王晓娟
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1
- 2011年
- 应用PCR技术扩增获得蚓激酶成熟肽基因F238,并将其克隆至大肠杆菌质粒pFT22bTrxA中,构建双顺反子表达载体pTrx-F238。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0mmol/LIPTG、30℃条件下诱导6h,经SDS-PAGE证实蚓激酶成熟肽蛋白获得了高效表达,所表达的蛋白产物相对分子量与预期的26kDa相符,且都是可溶性蛋白,表明分子伴侣TrxA起到了帮助目的蛋白正确折叠的作用。利用血纤维蛋白法对产物活性进行了测定,确定其不仅具有激酶作用,而且具有直接溶栓活性。最高活力可达180U/mL(尿激酶单位)。
- 王晓娟黎明高伟赵洪坤杜连祥路福平
- 关键词：蚓激酶可溶性表达
- 双顺反子翻译偶联表达载体的构建及蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：3
- 2011年
- 为了实现外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,利用硫氧还蛋白作为分子伴侣构建双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将大肠杆菌硫氧还蛋白基因插入到pET22b载体NdeI和EcoR I位点之间,同时在硫氧还蛋白编码基因的终止密码子前加入核糖体结合位点,构建成双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将蚓激酶基因F238克隆到该载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE结果表明,所表达的蚓激酶F238是可溶性蛋白。利用血纤维蛋白法对表达产物进行活性测定,重组蚓激酶F238不仅具有纤溶酶活性,而且具有激活纤溶酶原的激酶活性。该双顺反子翻译偶联表达载体的构建,为在大肠杆菌中可溶性表达外源蛋白提供了新方法。
- 黎明宋馨宇王晓娟刘建军张建中刘萌黄云雁
- 关键词：蚓激酶分子伴侣双顺反子可溶性表达
- 蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的表达及活性测定
- 应用PCR技术扩增获得蚓激酶成熟肽基因F238，并将其克隆至大肠杆菌质粒pET-22b(+)中，构建表达载体pET22b-F238。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，1.0 mmol/L IPTG、26℃条件下诱导...
- 杜连祥王晓娟周丽娜高伟
- 关键词：蚓激酶活性测定大肠杆菌PCR技术肽基因溶栓药物
- 文献传递
- 黑曲霉W3350脯氨酰内肽酶在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:构建pET-PEP重组原核表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法:采用RT-PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)W3350中扩增出脯氨酰内肽酶(PEP)的基因,插入表达载体pET-22b(+),经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和DNA序列测定验证,将正确的重组质粒转入大肠杆茵BL21(DE3)中,IPTG(终浓度1mmol/L)诱导获得表达。结果:表达产物进行超声破碎,经SDS-PAGE电泳检测,PEP分子质量大约为57kDa,与理论值相符,通过酶活方法测定脯氨酰内肽酶酶活为0.656U/ml,约是出发菌株的5倍。结论:首次成功构建表达载体pET-PEP并在原核细胞中表达,为进一步研究PEP的生物学功能奠定了基础。
- 周丽娜张鹭路福平王晓娟杨剑芳
- 关键词：RT-PCR黑曲霉脯氨酰内肽酶基因表达
- 一种降糖复方中药提取液中总多糖含量的测定被引量：5
- 2009年
- 目的建立分光光度法测定降糖复方中药提取液中总多糖的含量。方法紫外分光光度法，苯酚-硫酸法。结果该方法的线性范围为5～40μg／ml，r=0．9993，平均回收率为99．36％，RSD=3．15％。结论该方法简便易行，重现性良好。
- 高伟王晓娟刘翊杜连祥
- 关键词：总多糖紫外分光光度法
- 青霉素酶基因异源表达及该酶分解牛奶中残留青霉素的研究
- 2008年
- 以获得大量青霉素酶并将其用于分解牛奶中残留青霉素为目的,通过PCR方法从蜡样芽孢杆菌ATCC10987基因组中获得了青霉素酶基因,将该基因克隆至表达载体pET28a(+)中,并转化到E.coli BL21中;在IPTG诱导下对目的蛋白进行SDS-PAGE和酶活分析,结果显示最大酶活力可达到480.0 U/mL;利用Ni2+亲合层析柱纯化目的蛋白,纯化后的目的蛋白纯度超过90%;采用高碘酸钠氧化法制备固定化的青霉素酶,并利用该固定化酶将牛奶(含0.5U青霉素G/mL)中的青霉素分解到浓度小于4ppb程度。
- 赵洪坤杜连祥李玉王晓娟路福平
- 关键词：青霉素酶异源表达纯化
