王龙梅
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用被引量：1
- 2015年
- 背景视网膜新生血管性疾病是多种眼科疾病的病理基础，迄今为止新生血管形成的发病机制尚不完全清楚。研究显示，视网膜新生血管形成过程中radixin表达量明显增加，因此推测在视网膜新生血管相关疾病中抑制或沉默radixin基因有望成为治疗的新方法。目的研究radixin小发卡（shRNA）干扰质粒对氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型视网膜中radixin基因表达的抑制作用，观察其对小鼠视网膜新生管形成的影响。方法将64只出生后7d的SPF级C57BL／6J小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组，其中模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠在体积分数（75±2）％的氧环境中饲养5d，建立OIR动物模型，正常对照组小鼠饲养于正常氧环境下。radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠于出生后第12天分别于玻璃体腔注射1μg radixin shRNA质粒和对照shRNA质粒，小鼠出生后第17天，对各组小鼠行FD-2000S血管造影术，制备视网膜铺片，观察视网膜血管形态和分布；摘取各组小鼠眼球制备视网膜切片，采用视网膜苏木精－伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核和新生血管；应用免疫组织化学染色法检测radixin在视网膜中的表达分布；分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测radixin mRNA及其蛋白在视网膜组织中的表达情况。结果正常对照组小鼠视网膜铺片显示视网膜血管走行正常，模型对照组小鼠视网膜后极部大片状无灌注区，可见大血管迂曲和血管壁荧光素渗漏和新生血管，shRNA质粒组小鼠视网膜可见无灌注区和微血管瘤，而radixin shRNA质粒组小鼠视网膜后极部无灌注区面积较小，血管迂曲和渗漏现象较模型对照组和shRNA质粒组明显减轻。视网膜组织病理学检查显示，模型对照组和shRNA质粒组小鼠视网膜内界�
- 王龙梅杨侠闫琳刘廷董晓光徐海峰
- 关键词：视网膜新生血管细胞骨架蛋白
- 高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型中根蛋白的表达变化
- 目的 探讨高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管形成过程中根蛋白(Radixin)的表达变化,为进一步研究视网膜新生血管疾病的防治方法提供理论基础.方法 将健康7d小鼠随机分为(1)高氧诱导组:7d小鼠置于氧浓度为7...
- 王龙梅闫琳杨侠董晓光徐海峰
- 关键词：高氧诱导C57小鼠视网膜新生血管化
- 高氧对小鼠视网膜新生血管模型中根蛋白的影响
- 2014年
- 目的探讨高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管形成过程中根蛋白(Radixin)的表达变化,为进一步研究视网膜新生血管性疾病的防治方法提供理论基础。方法将72只健康7 d龄小鼠随机分为2组,分别为:高氧诱导组:小鼠置于含氧体积分数为75%±2%的氧箱内饲养5 d构建高氧诱导视网膜新生血管动物模型;正常对照组:小鼠置于正常氧环境中饲养。待生后12 d、13 d、17 d、21 d、30 d分别处死小鼠。应异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FD-2000S)血管灌注造影视网膜铺片和HE染色观察视网膜新生血管的形态变化;应用免疫组织化学染色检测视网膜中Radixin的表达定位;应用RT-PCR和Westernblot检测不同时间点视网膜Radixin mRNA和蛋白表达情况。结果免疫组织化学染色结果显示两组Radixin均有表达,但高氧诱导组小鼠视网膜新生血管管壁、血管芽、内皮细胞和神经节细胞层Radixin大量表达。Real-time-PCR及Western-blot结果显示,不同组别和不同时间点间Radixin mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(mRNA:Fgroup=59.273,P=0.000,Ftime=538.071,P=0.000,Finteraction=297.126,P=0.000;蛋白:Fgroup=419.307,P=0.000,Ftime=663.946,P=0.000,Finteraction=354.538,P=0.000)。高氧诱导组小鼠生后12 d、生后13 d Radixin mRNA和蛋白表达水平均较正常对照组同龄小鼠低,差异均有统计学意义(均为P<0.01),生后17 d、生后21 d Radixin mRNA和蛋白表达水平均较正常对照组同龄小鼠明显增高,差异均有统计学意义(均为P=0.000)。正常对照组Radixin mRNA和蛋白的表达总体稳定在较低水平。两组生后30 d时Radixin mRNA和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P=0.058、0.082)。伴随着视网膜新生血管的增生和消退,Radixin mRNA和蛋白的表达水平均呈先升高后降低的趋势。结论 Radixin参与了视网膜新生血管的形成,可能会成为预防和治疗视网膜新生血管性疾病的新靶点。
- 王龙梅闫琳杨侠董晓光徐海峰
- 关键词：高氧小鼠视网膜新生血管
- 低氧对小鼠视网膜神经节细胞-5中根蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的观察低氧对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)-5中根蛋白(radixin,RDX)表达的影响,探讨低氧损伤中RGC的损伤机制和可能的保护途径。方法常规培养RGC-5,用RGC特异表面标记性抗原Thy-1鉴定;CoCl2法建立低氧模型,以含终浓度为100μmol·L-1CoCl2培养基培养RGC-5 3 h、6 h、12 h、24 h、48 h,采用Real-time RT-PCR和Western blot检测RDX mRNA及其蛋白在RGC-5中的表达情况,采用免疫荧光观察RDX在RGC-5细胞中的表达及定位。结果体外培养的RGC-5呈梭形或多边形,特异性表面标记性抗原Thy-1反应阳性。Real-time RT-PCR结果显示,低氧组RDX mRNA表达呈进行性增强,于低氧6 h达到高峰后开始下降;正常对照组RDX mRNA的相对表达量为1.00±0.11,低氧3 h、6 h、12 h、24 h、48 h分别为1.37±0.18、1.75±0.32、1.21±0.23、0.91±0.19、0.63±0.26,总体比较差异有统计学意义(F=813.717,P=0.000)。Western blot结果显示,不同培养条件下RGC-5细胞中RDX蛋白的总体比较差异有统计学意义(F=1.279,P=0.000)。低氧3 h、6 h、12 h、24 h组RDX/GAPDH A值均高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=55.301,P=0.000;t=139.986,P=0.000;t=37.552,P=0.000;t=4.183,P=0.014);低氧48 h组RDX/GAPDH A值(0.24±0.03)低于正常对照组(0.33±0.02),差异有统计学意义(t=38.889,P=0.000)。在低氧组内不同时间点比较,RDX/GAPDH A值随时间的延长呈逐渐上升趋势,于低氧6 h达高峰,然后开始下降,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光观察发现RDX蛋白阳性表达在RGC-5细胞中,与正常对照组相比,低氧组RDX的表达先增强(6h)后减弱。结论低氧条件下小鼠RGC-5细胞中RDX表达水平先升高后降低,可能与视网膜新生血管疾病中RGC凋亡相关。
- 闫琳王龙梅杨侠董晓光徐海峰
- 关键词：缺氧细胞活力
