王刚
- 作品数：143 被引量：694H指数：23
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术生物学航空宇航科学技术更多>>
- 丙型肝炎病毒基因工程抗体研究
- 成军钟彦伟王刚刘妍施双双董菁李莉张玲霞陈菊梅
- 该课题组进行了丙型肝炎病毒基因工程抗体研究。研究HCV抗原靶位的基因工程抗体并进行人源化，为HCV诊断、治疗和预防开辟新途径。应用噬菌体抗体库技术，获得特异性的HCV人源化基因工程抗体。利用分子生物学和免疫学等技术进行上...
- 关键词：
- 关键词：丙型肝炎病毒人源基因工程抗体免疫组化
- 丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达被引量：20
- 2001年
- 利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。
- 成军施双双钟彦伟夏小兵王刚王琳刘妍陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白单链可变区抗体大肠杆菌
- 丙型肝炎病毒核心蛋白抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定被引量：7
- 2003年
- 为制备抗丙型肝炎病毒核心蛋白的抗独特型单链可变区抗体 (抗 IdscFv) ,采用噬菌体表面展示技术 ,将抗 HCV核心蛋白的单克隆抗体固相包被于Nunc板 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得可与HCV核心蛋白单克隆抗体结合的抗独特型人源单链可变区抗体的噬菌体集落。随机挑选 6 0个克隆 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验 ,对其进行免疫学检测和鉴定。获得与HCV核心蛋白单克隆抗体结合活性较强的抗 IdscFv阳性克隆 ,并对HCV核心蛋白特异性抗 IdscFv的编码序列进行测定分析。结果经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选 ,在随机挑选的 6 0个克隆中 ,有 2 0株克隆ELISA的吸光度(A4 5 0nm)值较高 ,这些噬菌体上清与牛血清白蛋白 (BSA)进行交叉反应后 ,确定了其中有 6株交叉反应较弱 ,结合 2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果 ,最后确定 1株阳性克隆 ,提取质粒 ,进行DNA序列测定 ,DNA大小为 76 8bp。本实验结果提示用噬菌体抗体库技术能够成功地获得抗 HCV核心蛋白的抗 IdscFv ,为开展用抗
- 钟彦伟成军王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白
- 应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位被引量：7
- 2003年
- 为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 5 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定 ,并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后 ,从随机筛选的 5 0个克隆中确定 10个阳性克隆 ,进行DNA序列测定 ,确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。
- 钟彦伟成军王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：噬菌体丙型肝炎病毒核心蛋白模拟表位抗原
- 丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定被引量：12
- 2002年
- 目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-IdscFv),为研制HCVE2的抗-IdscFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCVE2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCVE2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCVE2特异性抗-IdscFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-IdscFv与HCVE2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450nm)值较高(E11A450nm0.928,E14A450nm1.152,E17A450nm1.136,E28A450nm1.163,E53A450nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11A450nm0.044,E14A450nm0.062,E17A450nm0.166,E28A450nm0.012,E53A450nm0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(E28)阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCVE2的抗-IdscFv,本实验结果为开展用抗-IdscFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.
- 钟彦伟成军蔡炯王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白E2HCV噬菌体抗体库技术
- 丙型肝炎病毒NS4A抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定被引量：4
- 2003年
- 为探索新型治疗方法 ,制备抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A的抗独特型人源单链可变区抗体 (抗 IdscFv) ,采用噬菌体表面展示技术 ,将抗HCVNS4A单克隆抗体固相包被于Nunc板 ,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,随机挑选 82个克隆 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验 ,对其进行免疫学检测和鉴定 ,获得与HCVNS4A单克隆抗体结合活性较强的抗 IdscFv阳性克隆 ,并对HCVNS4A特异性抗 IdscFv的编码基因进行序列测定分析。结果 ,经过筛选 82个克隆中有 4 0株克隆ELISA的吸光度 (A4 5 0nm)值较高 ,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白 (BSA)进行交叉反应 ,确定其中有 7株交叉反应较弱 ,结合 2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果 ,最后确定 1株阳性克隆。提取质粒 ,进行DNA序列测定 ,DNA为 789bp。本实验结果提示 ,用噬菌体抗体库技术能够成功地获得抗HCVNS4A的抗 IdscFv,为开展用抗
- 钟彦伟成军王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒NS4A
- 应用基因表达谱芯片技术研究膦甲酸钠处理Jurkat细胞后的差异表达基因
- 2004年
- 目的 筛选膦甲酸钠处理人T淋巴细胞系Jurkat细胞后的差异表达基因。方法 应用基因表达谱芯片技术对膦甲酸钠处理的Jurkat细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行检测。结果 Jurkat细胞经膦甲酸钠处理后 ,所检测的 115 2条目的基因中 ,有 94条产生差异表达 ,其中 38条基因表达增强 ,5 6条基因表达降低。结论 应用基因表达谱芯片成功筛选了膦甲酸钠处理淋巴细胞后差异表达基因 。
- 刘妍成军王刚陆荫英王建军张喜全王祥建
- 关键词：膦甲酸钠免疫调节基因表达谱芯片
- 筛选与克隆丙型肝炎病毒NS5A蛋白结合蛋白的基因被引量：24
- 2003年
- 细胞内蛋白 蛋白的结合是丙型肝炎病毒 (HCV)与宿主肝细胞相互作用的分子生物学基础。HCV的非结构蛋白 5A(NS5A)被认为是一种HCV基因组编码的重要调节蛋白因子 ,参与HCV的复制、转录和信号传导等过程 ,但是它在HCV的致病及耐药等方面的作用还存有争议。为了进一步阐明这个多功能蛋白质与宿主蛋白的关系 ,作者采用酵母双杂交系统 3,在酵母细胞融合蛋白表达型人肝cDNA文库中进行筛选 ,得到 35个与NS5A特异性结合的阳性克隆 ,包括载脂蛋白、线粒体单体型基因、磷脂酸酸性磷酸酶等 11种已知功能蛋白质基因和 3个未知功能基因。
- 王琳李克成军陆荫英张键刘妍王刚洪源王贺芮莉莉
- 关键词：克隆丙型肝炎病毒NS5A蛋白结合蛋白基因酵母双杂交
- 杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶-2C的基因克隆化与序列分析被引量：6
- 2001年
- 目的 克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法 体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。以夏科氏利什曼原虫 (Leishmaniachagasi,Lc)的PP2C基因序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫PP2C基因序列特异性的引物。结果 以杜氏利什曼原虫的基因组为模板 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫PP2C的全长编码基因。基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株PP2C基因序列长度为 1317bp ,开放读码框架由 12 2 1bp组成 ,编码产物为 40 6个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的PP2C基因与来源于夏科氏利什曼原虫的PP2C氨基酸残基序列的同源性为 95 % (387/ 40 6 )。结论 本研究克隆了杜氏利什曼原虫的PP2C基因 。
- 成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟王琳杨继珍
- 关键词：杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶2C基因疫苗T细胞抗原基因克隆化
- 一种多无人机高精度匹配定位方法
- 本发明涉及一种多无人机高精度匹配定位方法，包括多无人机数据采集，基于POS数据的多航拍图像粗匹配，基于改进SIFT特征的多航拍图像精匹配及图像匹配定位等四个步骤。本发明综合应用了多无人机的POS数据和图像信息，基于POS...
- 郑锴殷少锋郑献民林宏旭刘邦陈光武王刚刘彬
