 关键词：细胞衰老基因P16甲基化乙酰化
- 人胚肺成纤维细胞衰老过程中P66Shc启动子区组蛋白修饰变化
- 2012年
- 目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰。结果与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。在P66Shc IP1启动子区(-1 641～-1 392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰。结论在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。
- 张文娟纪卫东杨淋清许玉玲庄志雄
- 关键词：细胞衰老P66SHC乙酰化
- 人胚肺成纤维细胞衰老过程中P66Shc启动子区CpG岛甲基化状态被引量：1
- 2011年
- 目的探讨人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中P66Shc的表达改变及其启动子区域的甲基化水平变化。方法荧光定量PCR方法检测细胞衰老过程中的mRNA表达改变,甲基化特异性PCR(MSP)定性检测甲基化的变化情况,亚硫酸氢盐修饰基因组结合克隆测序定量检测启动子区域CpG岛甲基化水平。结果人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中,P66Shc的mRNA表达水平逐渐升高,中年细胞组及复制性衰老细胞组mRNA表达分别升高至1.78和1.73倍,而早衰组却显著增高,至7.16倍;年轻细胞组、复制性衰老细胞组及早衰组P66Shc启动子区域CpG岛呈高甲基化水平,分别为94%、90%和90%。结论人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中P66Shc的mRNA表达水平逐渐升高,其启动子区CpG岛呈高的甲基化水平,不参与该基因表达调控。
- 张文娟纪卫东杨淋清许玉玲庄志雄
- 关键词：细胞衰老早衰P66SHC甲基化
- 人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2启动子区组蛋白修饰变化被引量：1
- 2013年
- 目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段Foxa2启动子区的组蛋白修饰变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。采用荧光定量PCR检测Foxa2的mRNA表达水平,染色质免疫沉淀方法检测其启动子区IP1(-740 bp^-596 bp)、IP2(-187 bp^+84 bp)的组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化及H3(Lys4)、H4(Lys20)甲基化修饰。结果与年轻细胞组比较,复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞Foxa2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05),中年细胞组无明显变化。在Foxa2 IP1启动子区,衰老的细胞具有降低的H3组蛋白乙酰化和增加的H4(Lys20)甲基化修饰;在IP2启动子区,衰老的细胞具有降低的H3(Lys4)甲基化修饰特征。结论在细胞衰老过程中,Foxa2启动子区特异的组蛋白修饰参与调控其mRNA表达水平。
- 张文娟纪卫东杨淋清许玉玲欧艺庄志雄
- 关键词：细胞衰老乙酰化甲基化
- 过氧化氢诱导HPF细胞早衰模型与细胞复制性衰老的生物学性状比较研究被引量：3
- 2013年
- 目的研究过氧化氢诱导HPF细胞早衰与细胞复制性衰老的生物学性状异同。方法 200μmol/L H2O2染毒HPF细胞4次制备过氧化氢诱导细胞早衰模型;常规培养细胞,固定传代,直至细胞停止增殖以制备细胞复制性衰老模型。动态观测两种模型细胞的生长形态、生长特性、细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶染色及细胞周期的变化情况。结果细胞复制衰老模型在群体倍增次数(population doubling level,PDL)至54代时细胞停止增殖,200μmol/L H2O2诱导细胞在PDL34进入衰老;正常细胞的细胞周期PI指数与群体倍增次数负相关;与PDL50组细胞相比,200μmol/LH2O2染毒组细胞的群体倍增时间和β-半乳糖苷酶染色差异均无统计学意义(P>0.05),PI指数差异有统计学意义(P<0.05)。结论 200μmol/L H2O2可诱导细胞早衰,其生物学性状与细胞复制性衰老模型不完全一致。
- 徐薇庄志雄杨建平杨琳清许玉玲张文娟
- 关键词：Β-半乳糖苷酶细胞周期
