瞿绍洪
- 作品数：26 被引量：58H指数：5
- 供职机构：浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项浙江省农业科学院科技创新能力提升工程项目更多>>
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- 利用共转化方法创制携带Pi9抗稻瘟病基因的无选择标记转基因水稻被引量：1
- 2020年
- 水稻稻瘟病是由子囊菌(Magnaporthe oryzae)引起的水稻灾害性病害。培育抗病品种是防治稻瘟病最经济有效的措施之一。水稻Pi9抗稻瘟病基因来源于小粒野生稻并已被克隆和应用于转基因育种。为了提高无选择标记转基因植株的选择效率,将绿色荧光蛋白(GFP)用作可视遗传标记,对双菌株共转化系统进行改良:目的基因载体携带Pi9抗稻瘟病基因;标记基因载体用潮霉素磷酸转移酶(HPT)作为植物转化选择标记,用GFP作为负选择标记,筛除标记基因分离植株。两种载体的农杆菌转化株混合,分别与水稻品种‘浙恢414’、‘浙粳22’、‘浙11B’、‘日本晴’、‘空育131’和‘粤泰B’的愈伤组织共培养,然后从5%~38.3%的起始愈伤组织筛选获得了转化愈伤组织(HPT+GFP+)。对T0植株进行Pi9基因PCR检测,11.8%~77.8%的T0植株为共转化植株(HPT+GFP+Pi9+)。对共转化植株T1代进行绿色荧光检测,筛选阴性植株(GFP-),再通过PCR筛选Pi9+植株。根据13个T1群体的研究结果,61%的共转化植株在T1代分离出无选择标记转基因植株(HPT-GFP-Pi9+)。转Pi9的无选择标记植株和后代株系对水稻稻瘟病呈抗病反应。因此,本研究通过GFP标记提高了双菌株共转化系统的选择效率,转Pi9的无选择标记水稻株系为水稻抗稻瘟病育种提供了有用的遗传资源。
- 潘龙玉李军王歆刘中来赵建华刘雄伦戴良英毛雪琴瞿绍洪
- 关键词：共转化
- 抗水稻黑条矮缩病毒三价RNAi表达载体的构建及转基因水稻的培育
- 2014年
- 水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)不同双链RNA片段的三价RNAi(RNA interference)表达载体在转基因水稻中的研究尚未见报道。本研究以RBSDV已报道不同双链RNA序列为基础,设计了针对S2、S6、S10三个基因共605 bp的RNAi靶序列,通过基因合成的方法获得相应的目的片段。利用Gateway~ LR Clonase^TM Ⅱ Enzyme Mix的LR反应将目的基因构建到RNAi载体pBDL03中,然后通过农杆菌转化法转到水稻品种泰粳394中。通过PCR和荧光验证共获得45株阳性苗。T1代植株RBSDV抗性鉴定结果证实针对S2、S6和S10基因的三价RNA沉默载体对RBSDV具有良好的抗性。本研究结果为利用RNAi技术进行植物抗病毒研究奠定了基础。
- 赵成金林艳虹瞿绍洪杨秀芬曾洪梅邱德文郭立华
- 关键词：RNA干扰转基因水稻GATEWAY技术
- 利用RFP标记进行水稻籼粳杂种偏分离的遗传分析被引量：3
- 2012年
- 为了研究水稻籼粳杂种偏分离的遗传基础,用转化红色荧光蛋白(RFP)的7个粳稻株系与籼稻杂交,以整合在不同基因组位点的RFP为可视遗传标记,对F1花粉及F2植株进行遗传分析。根据‘7F5’转基因系的研究结果,在粳稻‘日本晴’和籼稻‘9311’杂交的遗传背景中,水稻基因组chr02:33465170位置附近存在一个花粉偏分离位点。‘9A2’转基因系组配的籼粳杂种产生1∶1(RFP+∶RFP-)比例的花粉,并且其F2植株群体发生偏分离,说明相应RFP位点(chr04:29587748)附近有一个控制F2植株偏分离的连锁位点,该位点的遗传机制与F1的花粉比例无关。RFP标记提高了籼粳杂种花粉及后代植株的研究效率,为探索偏分离遗传机理提供了新的研究手段。
- 刘中来李军瞿绍洪
- 关键词：红色荧光蛋白转基因水稻籼粳杂种偏分离
- 一种利用水稻离体叶片进行纹枯病接种和抗性评价的方法
- 本发明设计了一种精确控制水稻离体叶片纹枯病接种条件的纹枯病接种和抗性评价方法，包括水稻种植、纹枯菌培养、纹枯病菌接种、水稻离体叶片接种后病情调查及统计、接种纹枯病菌水稻材料的取样、水稻RNA提取及RT-PCR鉴定等步骤，...
