章国平 作品数:11 被引量:7 H指数:2 供职机构: 兰州大学 更多>> 发文基金: 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 国家大学生创新性实验计划 中央高校基本科研业务费专项资金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
一种无标签结核杆菌融合蛋白ESAT6-RpfE及其制备方法和应用 本发明公开了一种无标签结核杆菌融合蛋白ESAT6-RpfE,是序列表中序列2的蛋白质,并提供了其制备方法和制备疫苗的应用。本发明选用的结核分枝杆菌早期分泌蛋白ESAT6,是抗结核免疫反应的主要配体,有较强的免疫原性和免疫... 祝秉东 李志 达泽蛟 章国平 张颖 王秉祥 胡丽娜文献传递 一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用 本发明公开了一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用。本发明的有益效果为:本发明提供的混合佐剂DDA/PolyI:C,能够有效增强融合蛋白AMM的抗原特异性IFN-γ的分泌水平,减轻H37Rv... 祝秉东 达泽蛟 牛红霞 辛奇 于红娟 李青 章国平 李志 刘万波 张颖文献传递 一种无标签结核融合蛋白TB10-TB8 本发明涉及一种无标签结核融合蛋白TB10-TB8,利用基因工程技术,将结核分枝杆菌的基因TB10.4和TB8.4进行重组融合,构建重组质粒pET30a-TB10.4-TB8.4,进行诱导表达,获得重组基因的表达物,最后将... 祝秉东 章国平 胡丽娜 王秉翔 达泽蛟 高娃 张颖 万艳文献传递 结核分枝杆菌培养滤液蛋白21(CFP21)的基因克隆、表达及纯化 被引量:1 2011年 目的构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白21(Culture filtrate protein 21,CFP21)原核表达载体,获得CFP21蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,PCR扩增cfp21基因,质粒PET28a(+)为表达载体,构建PET28a(+)/cfp21质粒,转化入大肠埃希菌DH5α中,抽提质粒,PCR扩增,测序,转化到大肠埃希菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,并用His Bind蛋白纯化试剂盒纯化CFP21。结果构建、表达和纯化了CFP21,分子量约为24kD,主要以包涵体形式存在。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,纯化得到CFP21蛋白,为CFP21的进一步研究奠定基础。 谢富佳 谭继英兰州大学结核病研究中心 梁正羽 乔梅 祝秉东 吴玉敏 杨燕 章国平关键词:结核分枝杆菌 基因克隆 蛋白表达 纯化 一种无标签结核融合蛋白TB10-Ag85B 本发明涉及一种无标签结核融合蛋白TB10-Ag85B,利用基因工程技术,将结核分枝杆菌的基因TB10.4和Ag85B进行重组融合,构建重组质粒,进行诱导表达,获得重组基因的表达物,最后将重组基因表达物进行纯化,克隆构建了... 祝秉东 章国平 胡丽娜 王秉翔 达泽蛟 辛奇 张颖 万艳文献传递 一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B 本发明涉及一种无标签结核融合蛋白ESAT6-Ag85B,利用基因工程技术,将结核分枝杆菌的基因ESAT6和Ag85B进行重组融合,构建重组质粒,进行诱导表达,获得重组基因的表达物,最后将重组基因表达物进行纯化,克隆构建了... 祝秉东 章国平 王秉翔 胡丽娜 达泽蛟 张颖 李小娟 唐克峰 万艳文献传递 结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究 被引量:2 2012年 目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA);第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+poly(I:C)+明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P<0.001);分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P<0.001)和BCG组(125.5±46.41;q=8.882,P<0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。 李志 达泽蛟 章国平 李瑞营 刘万波 苏娟 张颖 祝秉东关键词:亚单位 重组融合蛋白质类 细菌蛋白质类 细胞因子类 一种结核病家兔皮肤病理药物评价模型的构建方法 本发明公开了一种结核病家兔皮肤病理药物评价模型的构建方法,包括选择家兔,家兔注射免疫药物,在药物干预的15-20天进行卡介苗免疫注射和进行细菌性和病理学检查,从而构建病理模型。本发明的优点在于:建立了药物干预家兔皮肤结核... 祝秉东 张颖 孙虹佳 章国平 马兴铭 唐克峰 达泽蛟 雒艳萍文献传递 家兔皮肤液化病理模型与分枝杆菌毒力差异相关性研究及结核整合蛋白疫苗研究 1.家兔皮肤液化病理模型与分枝杆菌毒力差异相关性研究 目的:利用卡介苗BCG、结核分枝杆菌减毒株H37Ra、耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis(M. smegmatis)以及H37Ra互补株(分别... 章国平关键词:液化 亚单位疫苗 文献传递 CFP21-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用 被引量:4 2011年 目的用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)评价检测CFP21蛋白在结核分枝杆菌感染中的诊断效果,同时,比较CFP21、CFP10和ESAT6的应用价值。方法取28例临床确诊结核患者和26例健康志愿者外周血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用CFP21、CFP10和ESAT6蛋白刺激,定量检测PBMC分泌的特异性γ干扰素(IFN-γ)水平,判断结核分枝杆菌感染情况。用ELISA检测血清抗结核抗体。结果 ELISA检测结核病患者血清结核抗体阳性率为57.1%;以CFP21、CFP10和ESAT6为抗原,用ELISPOT方法检测结核病患者IFN-γ阳性率分别为25.0%、39.3%和32.1%。结论应用CFP21蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法有潜在的临床应用价值,但CFP21作为抗原用于结核分枝杆菌感染诊断的敏感性低于CFP10和ESAT6。 谢富佳 谭继英 乔梅 梁正羽 王世婷 唐克峰 祝秉东 杨燕 章国平关键词:结核病