王文倩
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
- 供职机构：南京师范大学更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生艺术更多>>
- 镉经内质网应激诱导肝细胞自噬及其与凋亡关系的初步研究
- 本实验室已有研究证明了低浓度镉(<10μM)可以诱导肝细胞自噬,并没有诱导细胞凋亡。但是镉诱导肝细胞自噬与内质网应激的关系当前还不清楚。本研究旨在探究镉是否经内质网应激引起WRL68细胞自噬,以及在WRL68细胞中自噬与...
- 王文倩
- 关键词：镉自噬凋亡
- 文献传递
- 镉诱导HEK293细胞自噬和凋亡被引量：3
- 2016年
- 目的探究镉(二氯化镉,Cd Cl2)能否诱导HEK293细胞自噬与凋亡以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和AKT蛋白在自噬中的作用。方法将绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)重组质粒转染至HEK293细胞24 h后,以Cd Cl22,4,8和10μmol·L^(-1)诱导细胞12 h,荧光显微镜观察自噬情况;以Cd Cl22,4,8和10μmol·L^(-1)诱导未转染GFP-LC3B重组质粒的HEK293细胞12 h,透射电子显微镜下观察自噬泡;Western蛋白印迹检测LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达变化,以及ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化表达;流式细胞仪检测Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))对HEK293细胞凋亡的影响。用3-MA(自噬抑制剂)预处理Cd Cl210μmol·L^(-1)诱导的HEK293细胞12 h,Western蛋白印迹检测细胞内激活型胱天蛋白酶3的表达。结果 Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))诱导HEK293细胞12 h,荧光显微镜下转染细胞出现绿色荧光点状聚集,电镜下观察到自噬泡,Western蛋白印迹检测到LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量增加(P<0.05,P<0.01),ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平均增加(P<0.05,P<0.01)。流式细胞仪检测出Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))诱导的HEK293细胞发生了细胞凋亡;加入3-MA20μmol·L^(-1)+Cd Cl210μmol·L^(-1)后,细胞自噬被抑制,激活型胱天蛋白酶3表达增加(P<0.01)。结论低浓度Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))能引起细胞自噬,可能通过ERK1/2和AKT蛋白介导细胞自噬;自噬与凋亡相伴发生,自噬可能抑制凋亡。
- 刘宣宣王文倩毛伟平
- 关键词：镉HEK293细胞自噬
- 黄梅戏中高胡伴奏艺术研究
- 黄梅戏与京剧、越剧、评剧、豫剧并称“中国五大戏曲剧种”，是安徽省的主要地方戏曲剧种，于2006年被列入第一批国家级非物质文化遗产名录。黄梅戏高胡作为黄梅戏伴奏中的主奏乐器，即“主胡”，在黄梅戏伴奏中担负着重要的职责。在黄...
- 王文倩
- 关键词：艺术风格演奏技法黄梅戏
- 文献传递
- pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建
- 2015年
- [目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。
- 刘宣宣王文倩毛伟平严浩孟素芳王芳
- 关键词：HEK293CELLS真核表达
- 抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建被引量：4
- 2013年
- [目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库。[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列。经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序。[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1 079 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础。
- 严浩王芳毛伟平王文倩孟素芳邵峦峦刘小綪
- 关键词：单链抗体核糖体展示技术原核表达
