Fibronectin差别黏附法筛选、纯化软骨终板干细胞 被引量:4 2013年 目的通过Fibronectin介导进行差别黏附筛选软骨终板干细胞,观察筛选的效果及其初步生物学性能。方法从脊柱融合术中获取椎间盘软骨终板标本,机械-酶消化法获取原代软骨终板细胞,体外扩增至第2代后接种于Fibronectin包被过的培养瓶,孵育20 min后将未贴壁细胞及培养液转移至新培养瓶再孵育40 min,吸弃未贴壁细胞及培养液,所得2瓶细胞进行体外扩增,流式细胞仪检测细胞表面标志物。对筛选后的细胞进行向多系细胞诱导分化。结果第2代细胞筛选前,细胞形态个体差异较大,呈三角形或多角形,融合时呈铺路石样外观,筛选后细胞形态比较均匀,形成细胞克隆群。流式细胞仪检测发现:经Fibronectin筛选后所获软骨终板干细胞CD90、CD73表达阳性率>95%,CD105表达阳性率>85%;经诱导能向骨、软骨及脂肪细胞方向分化。结论 Fibronectin筛选所得的软骨终板细胞基本符合国际细胞治疗协会对间充质干细胞的定义标准。Fibronectin差别黏附筛选法得够有效筛选、纯化软骨终板干细胞。 王海 黄博 周跃 李长青 王建关键词:纤维连接蛋白 退变椎间盘生物学特性研究进展 被引量:5 2013年 下腰痛(low back pain,LBP)是骨科常见多发病,约70%的人一生当中都曾发生过LBP,给社会带来了重大经济损失[1]。然而,LBP的发生机制至今仍然不清楚,一般认为椎间盘退变引起的疾病(disc de-generative diseases,DDD)是引起腰腿痛的最常见原因且以腰椎间盘突出为最常见[2]。现有研究表明DDD与多种因素有关,包括遗传因素、力学因素、环境因素、生活习惯、年龄和性别因素等,因此探讨退变椎间盘相关生物学特性具有重要的意义[3]。 王海 黄博 王建 李长青 周跃关键词:退变椎间盘 生物学特性 永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途 本发明属于细胞工程技术领域,具体涉及永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途。本发明要解决的技术问题是为构建永生化人软骨终板干细胞系提供一种有效的制备方法。本发明的技术方案是采用慢病毒转染技术构建永生化人软骨终板干细胞... 黄博 刘铭汉 王海 刘兰涛 周跃文献传递 椎间盘组织工程学种子细胞来源的研究进展 被引量:11 2012年 椎间盘退变(intervertebral disc degeneraton,IDD)所致腰腿痛是骨科的常见疾病,目前对IDD所致腰腿痛的治疗手段都属对症治疗,不能阻止或逆转椎间盘退变,因此不能从根本上解决椎间盘退变所致腰腿痛。椎间盘组织工程学旨在通过恢复或者重建椎间盘原有的生理结构及生物学功能,有望成为一种治疗IDD的有效手段,但组织工程研究和治疗需要大量的种子细胞,现有种子细胞来源有限,探索相对理想的种子细胞成为研究的热门。作者就种子细胞来源的研究进展综述如下。 王海 熊承杰 黄博 周跃 李长青 王建关键词:椎间盘退变 种子细胞 细胞来源 对症治疗 腰腿痛 DISC 感染条件下Wnt11/Ca2+信号通路在hMSCs成骨分化中的调控作用及机制研究 感染性骨不连是骨科的难题之一,随着开放性骨折的发生率增加,感染性骨不连也随之上升,据报道约5%~10%的骨折会发展为骨不连。感染性骨不连中感染和骨缺损同时存在,很难彻底治愈,给患者及社会带来了严重的身心健康损害和经济负担... 王海关键词:分化能力 WNT信号通路 文献传递 来源于人退变椎间盘的三种干细胞与BM-MSCs生物学特性及组织工程应用的比较研究 背景: 下腰痛(lowbackpain,LBP)是临床常见疾病,是导致劳动力丧失的主要原因之一,现在一致认为椎间盘退变性疾病(Degenerativediscdisease,DDD)是引起LBP最常见的原因。有报道发现... 王海关键词:下腰痛 干细胞 生物学特性 退变椎间盘 文献传递 人退变椎间盘软骨终板干细胞、制备方法及其应用 本发明提供一种从人退变椎间盘软骨终板中分离、纯化出具有多向分化潜能的干细胞,该干细胞与骨髓间充质干细胞生物学特性相似,经诱导能向骨、软骨及脂肪等方向分化,而且较骨髓间充质干细胞表现出更强的成骨和成软骨分化能力。软骨终板干... 黄博 王海 周跃文献传递 永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途 本发明属于细胞工程技术领域,具体涉及永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途。本发明要解决的技术问题是为构建永生化人软骨终板干细胞系提供一种有效的制备方法。本发明的技术方案是采用慢病毒转染技术构建永生化人软骨终板干细胞... 黄博 刘铭汉 王海 刘兰涛 周跃文献传递 改良简易法获取人退变椎间盘髓核细胞及生物学特点 被引量:1 2013年 背景:目前较常应用的原代髓核细胞培养方法,多应用Ⅱ型胶原酶联合胰酶消化法、单纯Ⅱ型胶原酶消化法等,但这些方法获取细胞数量偏少存在一定的缺限。目的:利用改良简易传统的方法从人退变椎间盘获取髓核细胞。方法:分离培养髓核细胞,每日倒置相差显微镜下观察髓核细胞形态,取原代和传代细胞培养悬液进行锥虫蓝细胞活性检测,分别于第1,3,5,7,9,11,13天采用MTT法测细胞生长情况,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞形态。结果与结论:成功分离出髓核细胞,成功传至P3代。原代细胞生长为梭形,P1及P2传代细胞形态多呈三角形或多角形,类似成纤维细胞形态,接近融合时呈铺路石样外观。锥虫蓝染色细胞活力测定原代分离时活力为99%,第3代细胞活力稍下降为93%-95%。髓核细胞随着传代的次数的增加,增殖活性逐渐降低,P2代和P3代在对数生长期相对P1代也逐渐趋于平缓。激光共聚焦显微镜观察细胞形态与相差显微镜观察的结果相似。结果提示,改良简易法相对于传统方法能可靠地获取人退变椎间盘多种细胞且所获细胞表现出了良好的生物学性能。 王海 黄博 周跃 王建 李长青关键词:髓核细胞 椎间盘 生物学性能 细胞生长曲线