- 瞿绍洪马晨燕袁正杰杨海河何海燕张玉曲海艳
- 文献传递
- 共转化水稻植株T-DNA共整合结构的分子分析被引量：1
- 2013年
- 为研究共转化水稻的T-DNA共整合结构，本研究利用分别含有HPT、GFP和mCherry基因的T—DNA载体共转化水稻，从共转化植株获得了22个由两种T—DNA共整合形成的串联结构和25个关于相同T—DNA的多拷贝结构。序列分析结果表明，相邻T-DNA通过LRRL、RLLR和LRLR模式相互连接，由RB参与形成的T-DNA连接区均发生RB序列的完全缺失，在LB参与的T-DNA连接区，LB发生不同数目的碱基缺失或其3＇末端的1个C碱基发生C→T颠换，因而使T-DNA连接区表现多种变异类型。此外，伴随着RB或LB边界的完全缺失，其边界内侧序列也缺失1-643bp。在共转化水稻植株的T-DNA连接区不存在拟南芥相关报道所述的填充DNA序列。研究结果为深入解析禾谷类植物T—DNA共整合的分子机理奠定了重要基础。
- 赵建华李亚丽刘中来瞿绍洪
- 关键词：共转化转基因水稻
- 一种转化水稻抗病基因并获得无选择标记转基因后代的方法
- 本发明涉及一种转化水稻抗病基因并获得无选择标记转基因后代的方法，首先，将绿色荧光蛋白(GFP)与潮霉素磷酸转移酶(HPT)克隆于标记基因载体，目的基因置于另一T-DNA载体，携带标记基因载体的农杆菌菌株与携带目的基因载体...
- 瞿绍洪李军王歆赵建华何海燕刘中来
- 一种水稻稻瘟病抗性基因BDR1及其应用
- 本发明提供了一种水稻稻瘟病抗性基因BDR1及其应用，所述水稻稻瘟病抗性基因BDR1的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。上述水稻稻瘟病抗性基因BDR1所编码的蛋白，其氨基酸序列为SEQ I DNO.2。本发明的有益效果：...
- 瞿绍洪王岚岚徐国娟李利华
- 石竹烯和/或芳樟醇在防治稻瘟病中的应用
- 本发明涉及稻瘟病防治技术领域。本发明提供了石竹烯和/或芳樟醇在防治稻瘟病中的应用。采用石竹烯和芳樟醇两种萜类物质制备水稻抑菌剂，用于对稻瘟病的防治。相对于市面上现有抗菌剂产品，本发明的产品属于挥发性化合物，用于水稻的病害...
- 王岚岚李冉瞿绍洪毛俐慧李利华
- 水稻抗稻瘟菌HIGS表达载体的构建及遗传转化被引量：6
- 2015年
- 水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的抗病技术,即在寄主植物中表达可沉默病原物特定基因的HIGS载体,达到控制病原菌扩展的目的。本研究选取了两个稻瘟菌致病关键基因Nox1和NAC为研究靶标,分别克隆其UTR区和CDS区中的特异区段,利用Gateway技术构建这4个片段HIGS表达载体,再利用农杆菌介导法将各载体分别转化水稻,通过鉴定得到转基因阳性植株,为后续开展该技术在水稻抗稻瘟病方面的深入研究奠定了基础。
- 王梦颖刘敬瞿绍洪王旭丽王国梁
- 关键词：水稻稻瘟病
- 转mCherry基因水稻的遗传分析及T-DNA整合位点的研究被引量：8
- 2012年
- 为了建立转基因水稻的高通量遗传分析系统,本研究以粳稻成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,潮霉素磷酸转移酶(HPT)为抗性筛选标记,通过农杆菌介导的方法将红色荧光蛋白基因mCherry导入水稻。在水稻转化愈伤组织、转化植株(T0)和转基因后代(T1)均检测到红色荧光,证实mCherry在转基因水稻中稳定表达。139个独立转化株系的遗传分析表明,mCherry在转基因后代表现多种遗传模式,54%的转基因株系呈单位点遗传。TAIL-PCR进一步验证转基因整合到水稻基因组。根据T-DNA整合位点DNA序列分析结果,T-DNA左边界发生碱基缺失、增加和替换,右边界只发生碱基缺失,说明左边界比右边界有更多的碱基变异类型。此外,对T2代植株mCherry和HPT的转录水平进行实时定量逆转录PCR分析,结果表明,mCherry和HPT转录水平因T-DNA在水稻基因组中的整合位置而变化,表现位置效应。本研究在mCherry荧光蛋白和其它相关方法的基础上,为转基因水稻遗传及分子分析建立了一个高效的流程体系。
- 李亚丽刘中来周洁徐国娟瞿绍洪
- 关键词：水稻MCHERRY转基因T-DNA整合位点
