王发明 作品数:8 被引量:24 H指数:3 供职机构: 福建农林大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 福建省自然科学基金 福建省科技计划项目 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
柚单染色体微分离制片技术研究 被引量:2 2010年 以“琯溪蜜柚”幼胚为材料,对单染色体微分离制片过程中3个关键因子对制片的影响效果进行了研究;分别设计了6个不同酶解时间、4个冰水固缩时间和两种不同染液染色处理,通过显微镜观察和拍照;结果表明:用2%纤维素酶与0.5%果胶酶的混合液处理40~60min,后低渗处理之后进行20~30min冰水固缩处理和卡宝品红染色组合可以得到理想的制片效果,背景干净,各单染色体充分分散,容易辨认和挑取;该方法制片适合小型单染色体开展下一步的微分离和微克隆研究。 王平 乔锋 王发明 柳燕挣 唐琦关键词:染色体制片 柚(Citrus grandis Osbeck)单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中外源污染的防控 被引量:2 2010年 对柚单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中外源DNA污染问题中不同试验用水、加接头连接前后步骤对水污染的敏感度以及LA-PCR形成的非特异性亮带现象进行对比研究。结果表明:8种试验用水中BT水(Bioteke,RNase-free and DNase-free Water)的防控效果最佳;水的质量对LA-PCR过程中接头连接之前的步骤影响最大,对加接头之后的步骤也有一定的影响;非特异性亮带为引物自连形成的多聚体,与外源污染无关。本试验通过对外源污染的来源和关键步骤实施严格防控,经过dot blot验证,使外源污染能够得到有效控制。这为建立高质量的柚单染色体文库奠定了基础。 王发明 王平 唐琦 柳燕贞 陈伟关键词:单染色体 外源污染 DOT BLOT 遗传多样性分析方法及其在常绿阔叶林优势种研究中的应用 被引量:10 2006年 介绍了等位酶技术、蛋白质测序、DNA测序、RFLP、SSR、ISSR、RAPD、AFLP、SNP等遗传多样性分析方法的基本原理与特点,综述了遗传多样性分析方法在我国常绿阔叶林优势种遗传多样性研究(种亲缘关系和分类;指纹图谱的建立及林木育种、遗传改良;生境影响及群落的更替演变规律;探讨濒危物种的保护机制)中的应用及前景. 许鸿川 王发明关键词:分析方法 常绿阔叶林 优势种 柚(citrus grandis Osbeck)单染色体AFLP分子标记体系及文库的建立 柚是我国重要的水果。柚遗传背景较复杂,生产周期长,一直以来难以建立精确的物理图谱,这为进行柚基因组学的研究、分子标记辅助育种以及克隆一些重要的园艺性状基因造成了困难,染色体微分离弄口微克隆技术的应用为柚类遗传学的研究提供... 王发明关键词:单染色体 常绿阔叶林优势种福建青冈的遗传多态分析 被引量:6 2007年 利用随机扩增多态DNA标记技术,对福建黄楮林自然保护区7个样地的福建青冈群体进行了基因组DNA多态性分析。从60条引物中共筛选出10个引物,获得随机扩增多态DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)扩增位点76个,多态性位点占48.68%,揭示了福建青冈群体具有较高的遗传变异水平。数据分析显示群体间的遗传距离处于0.099 1-0.230 8的范围内。应用DPS数据处理系统对环境因子进一步作对应分析研究,分析环境因子对群体遗传变异的影响,发现遗传距离越接近的群体,其所处的生态环境指标也越接近,表明了福建青冈群体间的遗传差异与生态环境间的差异具有明显相关性。 许鸿川 王经源 陈斌 王发明 林文雄 张健关键词:福建青冈 遗传多态 RAPD 柚(Citrus grandis Osbeck)单染色体LA-PCR-AFLP分子标记体系的建立 被引量:1 2010年 通过微分离和微克隆技术,对柚单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中反应程序、模板浓度等关键参数进行了优化和引物筛选。结果表明:退火温度较高的程序TD3[退火梯度:72℃→65℃30 s(-0.5℃/cyc)]扩增效果较好;稀释100倍(10 ng/μL)为最适模板量;10个引物对组合扩增多态性较好。对22条单染色体的AFLP多态性分析和dot-blot杂交验证,表明较好地构建了柚单染色体LA-PCR-AFLP体系。这为柚单染色体的识别和文库构建提供了试验基础。 王发明 王平 唐琦 柳燕贞 陈伟关键词:单染色体 常绿阔叶林优势种福建青冈RAPD反应体系的建立 被引量:6 2006年 以福建青冈幼叶为材料,利用改进的CTAB法提取福建青冈幼叶的总DNA,探索适合于随机扩增多态DNA标记(RAPD)扩增的反应体系.结果表明,福建青冈合适的RAPD反应体系为:反应体积15μL,含10 ng模板DNA、1.5 mmo.lL-1MgC l2、0.3μmol.L-1引物、0.3 mmo.lL-1dNTP、1 UTaqDNA聚合酶.扩增程序为:94℃预变性3 m in,然后于94℃变性30 s,37℃复性30 s,72℃延伸90 s,循环41次,最后于72℃延伸7 m in.应用上述反应体系进行福建青冈的RAPD扩增反应,扩增产物进行12 g.L-1琼脂糖凝胶电泳,EB染色后用紫外凝胶成像系统分析,可获得满意的指纹图谱. 许鸿川 王经源 陈斌 王发明 林文雄 张健关键词:常绿阔叶林 优势种 福建青冈 福建青冈林种子植物多样性研究 通过对福建省闽清县的福建青冈林保护区进行实地考察和统计分析,本区共有种子植物581个属,1029个种,物种多样性较丰富,分别占福建省种子植物属种的50.43%和30.82%。其中具有多种国家一级、二级保护植物和福建省重点... 王发明关键词:种子植物区系 物种多样性 福建青冈 文献传递